模擬空運(yùn)過程中克氏原螯蝦生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律

郝晨光 李軍濤 張澤龍 張秀霞 冼健安 王冬梅

摘要：【目的】明確空運(yùn)過程中影響克氏原螯蝦存活率的關(guān)鍵環(huán)境因子，為有針對(duì)性地進(jìn)行空運(yùn)前預(yù)處理提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā磕M克氏原螯蝦空運(yùn)條件，將克氏原螯蝦放入泡沫箱中，加入冰瓶后進(jìn)行完全密封（密封組）或打孔通氣（打孔組）。模擬空運(yùn)過程實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)泡沫箱內(nèi)的含氧量、溫度和相對(duì)濕度;模擬空運(yùn)18 h后采集克氏原螯蝦的血清、肝胰腺、鰓絲及中腸等組織樣品，分別測(cè)定血清溶菌酶（LZM）活性、多酚氧化酶（PPO）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，肝胰腺SOD活性、總抗氧化能力（T-AOC）、MDA含量及蛋白質(zhì)羰基含量，以及鰓絲Na+K+-ATP活性;并制作克氏原螯蝦肝胰腺、鰓絲及中腸組織石蠟切片，統(tǒng)計(jì)模擬空運(yùn)結(jié)束后克氏原螯蝦的存活率?！窘Y(jié)果】在模擬空運(yùn)過程中，相對(duì)濕度變化不明顯，溫度和含氧量的變化引起克氏原螯蝦應(yīng)激反應(yīng)，是影響空運(yùn)的主要環(huán)境因子。經(jīng)模擬空運(yùn)后，密封組克氏原螯蝦血清LZM活性、PPO活性及MDA含量顯著升高（P<0.05，下同），SOD活性顯著降低;肝胰腺蛋白質(zhì)羰基含量、MDA含量和T-AOC水平均顯著高于打孔組及模擬空運(yùn)前，而SOD活性變化不顯著;密封組和打孔組克氏原螯蝦經(jīng)模擬空運(yùn)18 h后，其鰓絲Na+K+-ATP活性均顯著高于模擬空運(yùn)前?？耸显r經(jīng)模擬空運(yùn)18 h后其存活率較高，但模擬空運(yùn)后暫養(yǎng)1周發(fā)現(xiàn)密封組和打孔組的克氏原螯蝦存活率均從第4 d開始顯著下降，至?xí)吼B(yǎng)第7 d密封組克氏原螯蝦的存活率僅為59.33%;且其鰓絲有大量附著物，微血管腔結(jié)構(gòu)已完全消失，大部分呼吸上皮細(xì)胞脫落、壞死，鰓膜結(jié)構(gòu)遭到破壞?！窘Y(jié)論】溫度和含氧量是影響克氏原螯蝦空運(yùn)存活率的主要環(huán)境因子。模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦造成嚴(yán)重?fù)p傷且不可逆，在模擬空運(yùn)結(jié)束后克氏原螯蝦因自身缺乏修復(fù)能力而大量死亡。因此，實(shí)際生產(chǎn)中可通過在運(yùn)輸前投喂免疫增強(qiáng)劑，或在運(yùn)輸后優(yōu)化其暫養(yǎng)環(huán)境等方式以提高克氏原螯蝦空運(yùn)存活率，進(jìn)而確得其引種成功。

關(guān)鍵詞：克氏原螯蝦;模擬空運(yùn);環(huán)境因子;生理生化指標(biāo);存活率

中圖分類號(hào)：S981.21? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）10-2896-08

