中藥影響實驗性自身免疫性腦脊髓炎CD4＋T細(xì)胞亞群分化的研究進(jìn)展

劉 楠，李 納，馬曉華，朱 琳，時程程

中藥影響實驗性自身免疫性腦脊髓炎CD4＋T細(xì)胞亞群分化的研究進(jìn)展

劉 楠，李 納，馬曉華，朱 琳，時程程*

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000

實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）是由CD4＋T細(xì)胞介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病，是國際公認(rèn)研究多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）的動物模型。CD4＋T細(xì)胞作為EAE模型的主要免疫應(yīng)答細(xì)胞，存在多個亞群，可分泌多種細(xì)胞因子，參與病情進(jìn)展。CD4＋T細(xì)胞增殖分化及功能紊亂與EAE發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。目前臨床尚無治療MS的有效藥物，多以對癥應(yīng)用皮質(zhì)類固醇激素為主，但不良反應(yīng)嚴(yán)重，且易產(chǎn)生藥物依賴。近年來中藥因作用溫和、藥物安全性較高、成本低、耐受性好等優(yōu)點逐漸走進(jìn)大眾視野，針對中藥對EAE中CD4＋T細(xì)胞亞群分化的影響展開論述，為臨床用藥提供更多理論基礎(chǔ)。

實驗性自身免疫性腦脊髓炎；多發(fā)性硬化； CD4＋T細(xì)胞亞群；中藥；雷公藤；苦參素；冬凌草甲素；姜酚；左歸丸；六味地黃丸

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為運動障礙、感覺和精神異常等[1]。據(jù)統(tǒng)計，全球發(fā)病人群中女性患者比例明顯高于男性，且以成年人發(fā)病為主，隨年齡升高病情加重，最終導(dǎo)致殘疾或癱瘓，對患者身心健康造成嚴(yán)重影響[2]。實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）病理學(xué)特征與MS高度相似，故用作研究MS發(fā)病機(jī)制的理想實驗?zāi)Ｐ蚚3]。目前，關(guān)于MS的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但已有研究證實CD4＋T細(xì)胞亞群分化通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)，在EAE疾病進(jìn)展過程中起重要作用[4]。因此，探討CD4＋T細(xì)胞亞群分化在EAE治療中的變化對改善患者預(yù)后有重要意義。中藥具有藥性溫和、成本較低，且不良反應(yīng)少的優(yōu)勢，易被患者接受。近年來，隨著人們對中醫(yī)認(rèn)識的逐步加深及中藥應(yīng)用的推廣，多種中藥被用于EAE的治療，本文主要對近年來中藥治療EAE過程中CD4＋T細(xì)胞亞群分化進(jìn)行總結(jié)，為臨床中藥治療MS提供依據(jù)。

1 MS

1.1 中醫(yī)學(xué)致病機(jī)制

MS發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前仍未完全闡明。MS屬中醫(yī)“類中風(fēng)風(fēng)懿”“類中風(fēng)風(fēng)痱”等范疇[5]。中醫(yī)認(rèn)為本病病因主要為腎臟先天稟賦不足，而后天外感淫邪、內(nèi)傷勞倦，繼而致脾胃肝腎虧虛，內(nèi)生風(fēng)濕火痰瘀，由此可知，本病為本虛標(biāo)實之證[6]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)根據(jù)MS的臨床表現(xiàn)將其分為發(fā)作期和緩解期，中醫(yī)學(xué)根據(jù)辨證施治的原則，對MS不同時期采用不同治療方法，發(fā)作期以邪實為主，應(yīng)注重祛邪，緩解期可見內(nèi)虛，應(yīng)以調(diào)和五臟六腑，補腎益髓為主，標(biāo)本兼治，內(nèi)外調(diào)和共同施治[7]。

1.2 中藥治療作用機(jī)制

目前，臨床中尚無針對性藥物治愈MS，基于中醫(yī)辨證論治理論，中藥主要以清內(nèi)毒、消損傷、補機(jī)體為原則進(jìn)行治療。從中醫(yī)角度分析MS的發(fā)病機(jī)制及治療方法，可以為目前臨床治療提供更廣闊的思路。研究者通過EAE模型進(jìn)行大量中藥實驗研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分中藥治療EAE可能與免疫調(diào)節(jié)、抑制炎癥反應(yīng)等有關(guān)[8]。一方面，中藥具有增強和抑制機(jī)體免疫反應(yīng)的雙重作用。研究顯示，雷公藤、苦參等中藥在一定劑量下可調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)作用從而改善EAE癥狀，但對免疫器官損害作用輕，臨床治療更為安全[9]。另一方面，中藥具有顯著的抑制炎癥反應(yīng)作用。研究顯示，當(dāng)歸、麻黃、柴胡[10]等中藥可有效調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子、炎癥細(xì)胞因子的合成和分泌，可通過調(diào)節(jié)輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）1/Th2失衡，參與調(diào)節(jié)MS異常免疫應(yīng)答，阻止MS炎癥反應(yīng)，減輕神經(jīng)損傷。

