附子內(nèi)生真菌Trichoderma sp. FZ-31的化學成分研究

陳小晶，朱麗君，段禮新，劉中秋，崔 輝，趙鐘祥

附子內(nèi)生真菌sp. FZ-31的化學成分研究

陳小晶，朱麗君，段禮新，劉中秋，崔 輝*，趙鐘祥*

廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006

研究生附子內(nèi)生真菌sp. FZ-31的化學成分。內(nèi)生真菌發(fā)酵物采用正相硅膠柱色譜、反相硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜及制備型高效液相色譜等方法進行分離純化，再通過核磁共振、質譜以及圓二色譜等方法鑒定單體化合物結構。從sp. FZ-31發(fā)酵產(chǎn)物的醋酸乙酯部位得到11個化合物，分別鑒定為(?)-蜂蜜曲菌素（1）、()-7-羥基蜂蜜曲菌素（2）、4-羥基蜂蜜曲菌素（3）、赤霉菌吡喃酮D（4）、阿魏酸甲酯（5）、吲哚-3-乙酸（6）、吲哚-3-甲醛（7）、苯甲酰胺（8）、(3,6)-4-甲基-6-(1-甲基乙基)-3-苯甲基全氫-1,4-噁嗪- 2,5-二酮（9）、酒渣堿（10）、腐皮殼素A（11）。除化合物5、7外，其余化合物均為首次從木霉菌sp.中分離得到，本研究為附子及其內(nèi)生菌的開發(fā)利用提供了一定的研究基礎。

附子；內(nèi)生真菌；木霉菌；次生代謝產(chǎn)物；(?)-蜂蜜曲菌素；赤霉菌吡喃酮D；酒渣堿；腐皮殼素A

附子為毛茛科烏頭屬植物烏頭Debx.子根的加工品，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛的功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，附子具有明顯的強心、保護心肌、抗心律失常、抗炎、鎮(zhèn)痛、增強免疫、抗腫瘤等功效[2]。

內(nèi)生菌生活在健康的植物組織或細胞內(nèi)，且不會引發(fā)宿主明顯的感染癥狀。某些內(nèi)生菌能產(chǎn)生和宿主相同或相似的化合物，或利用宿主的有效成分代謝出新的活性物質[3]。目前，烏頭屬植物內(nèi)生菌的相關研究正在展開。艾嫦等[4]綜述了從滇南黃草烏、川烏及烏頭中分離鑒定了262株內(nèi)生菌，且證實了大部分烏頭內(nèi)生菌具有抗菌活性。由此可見，篩選出能夠產(chǎn)生活性代謝產(chǎn)物的菌種對于烏頭屬植物藥用資源的開發(fā)具有重要意義。本研究對新鮮附子中的內(nèi)生真菌進行分離，得到一株內(nèi)生真菌并鑒定為木霉菌sp.，命名sp. FZ-31（菌種編號：MT889737）。木霉菌來源于半知菌亞門絲孢綱絲孢目，目前已鑒定出250余種[5]。大部分木霉菌可促進植物生長，提高植物的抗逆性和抗病性，是一類重要的生防微生物資源[6]。本實驗從sp. FZ-31發(fā)酵產(chǎn)物的醋酸乙酯部位分離得到11個化合物（圖1），分別鑒定為(?)-蜂蜜曲菌素 [(–)-mellein，1]、()-7-羥基蜂蜜曲菌素[()-7-hydroxymellein，2]、4-羥基蜂蜜曲菌素（4-hydroxymellein，3）、赤霉菌吡喃酮D（gibepyrone D，4）、阿魏酸甲酯（methyl ferulate，5）、吲哚-3-乙酸（indole-3-acetic acid，6）、吲哚-3-甲醛（indol-3-carbaldehyde，7）、苯甲酰胺（benzamide，8）、(3,6)-4-甲基-6-(1-甲基乙基)-3-苯甲基全氫- 1,4-噁嗪-2,5-二酮[(3,6)-4-methyl-6-(1-methylethyl)- 3-phenylmethylperhydro-1,4-oxazine-2,5-dione，9]、酒渣堿（flazine，10）、腐皮殼素A（diaporthein A，11）。除化合物5、7外，其余化合物均為首次從木霉菌sp.中分離得到。