Abstract： 【Objective】 To identify the key environmental factors affecting Procambarus clarkii survival during air transportation and to provide the scientific basis for targeted pre- and post-transport treatments to improve survival rates. 【Method】 The conditions of air transportation were simulated by placing the crayfish in foam boxes under ice-cold conditions with （perforated group） or without （sealed group） ventilation. Real-time monitoring of oxygen content， temperature and relative humidity in the foam box was performed during simulated air transportation. After 18 h of simulation， the serum， hepatopancreas， gill filament and midgut samples were collected and the serum activities of lysozyme， polyphenol oxidase （PPO）， superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） were determined. Hepatopancreas SOD activity， total antioxidant capacity （T-AOC）， MDA content， protein carbonyl content and gill filament Na+K+ -ATPASE activity were used， together with paraffin sections of the hepatopancreas， gill filaments and midgut， to calculate the survival rate of P. clarkii after simulated air transport. 【Result】 During simulated air transport， the relative humidity was not obviously altered， while the changes in temperature and oxygen content were significantly affected and observed to cause stress reactions in P. clarkii. After the simulation， the activities of lysozyme， PPO and MDA in the serum of the sealed group were significantly increased （P<0.05， the same below）， while the activities of SOD were significantly decreased. Hepatopancreas protein carbonyl content， MDA content and T-AOC level were significantly higher than those in the perforated and control groups， while SOD activity showed no significant change. The activity of Na+K+-ATP in gill filaments of both the sealed and perforated groups was significantly higher than that of the control group. After simulated air transport for 18 h， the cray-fish survival rate was higher. However， the survival rate of both the sealing and perforated group decreased significantly from the 4th day， and only 59.33% of the sealed group was alive on the 7th day. Most of the respiratory epithelial cells were exfoliated and necrotic， and the branchial membrane structure was destroyed. 【Conclusion】 The changes of temperature and oxygen content are the main environmental factors affecting the survival rate of P. clarkii during air transportation. The simulated air transport caused serious and irreversible damage to P. clarkii and a large number of P. clarkii died after their return to control conditions. Therefore， the survival rate of air-transported P. clarkii can be improved by feeding immune enhancers before transportation or optimizing the environmental conditions following transport to improve recovery rates.

Key words： Procambarus clarkii; simulated air transportation; environmental factors; biochemical indicators; survival rate

Foundation item：Hainan Key Research and Development Project（ZDEF2018027）;Central Public-interest Scientific Institution Basal Research Fund for Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences（1630052019013）

