布魯氏菌經(jīng)血傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn)研究*

李美霖，李琳琳，王 俠，李天君，王 鵬，張會(huì)穎，張燕華△

(1.北京市通州區(qū)中心血站，北京 101100；2.河北省張家口市中心血站 075300；3.國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研究所，北京 101100)

布魯氏菌病是由布魯氏桿菌引起的一種人畜共患慢性傳染病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病[1]。布魯氏桿菌是革蘭陰性兼性細(xì)胞內(nèi)寄生細(xì)菌，可通過消化道、呼吸道和接觸傳播等多種途徑侵入人體淋巴結(jié)并在其內(nèi)寄生繁殖形成病灶，細(xì)胞破裂入血，經(jīng)血播散，血液中的細(xì)菌留在淋巴結(jié)、肝、脾和骨髓等處，繼而出現(xiàn)多發(fā)性病灶，常累及多個(gè)器官，病程較長(zhǎng)，反復(fù)發(fā)作，不易愈合，嚴(yán)重者喪失勞動(dòng)和生活能力[2-3]。近年來隨著布魯氏菌病的增多，出現(xiàn)多例輸血傳播感染布魯氏菌病的病例[4]，使其成為輸血傳播疾病中一個(gè)潛在的危險(xiǎn)源。北京獻(xiàn)血者多為周邊地區(qū)外來人口，山西、內(nèi)蒙古、河北是我國(guó)布魯氏菌病發(fā)病的重點(diǎn)疫區(qū)，密云、平谷、昌平、懷柔等區(qū)布魯氏病感染率也呈增加趨勢(shì)[5]。為調(diào)查北京部分地區(qū)健康獻(xiàn)血人群布魯氏菌病感染情況，了解布魯氏菌病經(jīng)血傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn)，本研究對(duì)2 657份健康獻(xiàn)血者血液標(biāo)本布魯氏菌病感染情況進(jìn)行了調(diào)查和分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標(biāo)本來源

選擇2019年4-12月北京市通州區(qū)中心血站采集的大興、平谷、順義、通州、朝陽5個(gè)區(qū)2 657份健康獻(xiàn)血者血液標(biāo)本為研究對(duì)象，留取乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿1 mL，4 ℃保存后于第2天進(jìn)行布魯氏菌抗體檢測(cè)。

1.1.2試劑與儀器

虎紅平板試驗(yàn)(RBPT)和試管凝集試驗(yàn)(SAT)抗原、陰陽性對(duì)照血清(均由賽諾利康生物技術(shù)有限公司提供，所有試劑均在有效期內(nèi))，凝血酶時(shí)間(TT)測(cè)定試劑盒(上海太陽生物技術(shù)有限公司，批號(hào)121167)，人布魯氏菌抗體IgG酶聯(lián)免疫分析試劑盒(森貝伽生物科技有限公司，批號(hào)201810)，0.5%苯酚(西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)190614)，0.9%生理鹽水(石家莊四藥有限公司，批號(hào)1905243201)。全自動(dòng)酶標(biāo)儀(奧地利，型號(hào)Zenyth340)，37 ℃恒溫水浴箱(北京市醫(yī)療設(shè)備廠，型號(hào)BHW-Ⅳ)。

1.2 方法

1.2.1血清學(xué)檢查

參照WS269-2007《布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行試驗(yàn)操作和結(jié)果判斷。

1.2.2RBPT

檢出的抗體是IgG類，RBPT必須使用人血清進(jìn)行檢測(cè)，為消除EDTA-K2抗凝劑對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾，參照文獻(xiàn)[6]在血漿標(biāo)本中1∶1加入TT測(cè)定試劑，(37±1)℃孵育1 h，待血漿凝固去除Fg后，用微量加樣器槍頭擠壓凝塊后3 000 r/min離心5 min，吸出上清液30 μL進(jìn)行RBPT。結(jié)果判定：用“+”表示凝集程度，即++++、+++、++、+。

1.2.3SAT

主要用于檢測(cè)布魯氏菌IgM類抗體。效價(jià)：以產(chǎn)生50%凝集的(凝集程度++)血清最高稀釋倍數(shù)為受檢血清的效價(jià)；確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)：≥1∶100(+++)為陽性，≥1∶50(++)為可疑。

1.2.4ELISA

RBPT和SAT兩種方法陽性的標(biāo)本采用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中布魯氏菌IgG抗體水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度(A)值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中人布魯氏菌IgG抗體濃度。Cut-off值為0.990。正常人濃度為100～398 ng/L。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 RBPT檢測(cè)結(jié)果

RBPT陽性4例(0.15%)，凝集程度均為“++”。

2.2 SAT檢測(cè)結(jié)果

SAT陽性標(biāo)本中女性比男性多，牧區(qū)比其他地區(qū)多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。SAT陽性4例(0.15%)，3例血清效價(jià)大于或等于1∶100(+++)，1例血清效價(jià)大于或等于1∶200(++++)，其中SAT及RBPT雙陽2例。SAT另檢出22例可疑標(biāo)本，血清效價(jià)大于或等于1∶50(++)。

表1 26例SAT陽性及可疑標(biāo)本獻(xiàn)血者資料統(tǒng)計(jì)

續(xù)表1 26例SAT陽性及可疑標(biāo)本獻(xiàn)血者資料統(tǒng)計(jì)

2.3 ELISA檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)出陽性標(biāo)本1例(0.04%)，A值為120.0，濃度為470.875 ng/L。標(biāo)準(zhǔn)品濃度及A值見表2，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

表2 標(biāo)準(zhǔn)品濃度及A值

圖1 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 3種方法檢出陽性標(biāo)本結(jié)果比較

