顱內(nèi)腫瘤患者中Cyclin E、Ki-67蛋白表達水平及其臨床意義

白軍杰 段攀鋒 丁清林

顱內(nèi)腫瘤亦被稱為顱腦腫瘤，是顱腔內(nèi)發(fā)生的一種神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，包括源生性神經(jīng)上皮、腦膜、外周神經(jīng)腫瘤，淋巴腫瘤，顆粒細胞腫瘤以及轉(zhuǎn)移性瘤等[1]。顱內(nèi)腫瘤病因多元，包括遺傳、物理因素、化學(xué)因素以及生物因素等[2-3]。其病機則與細胞過度增殖及細胞周期失控有關(guān)。Cyclin E蛋白是細胞G1周期素之一，對細胞增殖具有重要作用；Ki-67蛋白則是細胞于G1、S、G2、M期出現(xiàn)的核抗原，可有效反應(yīng)細胞增殖活性[4]。為探究顱內(nèi)腫瘤患者的Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況，本文對我院200例顱內(nèi)腫瘤患者進行分析，現(xiàn)將結(jié)果進行如下報告。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集我院2016年10月～2020年5月期間接受治療的顱內(nèi)腫瘤患者進行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡在18周歲以上；②患者經(jīng)頭顱CT或MRI確診；③無其他系統(tǒng)嚴重疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者的臨床資料不全；②合并有其他顱腦疾病或免疫功能障礙者。本次研究共納入200例，其中惡性組130例，男性85例，女性45例，年齡40-65歲，平均年齡(52.35±4.24)歲；良性組70例，男性38例，女性32例，年齡42～67歲，平均年齡(52.38±5.02)歲。兩組患者年齡、性別等一般資料比較無明顯差別(P<0.05)。

1.2 方法

選用免疫組化實驗觀察二組患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況：將樣本常規(guī)切片后，烤片脫蠟，蒸餾水漂洗，高壓修復(fù)抗原，滴入10 ml H2O2阻斷，PBS漂洗，二抗，37 ℃烘烤10 min，PBS洗滌，BAD顯色，沖洗，蘇木精復(fù)染，封片，鏡檢。實驗試劑主要由上海壹研生物技術(shù)有限公司提供。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：以棕黃色、棕褐色顆粒為Cyclin E和Ki-67染色細胞。染色強度為中度，且陽性細胞數(shù)≥5%為陽性[5]。

1.3 評價指標(biāo)

觀察二組患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況，比較惡性組患者不同臨床病理特征患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況，分析影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況的因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本文涉及的計數(shù)和計量資料分別采用%和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，并應(yīng)用SPSS 11.5軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料行卡方檢驗，計量資料行t檢驗，采用Logistic回歸分析法分析影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況的因素，當(dāng)P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況比較

良性組Cyclin E和Ki-67陽性率均低于惡性組，見表1。

表1 兩組患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況比較(例，%)

2.2 惡性組不同臨床病理特征患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況比較

無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為高分化的惡性腫瘤患者的Cyclin E和Ki-67陽性表達率較高，而不同年齡、性別、TNM分期和腫瘤大小的惡性腫瘤患者的Cyclin E和Ki-67陽性表達率無明顯差別，見表2。

表2 惡性組不同臨床病理特征患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況比較/例

2.3 影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況的因素

將單因素分析有意義的因素和腫瘤性質(zhì)作為自變量，以患者的Cyclin E和Ki-67是否陽性表達作為因變量，進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，腫瘤惡性、分化程度高和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達的危險因素，見表3。