圖1 化合物1～11的結構

1 儀器與材料

HZP-250恒溫培養(yǎng)搖床（上海精宏實驗設備有限公司）；SW-CJ-2F單人單面超凈臺（南京貝登電子商務有限公司）；SQ5 10C高壓滅菌鍋（深圳市塞亞泰克儀器設備公司）；AB SCIEX Triple TOFTM 5600＋四級桿-飛行時間串聯(lián)質譜（美國AB質譜公司）；Bruker AV超導核磁共振儀（400 MHz，瑞士布魯克公司）；Chirascan圓二色譜儀（英國Applied Photophysics公司）；POLARTRONIC HH W5旋光儀（德國SCHMIDT＋HAENSCH公司）；SHIMADZU AUY12電子分析天平（島津儀器公司）；LC-100半制備液相色譜儀（上海伍豐科學儀器有限公司）。

柱色譜硅膠（100～200、200～300目，青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠（日本GE醫(yī)療集團）；RP-C18硅膠（Fuji，40～75 mm，日本春日井富士硅業(yè)有限公司）；TLC分析硅膠板（GF254，德國默克公司）。甲醇（色譜級，北京邁瑞達科技有限公司）；石油醚、醋酸乙酯、三氯甲烷、甲醇（分析純，天津致遠試劑公司）。孟加拉紅培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、馬鈴薯葡萄糖水培養(yǎng)基（PDB），廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

2 方法

2.1 植物材料來源

生附子于2018年12月采集于四川省大涼山布拖縣好醫(yī)生附子種植基地，由廣州中醫(yī)藥大學段禮新研究員鑒定為烏頭屬植物烏頭Debx.的子根，藥材標本（FZ-201812）儲存于廣州中醫(yī)藥大學藥學院中藥化學教研室。

2.2 菌株的分離純化

用清水洗凈附子表面，在超凈臺中依次用0.5%次氯酸鈉溶液和75%乙醇水進行表面消毒30 s，然后用無菌水沖洗，表面消毒完畢用滅菌小刀將藥材切成厚度約2 mm的薄片，薄片接種于孟加拉紅培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基于室溫下培養(yǎng)，待生長出菌落后于PDA培養(yǎng)基中進行純化及保存。

2.3 菌種的鑒定

純化后的菌株進行基因測序，將其18S rRNA基因序列提交至NCBI的GenBank基因庫，進行BLAST比對，結果顯示，該菌株與木霉菌sp.相似度達到99.94%，故鑒定該菌為木霉菌，命名為sp. FZ-31（菌種編號：MT889737）。該菌種現(xiàn)保存于廣州中醫(yī)藥大學中藥學院微生物庫。

2.4 菌株發(fā)酵

用接種環(huán)挑取適量菌絲接種至裝有200 mL PDB的三角瓶中，在恒溫培養(yǎng)搖床中培養(yǎng)3 d（28 ℃，130 r/min），得到菌株種子液。將等量種子液（2 mL/瓶）接種至無菌大米培養(yǎng)基（60 g/瓶）中，共培養(yǎng)60瓶，室溫下發(fā)酵培養(yǎng)30 d，得到固體發(fā)酵物。