0 引言

【研究意義】克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）又名小龍蝦，原產(chǎn)于北美洲，現(xiàn)已發(fā)展成為我國(guó)淡水蝦類中的重要資源（姜愛蘭等，2020）。長(zhǎng)江中下游地區(qū)是目前我國(guó)克氏原螯蝦養(yǎng)殖的主要集中區(qū)，屬于亞熱帶季風(fēng)性氣候，每年10月天氣轉(zhuǎn)涼后，克氏原螯蝦開始冬眠，直至翌年3月均無新鮮的活蝦上市。海南省地處熱帶地區(qū)，其氣候條件非常適合克氏原螯蝦生長(zhǎng)，若能引種成功可有效填補(bǔ)冬春季節(jié)克氏原螯蝦市場(chǎng)的空白。長(zhǎng)途運(yùn)輸是生物活體引種的必經(jīng)環(huán)節(jié)，其中以空運(yùn)所需時(shí)間最短、運(yùn)輸應(yīng)激最小，對(duì)引種對(duì)象損傷低，是一種理想的引種運(yùn)輸方法。因此，掌握空運(yùn)過程中克氏原螯蝦各項(xiàng)生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律，對(duì)有效提高克氏原螯蝦引種成功率具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】至今，針對(duì)甲殼類動(dòng)物空氣暴露及低氧脅迫的研究已有較多報(bào)道，且對(duì)離水條件下甲殼類動(dòng)物體內(nèi)生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律有所了解。Rabin等（1996）發(fā)現(xiàn)無水干運(yùn)會(huì)引起斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）肝胰腺的氧化應(yīng)激及損傷，且影響HSP70蛋白和鐵蛋白的表達(dá)。Paterson等（1997）研究發(fā)現(xiàn)，在將捕撈龍蝦干運(yùn)至母艦的過程中由于水流量下降會(huì)迅速降低溶解氧含量，致使龍蝦血淋巴當(dāng)中的乳酸濃度也隨之下降。Oliveira等（2001）對(duì)三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）進(jìn)行干露脅迫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺氧導(dǎo)致密封組三疣梭子蟹的葡萄糖攝取和糖原合成明顯減少，而肝胰腺糖原動(dòng)員和血淋巴葡萄糖濃度呈上升趨勢(shì)。de Oliveira等（2005）對(duì)中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）進(jìn)行低氧脅迫時(shí)發(fā)現(xiàn)，缺氧狀態(tài)下其體內(nèi)的過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）活性增強(qiáng)，而超氧化物歧化酶（SOD）活性降低。Zenteno-Savín等（2006）在凡納濱對(duì)蝦（P. vannamei）的低氧脅迫研究中發(fā)現(xiàn)，缺氧后凡納濱對(duì)蝦肝胰腺的脂質(zhì)過氧化（TBARS）水平高于鰓絲和肌肉，且缺氧恢復(fù)會(huì)造成其抗氧化能力降低。姜娜等（2014）在三疣梭子蟹的干露脅迫研究中發(fā)現(xiàn)，干露脅迫時(shí)間對(duì)其SOD活性和丙二醛（MDA）含量均無顯著影響，但顯著影響肝胰臟總抗氧化能力（T-AOC）。段亞飛等（2015）研究表明，經(jīng)干露脅迫后日本囊對(duì)蝦（P. japonicus）的谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）活性、CAT活性、SOD活性及MDA含量變化顯著，可作為日本囊對(duì)蝦干露脅迫的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。Lu等（2016）在中華絨螯蟹模擬干運(yùn)過程中發(fā)現(xiàn)，干露的中華絨螯蟹在受熱應(yīng)激刺激后，其血淋巴葡萄糖和脂質(zhì)水平均發(fā)生顯著變化。連春盈等（2017）通過對(duì)脊尾白蝦（Exopalaemon carinicauda Holthuis）進(jìn)行干露脅迫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)密封組脊尾白蝦肝胰腺、鰓絲、肌肉的琥珀酸脫氫酶（SDH）和細(xì)胞色素氧化酶（CCO）活性均隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而延胡索酸還原酶（FRD）和乳酸脫氫酶（LDH）活性隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低的變化趨勢(shì)。王海鋒等（2019）在對(duì)克氏原螯蝦進(jìn)行干露脅迫后發(fā)現(xiàn)，密封組克氏原螯蝦的T-AOC無顯著變化，但CAT活性隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，SOD活性顯著降低，MDA含量在干露脅迫第24 h達(dá)峰值?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)难芯恳贼~類較多，蝦蟹類的研究相對(duì)較少，要確保存活率必須綜合考慮各項(xiàng)生理生化指標(biāo)參數(shù)，包括應(yīng)激程度及健康狀況等因素（Pan et al.，2007;吳佳靜等，2016）?？耸显r巨大的市場(chǎng)需求促使其養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，而克氏原螯蝦引種需通過無水空運(yùn)來實(shí)現(xiàn)，因此探究克氏原螯蝦在空運(yùn)過程中各項(xiàng)生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律及運(yùn)輸后的存活率，對(duì)有效優(yōu)化運(yùn)輸環(huán)境參數(shù)具有重要意義?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過監(jiān)測(cè)模擬空運(yùn)過程中的各項(xiàng)環(huán)境因子，以及運(yùn)輸前后克氏原螯蝦各項(xiàng)生理生化指標(biāo)的變化，明確空運(yùn)過程中影響克氏原螯蝦存活率的關(guān)鍵環(huán)境因子，為有針對(duì)性進(jìn)行空運(yùn)前預(yù)處理提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 模擬空運(yùn)