表3 影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達情況的因素

3 討論

顱內(nèi)腫瘤對人體危害極大，即便是良性腫瘤也將因壓迫正常腦組織而誘發(fā)頭痛、視力障礙、精神及意識障礙等嚴重并發(fā)癥[6]。細胞周期失調(diào)是顱內(nèi)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要原因，因此探究細胞調(diào)控因子在顱內(nèi)腫瘤中的表達情況，并分析其意義具有重要臨床價值。Cyclin E蛋白是細胞周期蛋白的重要組成部分，對阻滯細胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)換具有重要作用[7]。高表達的Cyclin E蛋白還可通過活化周期蛋白依賴性激酶來縮短細胞G1期，加速S期的到來，促使細胞中心體非常態(tài)增殖，并導(dǎo)致細胞周期失調(diào)，細胞異常增殖，最終形成腫瘤[8]。近些年的研究表明，Cyclin E在乳腺癌、卵巢癌、胃癌等疾病中呈明顯高表達，并且與患者預(yù)后密切相關(guān)[9]。Ki-67蛋白是臨床公認的細胞活性及細胞增殖指標(biāo)，其表達水平與腫瘤細胞活性密切相關(guān)，這也是該物質(zhì)被部分學(xué)者納為原癌基因的重要原因[10]。已有研究表明，當(dāng)局部組織內(nèi)的Ki-67達到一定閥值后，其誘發(fā)的細胞過度增殖將成為腫瘤前置條件，但這一閥值臨床尚無明確結(jié)論[11]。還有研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67與Cyclin E等細胞周期調(diào)控因子可通過協(xié)同作用增強癌細胞的增殖及轉(zhuǎn)移能力，癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生不僅取決于腫瘤的生物學(xué)特性，還與宿主免疫因素、腫瘤細胞與胞外基質(zhì)的相互作用有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者cyclinE陽性率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，臨床或可通過靶向控制這些細胞因子的表達來抑制腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移[12]。

本組研究中，良性組患者的Cyclin E和Ki-67陽性率均低于惡性組，提示Cyclin E和Ki-67的過表達可能是腫瘤惡性病變的重要原因。Cyclin E和Ki-67作為癌基因，是臨床公認的良性腫瘤向惡性轉(zhuǎn)化的分子標(biāo)準(zhǔn)，這與這二組物質(zhì)可促使細胞非常態(tài)由G1進入S期有關(guān)，這種刺激可以加速細胞增殖，導(dǎo)致細胞染色體缺失，最終促使良性腫瘤向惡性轉(zhuǎn)變[13]。本研究還發(fā)現(xiàn)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為高分化的惡性腫瘤患者的Cyclin E和Ki-67陽性表達率較高，而不同年齡、性別、TNM分期和腫瘤大小的惡性腫瘤患者的Cyclin E和Ki-67陽性表達率無明顯差別，表明Cyclin E和Ki-67參與著顱內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移及分化，Cyclin E和Ki-67的高表達使腫瘤細胞由G1期進入S期的進程加快，引發(fā)染色體缺失。高分化腫瘤的細胞周期和增殖的失控程度高于低分化者，因此Cyclin E和Ki-67的陽性表達率也高于低分化者。有研究發(fā)現(xiàn)，低危和高危HPV感染的鱗狀上皮細胞內(nèi)均存在Cyclin E高表達情況，并且Cyclin E表達水平與宮頸腫瘤的良性形態(tài)有關(guān)，同時還與宮頸癌分化程度相關(guān)[14]。還有研究發(fā)現(xiàn)，高、中、低分化的宮頸癌組織內(nèi)Ki-67均呈異常表達情況，并且其陽性率與分化程度正相關(guān)，癌組織分化程度越高，Ki-67陽性率越高，這與本組研究結(jié)果相似[15-16]。本研究通過回歸分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤惡性、分化程度高和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響顱內(nèi)腫瘤患者Cyclin E和Ki-67蛋白表達的危險因素。

本研究通過分組實驗，選用免疫組化實驗對良惡性顱內(nèi)腫瘤內(nèi)的Cyclin E和Ki-67表達情況進行檢測，同時將單因素分析有意義的因素和腫瘤性質(zhì)作為自變量，對Cyclin E和Ki-67陽性影響因素進行了Logistic分析，發(fā)現(xiàn)Cyclin E和Ki-67表達水平與腫瘤性質(zhì)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，研究具有可信性。但顱內(nèi)腫瘤性質(zhì)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是一個多因素，多細胞因子參與結(jié)果，本組研究僅從細胞周期調(diào)控分子角度進行了探究，研究還存在諸多問題。

綜上所述，Cyclin E和Ki-67表達水平與顱內(nèi)腫瘤患者腫瘤性質(zhì)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，臨床或可通過調(diào)控這兩種因子的表達來實現(xiàn)腫瘤防治，這將可能是腫瘤治療的新靶向。