1.3 MS動物模型—EAE

目前，EAE是研究MS發(fā)病機(jī)制最為理想的實驗?zāi)Ｐ?。EAE誘導(dǎo)物經(jīng)歷多次改進(jìn)，由最初的狂犬疫苗、兔腦混懸液等最終發(fā)展為單一致敏原，主要包括髓磷脂堿性蛋白、髓鞘蛋白脂蛋白、髓鞘相關(guān)糖蛋白和髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白等[11]。上述單一致敏原具有敏感性高、模型制備成功率高等優(yōu)點，其中髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白因具有高度免疫原性，廣泛用于復(fù)發(fā)性EAE的研究[12]。EAE常用動物模型包括SD和Lewis等大鼠品系，SJL/J和DBAI/J等小鼠品系。SD大鼠來源廣、制備簡單，且成功率高、死亡率低，適合研究推廣。Lewis大鼠具有穩(wěn)定性好、成功率高等優(yōu)勢，但該品系不易獲得[13]。SJL/J和DBAI/J小鼠品系對致敏原敏感性高，但造模成功率和潛伏期波動較大，在抗原準(zhǔn)備時，輔助卡介苗、弗氏佐劑多次重復(fù)注射可提高制模成功率，且EAE模型穩(wěn)定性相應(yīng)提高[14]，可廣泛推廣。

1.4 EAE與CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化

EAE是由CD4＋T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)為主的自身免疫病，CD4＋T淋巴細(xì)胞中樞浸潤是EAE典型病變特點。研究表明，樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞表面主要組織相容性抗原復(fù)合物II可與CD4＋T淋巴細(xì)胞受體結(jié)合，從而刺激CD4＋T淋巴細(xì)胞活化，產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子及細(xì)胞因子，參與病情進(jìn)展[15]。

1.4.1 對Th1/Th2分化的調(diào)節(jié) Th1/Th2是CD4＋T細(xì)胞分化出的輔助性T淋巴細(xì)胞亞群，主要介導(dǎo)EAE病程中Th1和Th2兩種免疫反應(yīng)類型。Th1細(xì)胞主要分泌γ-干擾素、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-12和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α/β等細(xì)胞因子，是介導(dǎo)EAE的主要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞[16]。Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞向Th1分化，同時細(xì)胞因子間可相互作用，促進(jìn)其他細(xì)胞因子分泌。Trinchieri等[17]認(rèn)為IL-12的分泌可以啟動免疫系統(tǒng)對機(jī)體自身發(fā)起攻擊，誘發(fā)EAE。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5和轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）3種細(xì)胞因子，可以負(fù)向調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，從而抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫反應(yīng)。因此，Th1與Th2細(xì)胞間存在相互轉(zhuǎn)化和拮抗的作用，兩者間平衡紊亂共同促進(jìn)EAE的發(fā)生和發(fā)展。

1.4.2 對Th17分化的調(diào)節(jié) Th17是獨立于經(jīng)典輔助性T淋巴細(xì)胞亞群分化的新T淋巴細(xì)胞。Th17主要通過分泌細(xì)胞因子IL-17，或直接合成IL-6誘導(dǎo)其他促炎因子的形成，參與EAE病情進(jìn)展[18]。臨床研究顯示，MS患者腦組織中IL-17 mRNA表達(dá)明顯增加，并且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷區(qū)域中可以分離出Th17細(xì)胞，IL-17可能是導(dǎo)致EAE發(fā)病的關(guān)鍵因子[19]。Komiyama等[20]將缺失IL-17的CD4＋T淋巴細(xì)胞作為抗原轉(zhuǎn)移至小鼠體內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不能誘導(dǎo)EAE病理模型；此外，將Th17細(xì)胞直接作為抗原注入小鼠體內(nèi)，相比注入Th1細(xì)胞后得到EAE模型更加嚴(yán)重。Ghoreschi等[21]研究發(fā)現(xiàn)TGF-β和IL-6均可介導(dǎo)Th17分化，此外Th1細(xì)胞分泌的IL-23對Th17增殖起關(guān)鍵作用。另有研究顯示，IL-23可以促進(jìn)Th17產(chǎn)生IL-17，使用IL-23 p19抗體可以降低IL-17水平，從而緩解EAE病情發(fā)展[22]。有報道顯示，TGF-β可以誘導(dǎo)CD4＋T細(xì)胞分化成調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，IL-6和IL-21介導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)化成Th17細(xì)胞，造成調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與Th17細(xì)胞失衡，加重免疫系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致EAE病情加重[23]。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，Th17在EAE中扮演重要角色，隨著研究的深入，Th17的作用機(jī)制將會被進(jìn)一步揭示。