2.5 發(fā)酵物分離純化

發(fā)酵物用甲醇滲漉提取3次，滲漉液合并濃縮得到粗提物，粗提物用適量超純水分散后用醋酸乙酯萃取3次（3×4 L），減壓除去溶劑得浸膏46.2 g。浸膏經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脫，根據(jù)薄層色譜（TLC）檢測后合并，共得到10個組分（Fr. 1～10）。Fr. 8（1.8 g）析出黃色粉末，經(jīng)二氯甲烷-甲醇重結晶得化合物10（33.9 mg）。Fr. 1（0.2 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（二氯甲烷-甲醇 1∶1），根據(jù)TLC檢測后合并，得到Fr. 1-1和Fr. 1-2，F(xiàn)r.1-2（88.4 mg）中析出白色片狀結晶，得化合物1（29.8 mg）。Fr. 3（0.2 g）采用制備型HPLC進一步分離[甲醇-水（50∶50），1.5 mL/min]，得化合物4（31.9 mg）。Fr. 4（0.8 g）采用制備型HPLC分離[甲醇-水（40∶60），1.5 mL/min]，得化合物2（12.3 mg）和3（15.2 mg）。Fr. 5（2.2 g）經(jīng)ODS柱色譜，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脫，根據(jù)TLC檢測后合并，得Fr. 5-1～5-4。Fr. 5-3經(jīng)Sephadex LH-20[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]進一步純化，得到化合物5（23.0 mg）。Fr. 5-4采用制備型HPLC進一步分離[甲醇-水（80∶20），1.5 mL/min]，得化合物6（10.4 mg）和7（13.9 mg）。Fr. 6（19.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（5∶1～0∶1）梯度洗脫，根據(jù)TLC檢測后合并，得2個組分Fr. 6-1和Fr. 6-2。Fr. 6-2（15.1 g）經(jīng)ODS 柱色譜，甲醇-水（30∶70～100∶0）梯度洗脫，根據(jù)TLC檢測后合并，得Fr. 6-2-1（6.8 g）和Fr. 6-2-2（7.2 g）。Fr. 6-2-2中析出白色結晶，經(jīng)二氯甲烷-甲醇重結晶得化合物11（22.6 mg）。Fr. 6-2-1采用制備型HPLC進一步分離[甲醇-水（75∶25），1.5 mL/min]，得化合物8（12.1 mg）和9（17.3 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：白色結晶（甲醇），分子式為C10H10O3；HR-ESI-MS/: 179.070 0 [M＋H]+（C10H11O3，計算值179.070 3）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 11.02 (1H, brs, 8-OH), 7.40 (1H, m, H-6), 6.69 (1H, d,= 8.4 Hz, H-7), 6.88 (1H, d,= 7.2 Hz, H-5), 2.92 (2H, m, H-4), 4.7 (1H, m, H-3), 1.53 (3H, s, 3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 170.1 (C-1), 162.3 (C-8), 139.5 (C-10), 136.1 (C-6), 118.0 (C-7), 116.3 (C-5), 108.4 (C-9), 76.2 (C-3), 34.7 (C-4), 20.9 (3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物1為(–)-蜂蜜曲菌素。

化合物2：白色粉末，分子式為C10H10O4；UV （MeOH）maxnm (log ε): 348 (3.414), 251 (3.461)；ECD（MeOH）max(Δε) 289 (＋28.552), 259 (?0.007), 219 (＋0.028) nm；HR-ESI-MS/: 193.050 64 [M－H]?（C10H9O4，計算值193.050 6）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.04 (1H, d,= 8.4 Hz, H-6), 6.70 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 4.70 (1H, m, H-3), 3.20 (1H, m, H-4a), 2.66 (1H, m, H-4b), 1.52 (3H, s, 3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 171.7 (C-1), 156.4 (C-8), 147.0 (C-7), 125.9 (C-6), 125.1 (C-5), 116.5 (C-10), 109.3 (C-9), 77.7 (C-3), 29.4 (C-4), 21.1 (3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物2為()-7-羥基蜂蜜曲菌素。