2 657份健康獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，RBPT檢出IgG類抗體陽性4例，SAT檢出IgM抗體陽性4例，其中IgM及IgG雙陽2例，SAT效價(jià)均大于或等于1∶100(+++)。ELISA檢測(cè)出IgG抗體陽性標(biāo)本1例，濃度為470.875 ng/L，此例標(biāo)本SAT效價(jià)大于或等于1∶200(++++)，RBPT結(jié)果為陰性，見表3。

表3 3種方法檢出陽性標(biāo)本結(jié)果比較

3 討 論

布魯氏菌病主要通過食用未經(jīng)高溫消毒的牛奶和奶制品的消費(fèi)者傳播，有研究報(bào)道高濃度布魯氏菌感染菌血癥具有較高的輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)。1994-1995年墨西哥血站的18 490名獻(xiàn)血者中，有317名(1.71%)布魯氏菌陽性。ANTONIO等在1999年提出布魯氏菌抗體陽性及無癥狀者均不應(yīng)參加獻(xiàn)血。2014年，MOHAMMED等[7]報(bào)道蘇丹獻(xiàn)血者中布魯氏菌陽性占15.3%，而蘇丹血液中心的獻(xiàn)血者健康檢查中并未包括布魯氏桿菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)為減低輸血風(fēng)險(xiǎn)，強(qiáng)調(diào)應(yīng)對(duì)潛在感染布魯氏病者進(jìn)行獻(xiàn)血前健康征詢。我國(guó)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2011)規(guī)定布魯氏菌病病愈未滿兩年暫時(shí)不能獻(xiàn)血，但尚未將布魯氏菌檢測(cè)列入獻(xiàn)血者血液篩查項(xiàng)目。

自20世紀(jì)50年代中期以來，中國(guó)人布魯氏菌病疫情經(jīng)歷了多次高低起伏，給國(guó)民健康帶來了危害，而且影響畜牧業(yè)的發(fā)展。國(guó)內(nèi)關(guān)于獻(xiàn)血人群布魯氏菌病篩查的報(bào)道較少，WANG等[8]對(duì)來自新疆喀什地區(qū)的3 896名獻(xiàn)血者進(jìn)行布魯氏菌病篩查，RBPT檢測(cè)出135例(3.5%)陽性標(biāo)本，經(jīng)PCR基因測(cè)序15例為確認(rèn)陽性，同時(shí)對(duì)來自深圳地區(qū)的399名獻(xiàn)血者進(jìn)行布魯氏菌病篩查，未篩查出陽性病例。本研究結(jié)果顯示，北京部分地區(qū)健康獻(xiàn)血者經(jīng)獻(xiàn)血前征詢均無流行病史及臨床表現(xiàn)，SAT陽性及可疑標(biāo)本女性比例多于男性，牧區(qū)比例多于其他地區(qū)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在北京大興、平谷、順義、通州、朝陽5個(gè)區(qū)2 657份健康獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，RBPT檢出IgG類抗體陽性4例，SAT檢出IgM抗體陽性4例，其中IgM及IgG雙陽性2例，SAT效價(jià)均大于或等于1∶100(+++)。ELISA檢測(cè)出IgG抗體陽性標(biāo)本1例，濃度為470.875 ng/L，此例標(biāo)本SAT效價(jià)大于或等于1∶200(++++)，RBPT結(jié)果為陰性。本次血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，IgM抗體陽性提示為急性感染期，IgG陽性者多提示慢性感染或既往感染，血液進(jìn)行保密性棄血處理。由于布魯氏菌病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸比較復(fù)雜，臨床表現(xiàn)多種多樣，因此對(duì)人布魯氏菌病的診斷還應(yīng)結(jié)合患者流行病學(xué)接觸史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查。如果布魯氏菌抗體陽性獻(xiàn)血者隱瞞流行病史或臨床表現(xiàn)不明顯，很容易造成輸血感染布魯氏菌病的風(fēng)險(xiǎn)。

近年來，由于新發(fā)人畜共患病如瘋牛病、寨卡病毒等出現(xiàn)人因輸血感染的病例，世界衛(wèi)生組織和FDA均制訂了血液行業(yè)相關(guān)病毒檢測(cè)法規(guī)和推薦意見。我國(guó)政府于2016年3月發(fā)布重新修訂的《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)》明確了國(guó)家和省級(jí)衛(wèi)生計(jì)生行政部門規(guī)定的地方性、時(shí)限性輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物可納入血液檢測(cè)的范圍。目前，布魯氏菌病已在我國(guó)25個(gè)省(直轄市)流行，在牧區(qū)尤為嚴(yán)重[9-11]。血清學(xué)診斷是布魯氏菌病診斷最常用的手段，RBPT為初篩試驗(yàn)，陽性者采用SAT確診[12-13]。本研究使用的3種方法檢出率分別為0.15%、0.15%、0.04%。RBPT和SAT靈敏度相同，高于ELISA。RBPT和SAT操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用較少，但均為手工法，不適合獻(xiàn)血人群大規(guī)模初篩。ELISA更符合采供血機(jī)構(gòu)實(shí)際工作需要，但仍需綜合采用多種檢測(cè)方法對(duì)布病進(jìn)行鑒定，這樣才能提高診斷的準(zhǔn)確性[14-15]。

綜上所述，為降低輸血性傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對(duì)潛在感染布魯氏菌病的獻(xiàn)血者進(jìn)行嚴(yán)格的健康征詢，并于布魯氏菌病流行區(qū)域開展布魯氏菌的血液篩查，對(duì)保障血液安全有重要意義。