從獸醫(yī)化驗員職業(yè)技能競賽分析禽流感HI試驗注意事項

朱國強　陳偉　邢林林　徐聰　張棟　陳靜　孫圣福

中圖分類號：S858.31? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C? ? 文章編號：1673-1085（2021）1-0032-02

為考核獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室操作人員的技能，2020年山東省動物疫病預(yù)防與控制中心舉辦了獸醫(yī)化驗員技能競賽，由全省16個市選拔16名獸醫(yī)化驗員參加競賽，血凝（HA）和血凝抑制試驗（HI）作為其中的一項技能操作進(jìn)行，從考核過程和檢測結(jié)果看，選手基本掌握了HA和HI的檢測技術(shù)，但也暴露了試驗過程中的一些細(xì)節(jié)性的問題。對此，本文將技能競賽中HI試驗過程中的注意事項敘述如下，以引起獸醫(yī)化驗員的重視。

1? 樣品和材料

1.1? 樣品? HI待檢血清樣品為10份，含陰性、弱陽性和強陽性3個不同滴度，由國家禽流感參考實驗室制備，由山東省動物疫病預(yù)防與控制中心統(tǒng)一編號和致盲;H5亞型禽流感血凝抑制抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司提供;移液器、血凝板等儀器和耗材由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院準(zhǔn)備和提供。

1.2? 判定依據(jù)? HI試驗依據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）中血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗技術(shù)進(jìn)行。

每份樣品滿分2分，檢測結(jié)果與參考值一致得2分，檢測結(jié)果與參考值誤差在±1個滴度范圍內(nèi)得1分，檢測結(jié)果與參考值相差超過±1個滴度不得分。

2? 結(jié)果

本試驗競賽流程包括從采集雞全血制備紅細(xì)胞、血凝試驗標(biāo)定H5亞型禽流感抗原效價，到HI測定樣品效價全部流程，主要考察選手采集雞血的熟練程度、移液加液的規(guī)范性、移液器、離心機的規(guī)范使用、感作時間和感作溫度的掌握以及血凝結(jié)果的判定、生物安全的注意等。HI選手得分情況見表1。

3? 分析與討論

從HI試驗操作成績看，選手主要扣分點集中在結(jié)果的準(zhǔn)確性>規(guī)范性>生物安全>紅細(xì)胞制備>操作規(guī)范性。

3.1? 操作規(guī)范性? 操作規(guī)范性是影響檢測結(jié)果的直接因素，從選手的操作看，問題主要集中在移液器的使用、移液不規(guī)范、移液器與TiP吸頭沒有卡緊方面，導(dǎo)致移液不準(zhǔn)確;加同樣液體順序沒有從低濃度到高濃度;移液器使用完，沒有調(diào)至最大量程，沒有放置在移液器架上;移液不熟練，尤其是加紅細(xì)胞時間過長，后期紅細(xì)胞沒有混勻，導(dǎo)致紅細(xì)胞前后濃度不一致。

3.2? 紅細(xì)胞制備? 紅細(xì)胞制備是整個試驗的第一步，紅細(xì)胞質(zhì)量直接決定抗原效價，進(jìn)而決定HI的檢測結(jié)果，從現(xiàn)場選手的操作情況來看，主要不足為以下幾點：①采血的熟練程度，部分選手采集雞血不熟練，采集的量不足;②抗凝劑添加時間，抗凝劑沒有預(yù)先加在注射器中，而是采集完雞血后再與抗凝劑混合，導(dǎo)致部分雞血溶血;③離心轉(zhuǎn)速，為了節(jié)省時間，將離心機轉(zhuǎn)速調(diào)大，導(dǎo)致紅細(xì)胞壓積過大，濃度過高;④洗滌紅細(xì)胞過于粗暴，導(dǎo)致紅細(xì)胞破碎，致使溶血。

3.3? 生物安全? 大部分選手對于實驗室的生物安全有較高的認(rèn)識，但也存在個別選手忽視生物安全的問題，如試驗過程中不帶帽子、口罩拉到口鼻以下、試驗過程中的廢棄物直接沒有倒在標(biāo)識“生物安全”的垃圾桶中。

3.4? 結(jié)果規(guī)范性? 主要是對于檢測結(jié)果的描述，如某份樣品HI結(jié)果為4log2，個別選手直接標(biāo)記為數(shù)字4，標(biāo)記不規(guī)范。

3.5? 結(jié)果的準(zhǔn)確性? 部分選手對于完全凝集和不完全凝集區(qū)分不清，導(dǎo)致4單位抗原配制過低;完全抑制和不完全抑制的認(rèn)知不清，導(dǎo)致檢測結(jié)果判定過高。

3.6? 其他影響因素? 從HI方法本身來看，也存在一定的局限性，如采用人為判定結(jié)果，主觀程度較高，人為影響因素較大;試劑本身的影響，HI方法抗原為標(biāo)準(zhǔn)化試劑，但4單位抗原需要進(jìn)行HA標(biāo)定，標(biāo)定過程中難免存在一定的差異;紅細(xì)胞需要選手自行制備，標(biāo)準(zhǔn)化程度低，濃度過高或者過低均會影響檢測結(jié)果。

4? 小結(jié)

獸醫(yī)實驗室承擔(dān)著動物疫病檢測和診斷、動物疫情和免疫狀況監(jiān)測、動物疫病防控科學(xué)研究等職責(zé)，對動物疫病防控發(fā)揮著重要的支撐作用。HI作為獸醫(yī)實驗室常用的檢測方法，常用于禽流感、新城疫等疫病的免疫效果檢測。獸醫(yī)化驗員作為獸醫(yī)實驗室檢測人員，操作的規(guī)范性直接決定檢測結(jié)果的正確與否。從本次技能大賽考核結(jié)果看，暴露了HI過程中一些不容忽視的細(xì)節(jié)，望廣大獸醫(yī)化驗員能夠在實際檢測中引以為戒，高度重視。

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