1.4.3 對Th22分化的調(diào)節(jié) Th22屬于一種新近發(fā)現(xiàn)的輔助性CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群，主要通過分泌IL-22、IL-13，IL26和TNF-α等炎性因子參與EAE進(jìn)程[24]。研究結(jié)果表明，IL-22在急性EAE模型中顯著增加，據(jù)此推測Th22和IL-22在EAE進(jìn)程中起重要作用[25]。針對EAE模型的基因檢測發(fā)現(xiàn)，IL-22受體R1、R2均可介導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫反應(yīng)，且可通過影響IL-22的分泌參與EAE的進(jìn)展[26]。臨床研究顯示，復(fù)發(fā)MS患者外周血Th22占比及IL-22均顯著升高[27]。隨著研究的不斷深入，Th22及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群在EAE發(fā)病機(jī)制及過程中的作用逐步顯現(xiàn)，為臨床治療提供更加充分的理論基礎(chǔ)。

1.4.4 對Teff/Treg分化的調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）和效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞（effective T cell，Teff）是近年來新發(fā)現(xiàn)的除Th1/Th2外的新的T淋巴細(xì)胞亞群平衡系統(tǒng)[28]。Treg在EAE進(jìn)程中的外周免疫耐受中起關(guān)鍵調(diào)控作用，可抑制Teff引起的過度免疫反應(yīng)，避免組織損傷。Villegas等[29]研究顯示，Teff與Treg間維持動態(tài)平衡是機(jī)體外周免疫平衡的關(guān)鍵，二者平衡打破可能是導(dǎo)致EAE發(fā)病的重要因素。

2 單味中藥及中藥單體治療EAE中CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化

2.1 雷公藤

雷公藤Hook. f.也稱黃滕根，具有活血化瘀、清熱祛濕、解毒消腫等功效。雷公藤多苷、雷公藤內(nèi)酯醇等是從雷公藤根部提取的主要活性成分[30]，主要來源于衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。近年研究表明，雷公藤多苷可通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞參與機(jī)體炎癥反應(yīng)[31]。Zhao等[32]研究發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷可以通過抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）3而抑制Th17分泌IL-17水平，從而抑制機(jī)體免疫反應(yīng)。張霞等[33]發(fā)現(xiàn)，雷公藤內(nèi)酯醇可以抑制EAE小鼠病灶中Th1和Th17細(xì)胞浸潤，增加Treg細(xì)胞占比調(diào)節(jié)EAE免疫反應(yīng)，陳鳴等[34]得出相似結(jié)論。周發(fā)明等[35]研究表明，雷公藤多苷可通過抑制β淀粉樣前體蛋白、IL-17等炎癥因子，減輕EAE大鼠軸索損傷，進(jìn)而延緩EAE病變進(jìn)程。目前臨床中關(guān)于雷公藤或其有效成分對機(jī)體特異性和非特異性免疫疾病具有較好的調(diào)節(jié)作用，主要通過調(diào)節(jié)CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化及細(xì)胞因子分泌發(fā)揮作用，但作用的基因靶點不明確。雷公藤內(nèi)的多種中藥活性成分在治療EAE過程中扮演類激素角色，但與臨床中常用的糖皮質(zhì)激素不同，具有不良反應(yīng)少、靶點豐富等優(yōu)勢，為MS的治療提供更多可能。

圖1 雷公藤多苷和雷公藤內(nèi)酯醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2.2 苦參素

苦參素是從豆科槐屬植物苦豆子L.全草、根及種子中提取的活性生活堿，具有提高白細(xì)胞水平、抑制機(jī)體變態(tài)反應(yīng)等多種作用，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖2。近年來研究發(fā)現(xiàn)，苦參素具有調(diào)節(jié)EAE大鼠機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)作用，可有效防治EAE，延遲EAE發(fā)病時間，可有效防治EAE，延遲EAE發(fā)病時間，可能通過抑制脊髓中JAK/ STAT3信號通路激活，從而減輕炎癥反應(yīng)有關(guān)[36]。郭小彬等[37]觀察苦參素對EAE的防治作用發(fā)現(xiàn)，苦參素可通過調(diào)控血清中多種炎癥細(xì)胞因子IL-4、INF-γ，減輕EAE發(fā)病程度及發(fā)病癥狀。既往研究顯示，IL-4、INF-γ在調(diào)控CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化過程中具有重要的調(diào)控作用[38]。由此可推測，苦參素可能通過調(diào)控炎癥細(xì)胞因子，進(jìn)一步調(diào)節(jié)CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化，參與EAE病情進(jìn)展，但具體調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究證實。