化合物3：白色粉末，分子式為C10H10O4；UV （MeOH）maxnm (log ε): 312 (3.372), 244 (3.452); ECD（MeOH）max(Δε) 309 (＋0.034), 255 (?0.005), 219 (＋0.028) nm；HR-ESI-MS/: 193.050 7 [M－H]?（C10H9O4，計算值193.050 6）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 10.96 (1H, brs, 8-OH), 7.53 (1H, t,= 7.9 Hz, H-6), 6.99 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 6.92 (1H, d,= 7.2 Hz, H-7), 4.60 (1H, d,= 6.4 Hz, H-3), 4.55 (1H, s, H-4), 1.56 (3H, d,= 6.8 Hz, 3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 169.4 (C-1), 162.1 (C-8), 140.6 (C-10), 136.9 (C-6), 118.6 (C-5), 118.5 (C-7), 106.9 (C-9), 78.4 (C-3), 67.3 (C-4), 16.1 (3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物3為4-羥基蜂蜜曲菌素。

化合物4：白色結晶（甲醇），分子式為C10H10O4；HR-ESI-MS/: 195.064 7 [M＋H]+（C10H11O4，計算值195.065 2）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.37 (1H, m, H-4), 6.67 (1H, d,= 7.0 Hz, H-5), 6.59 (1H, s, H-8), 2.08 (3H, d,= 1.2 Hz, 7-CH3), 2.34 (3H, d,= 1.3 Hz, 3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 164.2 (C-2), 128.1 (C-3), 141.2 (C-4), 107.3 (C-5), 158.5 (C-6), 143.7 (C-7), 120.0 (C-8), 169.3 (9-COOH), 16.7 (7-CH3), 13.5 (2-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物4為赤霉菌吡喃酮D。

化合物5：白色粉末，分子式為C11H12O4；HR-ESI-MS/: 207.066 3 [M－H]–（C11H11O4，計算值207.066 3）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 9.61 (1H, brs, 4-OH), 7.55 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 7.30 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 7.12 (1H, dd,= 2.0, 1.6 Hz, H-6), 6.80 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.47 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 3.70 (3H, s, 9-OCH3), 3.80 (3H, s, 3-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 167.2 (C-9), 149.5 (C-3), 148.0 (C-4), 145.2 (C-7), 125.6 (C-1), 123.2 (C-6), 115.6 (C-5), 114.3 (C-8), 111.4 (C-2), 55.8 (3-OCH3), 51.3 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物5為阿魏酸甲酯。

化合物6：棕色粉末，分子式為C10H9NO2；HR-ESI-MS/: 174.056 2 [M－H]–（C10H8NO2，計算值174.056 1）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.2 (1H, brs, H-11), 10.93 (1H, s, H-1), 7.55 (1H, d,= 7.9 Hz, H-4), 7.40 (1H, d,= 8.0 Hz, H-7), 7.27 (1H, d,= 2.3 Hz, H-2), 7.12 (1H, m, H-6), 7.03 (1H, m, H-5), 3.70 (2H, s, H-10)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 173.4 (C-11), 136.3 (C-8), 127.4 (C-9), 124.1 (C-2), 121.4 (C-6), 118.7 (C-5), 118.5 (C-4), 111.5 (C-7), 107.8 (C-3), 31.2 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物6為吲哚-3-乙酸。

化合物7：淡黃色粉末，分子式為C9H7NO；HR-ESI-MS/: 144.045 6 [M－H]–（C9H6NO，計算值144.045 5）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 10.07 (1H, s, H-10), 8.93 (1H, brs, H-1), 8.33 (1H, m, H-4), 7.86 (1H, d,= 2.8 Hz, H-2), 7.45 (1H, m, H-7), 7.32～7.34 (2H, m, H-5, 6)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 185.2 (C-10), 136.8 (C-9), 135.3 (C-2), 124.4 (C-5), 123.1 (C-6), 122.0 (C-3), 122.0 (C-4), 119.7 (C-8), 111.5 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物7為吲哚-3-甲醛。