在海南省文昌市苑頭鎮(zhèn)克氏原螯蝦養(yǎng)殖基地，選取規(guī)格相近、活力較好的克氏原螯蝦（平均體重24.0±0.5 g）。將克氏原螯蝦分別裝入6個(gè)泡沫箱中，每箱100只，泡沫箱內(nèi)提前放好冰瓶。其中，試驗(yàn)組3個(gè)泡沫箱完全密封，打孔組3個(gè)泡沫箱打孔透氣。泡沫箱中插入氧氣測(cè)定儀和相對(duì)濕度測(cè)定儀，進(jìn)行環(huán)境因子實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。將泡沫箱置于室內(nèi)（提前打開空調(diào)使室內(nèi)溫度保持在24 ℃，模擬空運(yùn)貨倉(cāng)環(huán)境）進(jìn)行18 h模擬空運(yùn)。

1. 2 樣品采集

模擬空運(yùn)前進(jìn)行0 h取樣，以無菌注射器吸入抗凝劑后抽取克氏原螯蝦血淋巴液，注入1.5 mL無菌離心管中，2500 r/min離心10 min，收集血清置于新的無菌離心管中并迅速放入液氮，-80 ℃保存?zhèn)溆?。同時(shí)用無菌手術(shù)剪摘取肝胰腺、鰓絲及中腸等組織，裝入1.5 mL無菌離心管中放入液氮，-80 ℃保存;取部分肝胰腺、鰓絲和中腸組織放入甲醛固定液中固定，用于制作石蠟切片。模擬空運(yùn)結(jié)束后，打開泡沫箱，統(tǒng)計(jì)克氏原螯蝦存活率并進(jìn)行取樣（同0 h取樣），將剩余克氏原螯蝦放入玻璃缸暫養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)暫養(yǎng)1周后的存活率。

1. 3 測(cè)定指標(biāo)及方法

通過手機(jī)實(shí)時(shí)傳送溫度、相對(duì)濕度及含氧量隨時(shí)間的變化情況，試驗(yàn)結(jié)束后導(dǎo)出數(shù)據(jù)并繪制折線圖。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的溶菌酶（LZM）測(cè)試盒（A050-1-1）、多酚氧化酶（PPO）測(cè)試盒（A136-1-1）、總超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（A001-3-2）、總抗氧化能力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒（比色法，A015-1-2）、微量丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒（TBA法，A003-2-2）、蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定試劑盒（紫外比色法，A087-1-2）、超微量Na+K+-ATP酶試劑盒（A070-2-2）分別測(cè)定克氏原螯蝦血清LZM活性、PPO活性、SOD活性及MDA含量，肝胰腺SOD活性、T-AOC水平、MDA含量及蛋白質(zhì)羰基含量，以及鰓絲Na+K+-ATP活性。同時(shí)，參照溫久福等（2019）的方法制作克氏原螯蝦肝胰腺、鰓絲及中腸組織石蠟切片，在顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS 18.0進(jìn)行整理及單因素方差分析（One-way ANVOA）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 模擬空運(yùn)過程中泡沫箱內(nèi)含氧量的變化趨勢(shì)

由圖1可知，密封組和打孔組泡沫箱內(nèi)的含氧量均隨模擬空運(yùn)時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。密封組由于完全密封，含氧量下降速率明顯高于打孔組;至模擬空運(yùn)結(jié)束后，密封組泡沫箱內(nèi)的含氧量為5.00%，遠(yuǎn)低于打孔組的18.30%。由此可見，密封環(huán)境很容易造成運(yùn)輸過程中克氏原螯蝦缺氧。

2. 2 模擬空運(yùn)過程中泡沫箱內(nèi)相對(duì)濕度的變化趨勢(shì)

由圖2可知，密封組和打孔組泡沫箱內(nèi)的相對(duì)濕度均隨模擬空運(yùn)時(shí)間的延長(zhǎng)而上升，且最終的相對(duì)濕度達(dá)到100.00%左右，二者差異不明顯。相對(duì)濕度上升可能是由于冰瓶的蒸發(fā)及克氏原螯蝦的呼吸作用所致。