圖2 苦參素的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2.3 冬凌草甲素

冬凌草甲素是唇形科香茶菜屬多年生草本植物冬凌草(Hemsl.) Hara.全草中分離出的四環(huán)二萜類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖3。藥理學(xué)研究表明，冬凌草甲素具有顯著抗腫瘤、抗炎等作用，通過生物信息大數(shù)據(jù)分析，目前已確認(rèn)包括促分裂原活化蛋白激酶激酶1、腦膠質(zhì)瘤中轉(zhuǎn)化生長因子β2、成纖維生長因子受體1等多達(dá)105個潛在活性靶點及PI3K/AKT、過氧化物酶體增殖物激活受體等多條信號通路[39]。鄭配國等[40]研究發(fā)現(xiàn)，在EAE小鼠發(fā)病前給予冬凌草甲素可有效減輕小鼠脊髓病灶炎性細(xì)胞浸潤，且能有效抑制脊髓少突膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的增殖和分化，從而減少INF-γ+CD4＋T淋巴細(xì)胞及IL-17+CD4＋T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮預(yù)防EAE的功能。INF-γ+CD4＋T淋巴細(xì)胞及IL-17+CD4＋T淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的輔助性T淋巴細(xì)胞，因此可推測冬凌草甲素可能通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群中Th1/Th2平衡，發(fā)揮EAE免疫調(diào)控作用。

圖3 冬凌草甲素的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2.4 姜酚

生姜Roscoe具有散寒發(fā)汗、止吐暖胃等功效，姜酚是生姜根莖中的有效活性成分[41]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖4。姜酚除具有抗腫瘤、抗炎、保肝利膽等功效外，還具有抑制中樞神經(jīng)的功效。張南煬等[42]研究顯示，6-姜酚可有效抑制脊髓少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白誘導(dǎo)的緩解型EAE模型小鼠免疫應(yīng)答反應(yīng)，可有效抑制T淋巴細(xì)胞浸潤病灶及TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子分泌，從而有效緩解EAE的進(jìn)展。姜酚可通過調(diào)節(jié)CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化而保護(hù)EAE，但姜酚分離較為困難，且化學(xué)性質(zhì)仍不穩(wěn)定，在進(jìn)一步研究中亟需尋找有效方法降低其分離難度、提高化學(xué)穩(wěn)定性，并進(jìn)一步明確其作用靶點，以提高其在EAE治療中的應(yīng)用價值。

圖4 姜酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2.5 其他中藥或中藥單體

劉媚等[43]研究表明，人參皂苷Rd具有調(diào)節(jié)CD4＋T細(xì)胞亞群中Tregs與Th17分化作用，通過上調(diào)Tregs占比及IL-10水平、下調(diào)Th17占比及IL-17水平，而緩解EAE小鼠腰髓病理學(xué)變化，其調(diào)控機(jī)制可能與叉頭型基因/維甲酸相關(guān)孤核受體γt/STAT3信號通路的抑制有關(guān)。王東等[44]應(yīng)用白藜蘆醇聯(lián)合間充質(zhì)干細(xì)胞治療EAE小鼠發(fā)現(xiàn)，與單獨應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞相比，聯(lián)合用藥可有效提高Th1型細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α水平，降低Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10水平，通過調(diào)控Th1/Th2平衡抑制EAE脊髓炎癥反應(yīng)。李世舉等[45]研究顯示，白芍總苷可通過下調(diào)IL-23、IL-17水平，抑制CD4＋T淋巴細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，減輕EAE病情。上述研究均證實，中藥或中藥單體可通過調(diào)節(jié)CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化，從而調(diào)節(jié)EAE免疫炎癥反應(yīng)，對緩解病情進(jìn)展起重要調(diào)節(jié)作用。

3 中藥復(fù)方治療EAE中CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化

3.1 左歸丸和右歸丸

溫陽補腎方以左歸丸（補腎）和右歸丸（溫陽）為代表。左歸丸方由熟地、山藥、山茱萸、枸杞子等8味中藥組成，是在六味地黃丸基礎(chǔ)上化裁而成，主要用于遺精盜汗、腰膝酸軟等腎陰不足、精血虧虛者。右歸丸由熟地、山茱萸、山藥、當(dāng)歸、肉桂等10味中藥組成，主要用于神疲乏力、畏寒肢冷、陽痿等腎陽虧虛者。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，EAE發(fā)病機(jī)制與肝腎有關(guān)，在EAE病理過程中使用左歸丸和右歸丸可以顯示良好療效。周莉等[46]研究顯示，左歸丸可在EAE急性期（免疫誘導(dǎo)前15 d）下調(diào)Th1細(xì)胞因子，抑制免疫炎癥反應(yīng)，但緩解期可以促進(jìn)Th1免疫應(yīng)答反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)；左歸丸和右歸丸在EAE不同時期均可通過不同途徑糾正Th1/Th2平衡，促進(jìn)疾病的恢復(fù)。樊永平等[47]研究發(fā)現(xiàn)，左歸丸和右歸丸可有效降低EAE大鼠腦和脊髓組織中CD4＋T淋巴細(xì)胞水平，通過降低CD4＋/CD8+比值發(fā)揮治療EAE的作用，由此可知左歸丸和右歸丸對CD4＋T淋巴細(xì)胞增殖、分化具有調(diào)控作用。滋陰補陽是中醫(yī)追求陰陽調(diào)和的關(guān)鍵，通過左歸丸和右歸丸通過補腎溫陽調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽平衡，從而在研究EAE疾病進(jìn)展和治病機(jī)理中起重要作用。