化合物8：白色粉末，分子式為C7H7NO；HR-ESI-MS/: 122.060 4 [M＋H]+（C7H8NO，計算值122.060 0）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.80～7.82 (2H, m, H-2, 6), 7.54 (1H, m, H-4), 7.43～7.47 (2H, m, H-3, 5), 6.12 (1H, brs, H-8a), 5.83 (1H, brs, H-8b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 169.6 (C-7), 133.4 (C-1), 133.2 (C-4), 128.8 (C-3), 128.8 (C-5), 127.5 (C-2), 127.5 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物8為苯甲酰胺。

化合物9：白色粉末，分子式為C15H19NO3；UV（MeOH）maxnm (log ε): 205 (3.656)；ECD （MeOH）max(Δε) 257 (＋0.062), 227 (?0.002), 208 (?0.004), 197 (?0.003) nm；HR-ESI-MS/: 262.143 4 [M＋H]+（C15H20NO3，計算值262.143 7）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.20～7.30 (5H, m, H-12～16), 5.49 (1H, m, H-3), 4.95 (1H, d,= 8.7 Hz, H-6), 3.38 (2H, dd,= 5.0, 14.5 Hz, H-10), 3.02 (3H, s, N-CH3), 2.07(1H, m, H-7), 0.83 (3H, d,= 6.4 Hz, 9-CH3), 0.44 (3H, d,= 6.8 Hz, 8-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 170.0 (C-2), 169.3 (C-5), 136.7 (C-11), 128.9 (C-12), 128.9 (C-16), 128.5 (C-13), 128.5 (C-15), 126.8 (C-14), 76.4 (C-6), 57.4 (C-3), 34.8 (C-10), 32.4 (N-CH3), 29.7 (C-7), 18.3 (C-9), 17.5 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物9為(3,6)-4-甲基-6-(1-甲基乙基)-3-苯甲基全氫-1,4-噁嗪-2,5-二酮。

化合物10：黃色粉末，分子式為C17H12N2O4；HR-ESI-MS/: 309.086 7 [M＋H]+（C17H13N2O4，計算值309.087 0）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 11.61 (1H, s, H-9), 8.84 (1H, s, H-4), 8.42 (1H, d,= 4.0 Hz, H-5), 7.82 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 7.65 (1H, t,= 7.1 Hz, H-7), 7.43 (1H, d,= 3.2 Hz, H-3′), 7.34 (1H, t,= 7.5 Hz, H-6), 6.63 (1H, d,= 3.6 Hz, H-4′), 5.53 (1H, brs, 6′-OH), 4.69 (2H, s, H-6′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 166.5 (C-10), 157.3 (C-5′), 151.3 (C-2′), 141.4 (C-8a), 137.0 (C-3), 132.5 (C-1a), 132.0 (C-1), 129.9 (C-4a), 129.0 (C-7), 122.1 (C-5), 121.0 (C-5a), 120.6 (C-6), 115.8 (C-4), 112.9 (C-8), 111.3 (C-3′), 109.3 (C-4′), 56.0 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物10為酒渣堿。

化合物11：白色粉末，分子式為C20H30O6；HR-ESI-MS/: 365.196 1 [M－H]–（C20H29O6，計算值365.197 0）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.96 (1H, s, H-14), 5.81 (1H, dd,= 10.9, 18.0 Hz, H-15), 5.00 (2H, m, H-16), 4.33 (1H, s, H-7), 3.92 (1H, d,= 9.4 Hz, H-20a), 3.83 (1H, m, H-11), 3.32 (1H, d,= 9.4 Hz, H-20b), 1.87 (1H, m, H-12a), 1.85 (1H, m, H-12b), 1.82 (1H, m, H-1a), 1.77 (1H, m, H-3a), 1.70 (1H, m, H-1b), 1.68 (1H, m, H-2a), 1.60 (1H, m, H-2b), 1.40 (3H, s, 19-CH3), 1.22 (3H, s, 18-CH3), 1.18 (1H, m, H-3b), 1.12 (3H, s, 17-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 146.5 (C-15), 136.8 (C-8), 133.3 (C-14), 111.6 (C-16), 106.1 (C-6), 81.4 (C-5), 77.2 (C-9), 73.4 (C-7), 68.5 (C-20), 67.4 (C-11), 50.2 (C-10), 40.5 (C-12), 38.5 (C-13), 38.1 (C-4), 37.9 (C-3), 27.8 (C-18), 25.4 (C-17), 24.9 (C-1), 24.4 (C-19), 18.2 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[17]，故鑒定化合物11為腐皮殼素A。

