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    鹽酸多西環(huán)素在蛋雞中的殘留狀況研究

    2021-02-27 13:46:42張應(yīng)龍杜國輝馬鳳洲楊洪高孫德洋徐少梅
    山東畜牧獸醫(yī) 2021年2期
    關(guān)鍵詞:多西環(huán)素殘留量

    張應(yīng)龍,杜國輝,馬鳳洲,楊洪高,孫德洋,徐少梅

    (1.山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山東 濟南 250103;2.山東益遠藥業(yè)有限公司,山東 濟南;3.成都領(lǐng)美康動物藥品有限公司,四川 成都)

    目前,動物性食品安全問題已成為畜牧業(yè)發(fā)展的一個主要矛盾,人們愈來愈關(guān)注動物體內(nèi)的藥物殘留問題。鹽酸多西環(huán)素主要藥物成分是多西環(huán)素(Doxycycline,DOX)又名強力霉素或脫氧土霉素,系由土霉素 6-位上脫氧而制成的半合成而成,主要通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成而起到抗菌作用,對敏感菌,比如肺炎球菌、破傷風(fēng)桿菌、棒狀桿菌等革蘭陽性菌,以及大腸桿菌、巴氏桿菌、布魯桿菌,對立克次氏體、支原體、螺旋體等也有一定程度的抑制作用[1]。它作為半合成類抗菌藥,其抗菌活性和組織穿透力都表現(xiàn)強,并具有體內(nèi)分布廣、臨床上使用無明顯腎毒性副作用、半衰期較長、較高的生物利用度等諸多優(yōu)點,因此廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床[2]。隨著研究的深入,不少學(xué)者也發(fā)現(xiàn),多西環(huán)素不僅有抑菌作用,而且可能通過抑制炎癥因子、信號通路以及基質(zhì)金屬蛋白酶等機制,在組織再生、修復(fù),延緩組織退變等方面具有重要作用[3]。但多年來由于四環(huán)素類的廣泛應(yīng)用,臨床常見病原菌對本品耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重,包括葡萄球菌等革蘭陽性菌及多數(shù)革蘭陰性桿菌均產(chǎn)生耐藥性。多西環(huán)素與四環(huán)素類抗生素不同品種之間也存在著交叉耐藥。動物試驗表明多西環(huán)素有致畸性,體外試驗表明在一定濃度時有致突變的可能。為此,國家各部門對抗生素的使用限制出臺了各種規(guī)定[4]。多西環(huán)素在蛋雞產(chǎn)蛋期和奶牛泌乳期禁用,家禽肌肉中殘留限量為100 μg/kg。多西環(huán)素在牛、豬、家禽的體內(nèi)代謝方式基本相似,殘留標(biāo)志物為其原型本身。新修訂的獸藥藥典中規(guī)定了多西環(huán)素在牛、羊、豬的休藥期(WDT)暫定為 28 d[5]。總之,雖然多西環(huán)素殘留對人體可能造成傷害,屬于嚴(yán)控藥物,但由于多西環(huán)素在臨床上使用時有許多的優(yōu)點,且對于敏感菌所致的畜禽細(xì)菌性疾病的治療,效果顯著[6],因此在肉雞和蛋雞養(yǎng)殖中存在著一定的需求,臨床用藥完后其殘留情況的相關(guān)報道較少,對雞蛋中的藥物殘留也很少報道,本文對多西環(huán)素在蛋雞用藥后的肉類殘留及雞蛋中的殘留情況做了相關(guān)的試驗。旨在研究多西環(huán)素殘留在蛋雞肌肉中以及雞蛋中的殘留狀況。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗用蛋雞 品種新楊黑,440日齡產(chǎn)蛋雞48只,濟南諾恩食品有限公司提供。

    1.1.2 儀器設(shè)備 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有熒光檢測器、5.2 pH計;電子天平:感量為0.0001 g和 0.01 g;高速組織搗碎機;聚丙烯離心管;均質(zhì)器:10 000 r/min;離心機:5 000 r/min;固相萃取柱:Waters Oasis HLB小柱(6 ml,200 mg)或同類型小柱;固相萃取裝置帶負(fù)壓抽濾器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

    1.1.3 試劑 試劑均為分析純,試驗用水符合GB/T 6682中一級水標(biāo)準(zhǔn)。甲醇色譜純、正己烷、檸檬酸、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、咪唑、醋酸鎂、鹽酸HCL、優(yōu)級純冰醋酸。標(biāo)準(zhǔn)品:多西環(huán)素,純度>99 % 。

    1.2 方法

    1.2.1 給藥方式和劑量 使用含量為5 % 的鹽酸多西環(huán)素可溶性粉,2組分別加輔料 1和輔料 2按不同濃度使用3 d,停藥2 d,即從第5天開始每天檢測雞肉以及雞蛋中的鹽酸多西環(huán)素殘留含量,連續(xù)測6 d。樣品具體兌水量見表1:

    表1 給藥方式和劑量

    1.2.2 檢測樣品的取得及制備 48只產(chǎn)蛋雞分成2組,每組3只,從飲水機給藥后第5天開始,每天隨機抽取 6只雞蛋,雞蛋經(jīng)拍打器全部混勻后,取 3份蛋液樣品進行檢測。每天屠宰 3只雞,取其胸脯肉作為樣品,3只為 3個樣品。所有樣品裝入清潔容器細(xì)心管內(nèi),加封,-18 ℃以下冷凍保存。

    1.2.3 樣品處理與檢測 主要參考 GB/T 21317-2007[7]方法進行,將上述雞肉樣品、雞蛋樣品化開后分別稱取一定的量進行前處理,并提取。提取后的上清液進行凈化,凈化所用固相萃取小柱預(yù)先依次用 10 ml甲醇、10 ml蒸餾水、5 ml檸檬酸緩沖液活化,取 25 ml提取液上樣,控制速度在 20滴/min,10 ml蒸餾水洗滌,真空抽干,再用15 ml甲醇洗脫,收集洗脫液于100 ml的蒸發(fā)瓶中。40 ℃以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干,用 1 ml磷酸二氫鉀溶液溶解,經(jīng) 0.22 μm 微孔濾膜過濾,供測定。

    1.2.4 色譜條件和質(zhì)譜條件 (1)色譜條件:色譜柱:BEH C18(50 mm×21 mm,1.7 μm);柱溫:40 ℃;進柱量:1 μl;流速:0.3 ml/min;流動相及梯度洗脫條件見表 2。(2)質(zhì)譜條件:電離模式:電噴霧正離子;毛細(xì)管電壓:3.0 kV;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑溫度:350 ℃;脫溶劑氮氣流速:800 L/h;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);定性:定量離子對見表3。

    表2 流動相及梯度洗脫條件

    表3 定性、定量離子對

    2 結(jié)果與分析

    2.1 雞蛋中多西環(huán)素殘留檢測結(jié)果

    表4 雞蛋中多西環(huán)素殘留量 (μg/kg)

    從表 4可以看出,雞蛋中多西環(huán)素殘留值因藥物添加水平不一樣,添加藥物劑量大的一組第2組其殘留含量一直稍大于第 1組,從消除速度來看,蛋雞對多西環(huán)素的降解速率還是很快的,第1組6 d的消除速率為91.4 %,第2組6 d的消除速率為83.2 % 。

    2.2 雞肉中多西環(huán)素殘留檢測結(jié)果

    表5 雞肉中多西環(huán)素殘留量 (μg/kg)

    從表 5可以看出,雞肉中多西環(huán)素殘留值因藥物添加水平不一樣,添加藥物劑量大的一組第2組其殘留含量一直稍大于第一組,但遠小于相同組別雞蛋中的殘留值。從消除速度來看,蛋雞在肌肉中的降解速率更快,第1組6 d的消除速率達到 100 % ,第 2組 6 d的消除速率為98.4 % 。

    2.3 討論

    本試驗設(shè)計為輔料不同的含量為 50 % 的多西環(huán)素粉劑在蛋雞體內(nèi)的殘留情況,輔料的不同可能會影響到蛋雞吸收多西環(huán)素的水平,但無太多證據(jù)證明;但從本試驗中可以看到,肌肉中的多西環(huán)素殘留明顯少于雞蛋中,且在肌肉中的代謝速率很快,蛋雞應(yīng)用藥物連續(xù) 3 d后,經(jīng)過第4天的代謝,肌肉中的含量已經(jīng)顯示在國標(biāo)允許的范圍內(nèi),這與柳海[8]在多西環(huán)素藥物殘留在大黃魚體內(nèi)的消除規(guī)律一文中所述(多西環(huán)素在大黃魚體內(nèi)吸收、分布迅速,消除較快)相一致。而在雞蛋中的代謝以及藥物殘留水平遠高于肌肉,按照推算,在雞蛋中的多西環(huán)素殘留量仍將會持續(xù)數(shù)日才能滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求。這與王長青[9]用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中多西環(huán)素的殘留量結(jié)果相一致。

    3 結(jié)論

    本文通過對鹽酸多西環(huán)素在蛋雞中的殘留狀況初步研究,結(jié)果表明,多西環(huán)素在蛋雞肌肉中分布迅速,消除較快;在雞蛋中含量要遠高于肌肉中含量,雞蛋中的多西環(huán)素殘留量的消除需要一定的時間。因此,在肉雞或淘汰蛋雞養(yǎng)殖過程中可以使用多西環(huán)素,注意用藥時間即可。

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