3.2 六味地黃丸和金匱腎氣丸

六味地黃丸為經(jīng)典補腎方，方含熟地、山藥、山茱萸、澤瀉、牡丹皮和茯苓6味中藥，臨床治病譜廣，主要為慢性病引起的肝腎不足、腎陰虧虛之證。金匱腎氣丸是在其基礎(chǔ)上加味附子、肉桂制成，主要用于治療腎氣虛弱引起的虛勞、痰飲、消渴等病證，近年來隨著中醫(yī)臨床廣泛研究，臨床適用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大，設(shè)計內(nèi)分泌、免疫、泌尿等多個系統(tǒng)疾病。裘輝等[48]對MS緩解期治療經(jīng)驗進(jìn)行總結(jié)，根據(jù)中醫(yī)臨床辨證發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸治療腎陰虧型MS效果滿意，而金匱腎氣丸治療腎陽不足型MS療效滿意，辨證施治副作用少。劉妍等[49]研究發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸和金匱腎氣丸對EAE大鼠Th1、Th17及Treg細(xì)胞紊亂均有調(diào)節(jié)作用，通過調(diào)控T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β和IL-17水平改善EAE病情，且調(diào)控作用優(yōu)于醋酸潑尼松龍。MS患者隨著年齡的增長腎氣漸虛，林吉祥[50]研究發(fā)現(xiàn)，金匱腎氣丸對老年人群腎氣虛患者具有良好療效，且能提高臨床療效。六味地黃丸和金匱腎氣丸可通過調(diào)節(jié)機(jī)體CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化，從而改調(diào)節(jié)機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)，最終改善EAE癥狀。

3.3 益腎達(dá)絡(luò)飲和補腎固髓方

益腎達(dá)絡(luò)飲方由熟地、鹿角膠、石菖蒲、梔子和生甘草等中藥組成，補腎固髓方由淫羊藿、肉蓯蓉、仙茅、圣地、制首烏、郁金和丹參組成，2種復(fù)方均是根據(jù)MS毒損脈絡(luò)、戕害腦髓的病機(jī)制定而成。吳彥青等[51]研究表明，益腎達(dá)絡(luò)飲可有效改善EAE小鼠神經(jīng)功能損傷，其調(diào)控機(jī)制為通過干預(yù)CD4＋T淋巴細(xì)胞水平，從而改善EAE中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫炎癥反應(yīng)。補腎固髓方注重調(diào)節(jié)MS患者肝腎陰虛、痰瘀阻絡(luò)的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行治療，師一民等[52]研究證實，補腎固髓方及其拆方均具有減輕EAE大鼠炎癥細(xì)胞浸潤及軸突損傷的作用，且尤以補腎固髓方減輕作用最為顯著，其作用機(jī)制可能與下調(diào)腦脊髓中微管相關(guān)蛋白p-Tau，上調(diào)β-tubulin蛋白有關(guān)。樊永平等[53]研究顯示，補腎益髓膠囊可通過抑制視神經(jīng)脊髓炎緩解期患者血清IL-6表達(dá)水平。既往研究表明，IL-6可負(fù)調(diào)控Th1細(xì)胞分化，參與EAE進(jìn)展，由此可以推測補腎益髓方可能是通過調(diào)節(jié)EAE緩解期Th2向Th1分化而抑制中樞神經(jīng)炎癥反應(yīng)的。益腎達(dá)絡(luò)飲和補腎固髓方中均含有多味益腎填髓中藥，該類藥物含有豐富類激素，治療EAE的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化失衡有關(guān)。

3.4 二黃方

二黃方主要由生地、熟地、制首烏、水蛭、浙貝母等中藥組成，針對MS腎陰虧虛、痰阻脈絡(luò)之病機(jī)進(jìn)行治療，全方滋陰補腎、活血通絡(luò)，清熱化痰，改善MS癥狀。具有補腎填精、活血化瘀的功效。研究發(fā)現(xiàn)，二黃方可提高EAE大鼠血清IL-4水平，通過調(diào)整CD4＋T細(xì)胞亞群Th1/Th2平衡達(dá)到改善EAE中樞神經(jīng)功能損傷的作用[54]。目前多項研究均證實Th1/Th2偏移導(dǎo)致參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子失衡，加重EAE疾病發(fā)展，二黃方可能通過糾正這種偏移減輕過度免疫應(yīng)答，從而達(dá)到治療效果。