4 討論

本研究從新鮮附子中分離得到一株內(nèi)生真菌，通過18 S測序比對鑒定為木霉菌sp.。采取一系列化學手段對其固體發(fā)酵產(chǎn)物進行提取分離純化，共鑒定出11個化合物，其中化合物1～3為異香豆素，3者的區(qū)別在于官能團的不同；化合物4、5均為酯類化合物；化合物6、7為簡單吲哚生物堿，是由吲哚母核的3位分別連接乙酸基和甲醛基而成；化合物8為簡單酰胺類生物堿；化合物10為簡單-b-卡波林堿類生物堿；化合物11為二萜類化合物。除化合物5、7外，其余化合物均為首次從木霉菌中分離得到。經(jīng)查閱文獻發(fā)現(xiàn)，化合物2和3均有較強的抗真菌及乙酰膽堿酯酶抑制活性[5-6]；化合物6對細菌生長具有抑制作用[18]；化合物8能有效抑制乙酰膽堿酯酶活性[19]；化合物9能有效誘導人白血病細胞凋亡[12]；化合物10能夠顯著抑制HIV-1的活性[16]；化合物11對金黃色葡萄球菌和石膏樣小孢子菌均顯示出抗菌活性[17]。本研究不僅豐富了木霉菌次生代謝產(chǎn)物的種類，為木霉菌的活性物質研究提供了一定的參考，也為開發(fā)附子內(nèi)生菌的次生代謝產(chǎn)物提供了一定的研究基礎。據(jù)報道，本研究所得化合物大部分具有較好的藥理活性，表明附子內(nèi)生菌的次生代謝產(chǎn)物具有一定藥用潛力，因此可將內(nèi)生菌作為進一步開發(fā)附子藥用潛力的切入點。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents of endophytic fungisp. FZ-31 from

CHEN Xiao-jing, ZHU Li-jun, DUAN Li-xin, LIU Zhong-qiu, CUI Hui, ZHAO Zhong-xiang

School of Pharmaceutical Sciences, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 511400, China

To study the chemical constituents of endophytic fungisp. FZ-31 from.The fermentation ofsp. FZ-31 was isolated and purified through silica gel, Sephadex LH-20 as well as preparative HPLC, and the structures of obtained compounds were identified by NMR, MS, and circular dichroism.Eleven compounds were isolated and identified as (–)-mellein (1), ()-7-hydroxymellein (2), 4-hydroxymellein (3), gibepyrone D (4), methyl ferulate (5), indole-3-acetic acid (6), indol-3-carbaldehyde (7), benzamide (8), (3,6)-4-methyl-6-(1-methylethyl)-3- phenylmethylperhydro-1,4-oxazine-2,5-dione (9), flazine (10), and diaporthein A (11).Except compounds 5 and 7, the remain compounds are isolated fromsp. for the first time. This study provides a certain study basis forand its endophytic fungi.

Debx.; endophytic fungus;sp.; secondary metabolites; (–)-mellein; gibepyrone D; flazine; diaporthein A

R284.1

A

0253 - 2670(2021)04 - 0931 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.004

2020-11-02

國家重點研發(fā)計劃（2017YFE0119900）；國家自然科學基金面上項目（81874343）

陳小晶，女，碩士研究生，研究方向為天然藥物化學。E-mail: 1960243389@qq.cpm

崔 輝，男，博士，研究員，研究方向為天然藥物化學。E-mail: cuihui@gzucm.edu.cn

趙鐘祥，男，博士，教授，研究方向為天然藥物化學。E-mail:zzx37@163.com

[責任編輯 王文倩]