2. 3 模擬空運(yùn)過程中泡沫箱內(nèi)溫度的變化趨勢(shì)

由圖3可知，密封組和打孔組泡沫箱內(nèi)的溫度均隨模擬空運(yùn)時(shí)間的延長(zhǎng)呈先下降后上升的變化趨勢(shì)，可能與泡沫箱內(nèi)放置冰瓶有關(guān)。前期冰瓶起到降溫的作用，但隨著模擬空運(yùn)時(shí)間的推移，冰瓶的降溫作用逐漸不明顯，而導(dǎo)致泡沫箱內(nèi)溫度升高。密封組泡沫箱屬于密封環(huán)境，其溫度變化較劇烈，運(yùn)輸期間溫差達(dá)7.6 ℃;而打孔組由于打孔透氣，受外界環(huán)境影響，其總體溫差相對(duì)不明顯，僅為3.4 ℃。

2. 4 模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦各項(xiàng)生物酶活性的影響

模擬空運(yùn)結(jié)束后，密封組克氏原螯蝦血清LZM活性顯著高于打孔組及模擬空運(yùn)前（P<0.05，下同），而打孔組克氏原螯蝦血清LZM活性與模擬空運(yùn)前相比差異不顯著（P>0.05，下同）;在血清MDA含量方面，模擬空運(yùn)前后及密封組與打孔組間的差異均不顯著，但以密封組克氏原螯蝦的含量最高;密封組克氏原螯蝦血清PPO活性顯著高于打孔組及模擬空運(yùn)前，但其SOD活性顯著低于打孔組及模擬空運(yùn)前;打孔組克氏原螯蝦血清PPO活性和SOD活性與模擬空運(yùn)前相比，其差異均不顯著（表1）。

模擬空運(yùn)結(jié)束后，密封組克氏原螯蝦肝胰腺蛋白質(zhì)羰基含量和MDA含量均顯著高于打孔組及模擬空運(yùn)前，而打孔組與模擬空運(yùn)前相比，差異均不顯著（表2）;密封組克氏原螯蝦肝胰腺T-AOC水平顯著高于打孔組，且二者又顯著高于模擬空運(yùn)前;克氏原螯蝦肝胰腺SOD活性在模擬空運(yùn)前后的差異不顯著，且密封組與打孔組間的差異也不顯著。密封組和打孔組克氏原螯蝦經(jīng)模擬空運(yùn)后，其鰓絲Na+K+-ATP活性均顯著高于模擬空運(yùn)前，但二者差異不顯著。

2. 5 模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦器官組織結(jié)構(gòu)的影響

2. 5. 1 中腸組織切片觀察結(jié)果 模擬空運(yùn)前克氏原螯蝦中腸組織上皮層、基膜、結(jié)締組織層、肌肉層和外膜結(jié)構(gòu)完整，上皮被覆單層矮柱狀上皮，排列整齊，部分細(xì)胞染色較淺;疏松結(jié)締組織層未見明顯的細(xì)胞壞死和血細(xì)胞滲出;基膜、肌層和外膜未見明顯病理變化（圖4-A）。打孔組克氏原螯蝦中腸組織上皮層、基膜、結(jié)締組織層、肌肉層和外膜結(jié)構(gòu)較完整，上皮被覆單層矮柱狀上皮，排列較整齊，部分細(xì)胞空泡變性，細(xì)胞腫大，排列不整齊，總體受損程度低于密封組克氏原螯蝦;結(jié)締組織層、基膜、肌層和外膜未見明顯病理變化（圖4-B）。密封組克氏原螯蝦中腸組織上皮層、基膜、結(jié)締組織層、肌肉層和外膜結(jié)構(gòu)較完整，上皮被覆單層矮柱狀上皮，部分細(xì)胞脫落，略顯腫脹，排列紊亂;結(jié)締組織層、基膜、肌層和外膜也未見明顯壞死及血細(xì)胞滲出等病理變化（圖4-C）。