單味中藥、中藥單體和中藥復(fù)方參與T淋巴細(xì)胞亞群分化情況見表1。

4 結(jié)語

MS病情易反復(fù)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚無有效藥物可以根治，臨床所有治療方法僅可以緩解病情，無法徹底治愈。類固醇激素、干擾素、免疫抑制劑等是目前治療MS的主要手段，但存在不良反應(yīng)大、藥物依賴、適用范圍受限、費用昂貴等缺點[55]。近年來隨著中藥治療EAE研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)中藥在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)、減輕激素藥物不良反應(yīng)方面具有較大優(yōu)勢。中藥治療EAE過程中，可通過調(diào)節(jié)機(jī)體CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化，改變CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分泌的炎性因子水平，抑制機(jī)體異常免疫炎癥反應(yīng)，從而改善EAE癥狀。但目前關(guān)于中藥調(diào)節(jié)EAE CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化的研究仍存在一些問題，如EAE實驗動物的多樣性對所得結(jié)論的可靠性是否有影響，中藥對CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化影響的同時是否能夠影響其他類型淋巴細(xì)胞分化，對體液免疫是否也有影響等，此外，對EAE腦脊液、體液中CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子的檢測手段仍不統(tǒng)一，可能對結(jié)果可靠性產(chǎn)生影響。因此，今后應(yīng)選擇合適實驗動物，應(yīng)用成熟穩(wěn)定檢測手段，對中藥影響CD4＋T淋巴細(xì)胞亞群分化進(jìn)行更為科學(xué)，可靠的分析，為臨床應(yīng)用中藥防治MS提供實驗依據(jù)。

表1 單味藥和中藥復(fù)方參與T淋巴細(xì)胞亞群分化情況

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Fox R J, Coffey C S, Conwit R,. Phase 2 trial of ibudilast in progressive multiple sclerosis [J]., 2018, 379(9): 846-855.

[2] Amezcua L, Rivas E, Joseph S,. Multiple sclerosis mortality by race/ethnicity, age, sex, and time period in the United States, 1999-2015 [J]., 2018, 50(1/2): 35-40.

[3] Hundehege P, Fernandez-Orth J, R?mer P,. Targeting voltage-dependent calcium channels with pregabalin exerts a direct neuroprotective effect in an animal model of multiple sclerosis [J]., 2018, 26(1): 77-93.

[4] H?glund R A, Lossius A, Johansen J N,. In silico prediction analysis of idiotope-driven T-B cell collaboration in multiple sclerosis [J]., 2017, 8: 1255.

[5] 李中, 周德生, 周穎璨, 等. 多發(fā)性硬化患者特殊治療后中醫(yī)證候?qū)W變化的橫斷面調(diào)查研究 [J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2015, 35(4): 44-47.

[6] 許浩游, 李淑梅, 李惠珍, 等. 嶺南地區(qū)多發(fā)性硬化患者證候演變規(guī)律與濕邪致病特點研究 [J]. 國際中醫(yī)中藥雜志, 2018, 40(11): 1011-1015.

[7] 樊永平, 王蘇. 中醫(yī)辨證治療對復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化患者復(fù)發(fā)率的影響 [J]. 中醫(yī)雜志, 2015, 56(8): 683-685.

[8] 施凌鶴, 龐浩龍, 貢聯(lián)兵. 多發(fā)性硬化中成藥的合理應(yīng)用 [J]. 人民軍醫(yī), 2015, 58(2): 222-223.

[9] 朱振國, 黃艷君, 張元濤, 等. 黃連素對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的實驗研究 [J]. 中國臨床藥理學(xué)雜志, 2015, 31(1): 59-62.

[10] 張奇, 林成仁, 李濤. 柴胡對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠炎癥的干預(yù)作用 [J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2015, 13(6): 760-763.

[11] Ntountaniotis D, Vanioti Μ, Kordopati G G,. A combined NMR and molecular dynamics simulation study to determine the conformational properties of rat/mouse 35-55 myelin oligodendrocyte glycoprotein epitope implicated in the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2017, 35(7): 1559-1567.

[12] Chevalier A C, Rosenberger T A. Increasing acetyl-CoA metabolism attenuates injury and alters spinal cord lipid content in mice subjected to experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2017, 141(5): 721-737.

[13] Bjelobaba I, Begovic-Kupresanin V, Pekovic S,. Animal models of multiple sclerosis: Focus on experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2018, 96(6): 1021-1042.

[14] 王玉琳, 石天宇, 馬寧, 等. 實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型的建立及要素選擇 [J]. 黑龍江中醫(yī)藥, 2018, 47(4): 121-124.

[15] Belikan P, Bühler U, Wolf C,. CCR7 on CD4+T cells plays a crucial role in the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2018, 200(8): 2554-2562.

[16] Pennell L M, Fish E N. Interferon-β regulates dendritic cell activation and migration in experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2017, 152(3): 439-450.

[17] Trinchieri G, Pflanz S, Kastelein R A. The IL-12 family of heterodimeric cytokines [J]., 2003, 19(5): 641-644.

[18] Liu R Q, Ma X F, Chen L,. MicroRNA-15b suppresses Th17 differentiation and is associated with pathogenesis of multiple sclerosis by Targeting-GlcNAc transferase [J]., 2017, 198(7): 2626-2639.

[19] Kleinewietfeld M, Manzel A, Titze J,. Sodium chloride drives autoimmune disease by the induction of pathogenic TH17 cells [J]., 2013, 496(7446): 518-522.

[20] Komiyama Y, Nakae S, Matsuki T,. IL-17 plays an important role in the development of experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2006, 177(1): 566-573.

[21] Ghoreschi K, Jesson M I, Li X,. Modulation of innate and adaptive immune responses by tofacitinib (CP-690, 550) [J]., 2011, 186(7): 4234-4243.

[22] Chen Y. Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis [J]., 2006, 116(5): 1317-1326.

[23] Morita K, Okamura T, Inoue M,. Egr2 and Egr3 in regulatory T cells cooperatively control systemic autoimmunity through Ltbp3-mediated TGF-β3 production [J]., 2016, 113(50): E8131-E8140.

[24] Duhen T, Geiger R, Jarrossay D,. Production of interleukin 22 but not interleukin 17 by a subset of human skin-homing memory T cells [J]., 2009, 10(8): 857-863.

[25] Almolda B, Costa M, Montoya M,. Increase in Th17 and T-reg lymphocytes and decrease of IL22 correlate with the recovery phase of acute EAE in rat [J]., 2011, 6(11): e27473.

[26] Beyeen A D, Adzemovic M Z, ?ckinger J,. IL-22RA2 associates with multiple sclerosis and macrophage effector mechanisms in experimental neuroinflammation [J]., 2010, 185(11): 6883-6890.

[27] Xu W, li R, Dai Y Q,. IL-22 secreting CD4+T cells in the patients with neuromyelitis optica and multiple sclerosis [J]., 2013, 261(1/2): 87-91.

[28] Kim H J, Barnitz R A, Kreslavsky T,. Stable inhibitory activity of regulatory T cells requires the transcription factor Helios [J]., 2015, 350(6258): 334-339.

[29] Villegas J A, van Wassenhove J, Le Panse R,. An imbalance between regulatory T cells and T helper 17 cells in acetylcholine receptor-positive myasthenia gravis patients [J]., 2018, 1413(1): 154-162.

[30] 段亞萍, 駱驕陽, 豆小文, 等. 雷公藤藥材真?zhèn)舞b別及質(zhì)量評價研究 [J]. 中國中藥雜志, 2018, 43(15): 3105-3114.

[31] 巴鑫, 陳哲, 涂勝豪. 從表觀遺傳學(xué)角度看雷公藤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展 [J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志, 2018, 22(11): 785-788.

[32] Zhao J X, Di T T, Wang Y,. Multi-glycoside ofHook. f. ameliorates imiquimod-induced skin lesions through a STAT3-dependent mechanism involving the inhibition of Th17-mediated inflammatory responses [J]., 2016, 38(3): 747-757.

[33] 張霞, 胡曉娟, 陳鳴, 等. 雷公藤內(nèi)酯醇對自身反應(yīng)性T細(xì)胞的作用機(jī)制研究 [J]. 現(xiàn)代免疫學(xué), 2011, 31(3): 213-218.

[34] 陳鳴, 孫權(quán)業(yè), 張霞, 等. 雷公藤內(nèi)酯醇治療實驗性自身免疫性腦脊髓炎的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究 [J]. 中國免疫學(xué)雜志, 2011, 27(4): 337-341.

[35] 周發(fā)明, 李小麗, 陳光輝. 雷公藤多甙對EAE大鼠脊髓β-APP和IL-17表達(dá)的影響 [J]. 卒中與神經(jīng)疾病, 2014, 21(6): 323-326.

[36] 張明亮, 劉方洲, 呂瑩, 等. 苦參素對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠JAK2/STAT3表達(dá)的影響 [J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2016, 36(22): 1973-1976.

[37] 郭小彬, 闞全程, 宋一帆, 等. 苦參素對大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的防治作用 [J]. 山東醫(yī)藥, 2010, 50(5): 30-31.

[38] Ribeiro V R, Romao-Veiga M, Romagnoli G G,. Association between cytokine profile and transcription factors produced by T-cell subsets in early- and late-onset pre-eclampsia [J]., 2017, 152(1): 163-173.

[39] 劉偉, 張彥忠, 白素平. 基于反向分子對接和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)確定冬凌草甲素抗腫瘤的潛在作用機(jī)制 [J]. 中國新藥雜志, 2019, 28(17): 2148-2156.

[40] 鄭配國, 魏高輝, 符含笑, 等. 冬凌草甲素減輕實驗性自身免疫性腦脊髓炎病變的免疫機(jī)制 [J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2015, 31(8): 1089-1092.

[41] 冉姍, 孫方方, 宋燕, 等. 基于苓甘五味姜辛湯研究干姜藥對配伍對4種姜酚含量影響 [J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2018, 20(9): 62-65.

[42] 張南煬, 潘鈺, 吳虢東, 等. 6-姜酚治療實驗性自身免疫性腦脊髓炎的免疫學(xué)機(jī)制 [J]. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2018, 39(12): 23-27.

[43] 劉媚, 黃綺玲, 馬曉萌, 等. 人參皂甙Rd對EAE模型小鼠Tregs/Th17細(xì)胞失衡的調(diào)節(jié)作用研究 [J]. 中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志, 2019, 18(5): 507-514.

[44] 王東, 龐曉璐, 王梁, 等. 間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合白藜蘆醇對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠炎癥的影響 [J]. 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2017, 38(7): 745-749.

[45] 李世舉, 王艷旭, 邱建敏, 等. 白芍總苷對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠IL-23/Th17軸的影響 [J]. 神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生, 2015, 15(6): 589-592.

[46] 周莉, 樊永平, 王蕾, 等. 左歸丸與右歸丸對EAE大鼠血漿Th1/Th2平衡的影響 [J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2009, 7(11): 1304-1306.

[47] 樊永平, 宋麗君, 葉明, 等. 左歸丸和右歸丸對自身免疫性腦脊髓炎大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴細(xì)胞亞群免疫組化表達(dá)的影響 [J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志, 2010, 17(6): 44-47.

[48] 裘輝, 張麗萍, 裘昌林. 裘昌林補腎熄風(fēng)法治療多發(fā)性硬化緩解期經(jīng)驗 [J]. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2016, 40(2): 90-95.

[49] 劉妍, 張平, 李明, 等. 補腎方對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠T輔助細(xì)胞1, 17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2011, 17(3): 116-120.

[50] 林吉祥. 金匱腎氣丸改善老年腎氣虛證的臨床觀察 [J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2013, 33(12): 16.

[51] 吳彥青, 高穎, 朱陵群, 等. 實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中樞神經(jīng)組織中mRNA的變化及益腎達(dá)絡(luò)飲對其的影響 [J]. 中國中醫(yī)急癥, 2012, 21(11): 1760-1762.

[52] 師一民, 王永強, 安辰, 等. 補腎益髓方及其拆方對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠腦和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表達(dá)的影響 [J]. 世界中醫(yī)藥, 2016, 11(9): 1825-1830.

[53] 樊永平, 王蘇, 楊濤. 補腎益髓膠囊對視神經(jīng)脊髓炎患者緩解期BAFF、CXCL13及IL-6的影響 [J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2019, 14(6): 741-744.

[54] Gao H, Dong Z, Gong X K,. Effects of various radiation doses on induced T-helper cell differentiation and related cytokine secretion [J]., 2018, 59(4): 395-403.

[55] 樊永平, 劉秀貞, 王蕾, 等. 二黃方對EAE大鼠外周血NK細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響 [J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2007, 30(3): 165-168.

[56] Antonazzo I C, Raschi E, Forcesi E,. Multiple sclerosis as an adverse drug reaction: Clues from the FDA Adverse Event Reporting System [J]., 2018, 17(9): 869-874.

Research progress on effect of traditional Chinese medicine on differentiation of CD4＋T cell subsets in experimental autoimmune encephalomyelitis

LIU Nan, LI Na, MA Xiao-hua, ZHU Lin, SHI Cheng-cheng

Ddepartment of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450000, China

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a demyelinating disease of the central nervous system mediated by CD4＋T cells. It is an internationally recognized animal model of multiple sclerosis (MS). As the main immune response cell of EAE model, CD4＋T cells have many subsets, secrete many kinds of cytokines, and involve in disease progression. CD4＋T cell proliferation and differentiation and dysfunction are closely related to the pathogenesis of EAE. At present, there is no effective drug for MS in clinic, and most of the drugs are symptomatic application of corticosteroids, however, they have serious side effects and are prone to drug dependence. In recent years, Chinese medicine has gradually entered the public’s field of vision because of its mild action, high drug safety, low cost, and good tolerance. The effects of traditional Chinese medicine on differentiation of CD4＋T cell subsets in EAE are analyzed in this article, in order to provide more theoretical basis for clinical use.

experimental autoimmune encephalomyelitis; multiple sclerosis; CD4＋T cell subsets; traditional Chinese medicine;Hook. f.; oxymatrine; oridonin; gingerol; Zuogui Pills; Liuwei Dihuang Pills

R285

A

0253 - 2670(2021)04 - 1177 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.032

2020-02-20

國家自然科學(xué)基金面上項目（31570357）；河南省高等學(xué)校重點科研項目計劃（17A310011）

劉 楠，女，碩士，主管藥師，研究方向為免疫藥理。Tel: (0371)66913047 E-mail: l.n_snow@163.com

時程程，女，博士，主管藥師，研究方向為免疫藥理。Tel: (0371)66913047 E-mail: 530693421@qq.com

[責(zé)任編輯 崔艷麗]