2. 5. 2 肝胰腺組織切片觀察結(jié)果 模擬空運(yùn)前克氏原螯蝦肝胰腺小管結(jié)構(gòu)正常，基膜完整，管腔清晰，呈星形，B細(xì)胞和R細(xì)胞分布較均勻，肝細(xì)胞內(nèi)有較多空泡;肝胰腺小管周圍間質(zhì)內(nèi)主要為疏松結(jié)締組織及豐富的血竇，血竇內(nèi)主要為顆粒細(xì)胞及半顆粒細(xì)胞，可見少量血細(xì)胞，未見明顯血細(xì)胞滲出及其他病理變化（圖5-A）。打孔組克氏原螯蝦肝胰腺小管結(jié)構(gòu)較完整，部分肝細(xì)胞腫脹，致使管腔不規(guī)則，部分細(xì)胞輪廓模糊不清，變性細(xì)胞腫大變形，胞質(zhì)內(nèi)空泡體積增大，且空泡內(nèi)出現(xiàn)顆粒樣內(nèi)容物;肝胰腺小管周圍間質(zhì)內(nèi)可見少量均質(zhì)紅染的蛋白樣物質(zhì)沉積，未見明顯血細(xì)胞滲出及其他病理變化（圖5-B）。密封組克氏原螯蝦肝胰腺小管結(jié)構(gòu)較完整，大量肝細(xì)胞明顯腫大變形，空泡體積顯著增大;肝胰腺小管周圍間質(zhì)結(jié)構(gòu)較正常，未見明顯血細(xì)胞滲出及其他病理變化（圖5-C）。

2. 5. 3 鰓絲組織切片觀察結(jié)果 模擬空運(yùn)前克氏原螯蝦鰓膜結(jié)構(gòu)完整，呼吸細(xì)胞排列整齊，能觀察到微血管，未見任何病理變化（圖6-A）。打孔組克氏原螯蝦鰓膜結(jié)構(gòu)較完整，鰓絲出現(xiàn)部分附著物，微血管腔不明顯，呼吸上皮細(xì)胞排列較整齊，未出現(xiàn)明顯的變性壞死現(xiàn)象（圖6-B）。密封組克氏原螯蝦鰓絲有大量附著物，微血管腔結(jié)構(gòu)已完全消失，大部分呼吸上皮細(xì)胞脫落、壞死，鰓膜結(jié)構(gòu)遭到破壞（圖6-B）。

2. 6 模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦存活率的影響

經(jīng)模擬空運(yùn)18 h后，密封組克氏原螯蝦的存活率為82.00%，打孔組的存活率為89.00%，二者間的存活率差異不顯著。模擬空運(yùn)后暫養(yǎng)1周發(fā)現(xiàn)，無論是密封組還是打孔組，克氏原螯蝦存活率均從第4 d開始顯著下降，至?xí)吼B(yǎng)第7 d密封組克氏原螯蝦的存活率顯著低于打孔組（表3）。

3 討論

水產(chǎn)品鮮活運(yùn)輸包括有水?；钸\(yùn)輸和無水保活運(yùn)輸2種方式（Skudlarek et al.，2011;吳佳靜等，2016）。其中，有水?；钸\(yùn)輸方式包括凈水法、充氧保活法、麻醉?；罘ê偷蜏乇；罘?無水?；钸\(yùn)輸方式包括化學(xué)麻醉法及無水生態(tài)冰溫?；罘?。目前，關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)难芯恳贼~類較多，而蝦蟹類相對(duì)較少。宮春光等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，無水充氧運(yùn)輸過程中將日本對(duì)蝦密度控制在33.3 kg/m2，其13 h以內(nèi)的運(yùn)輸存活率均在90.0%以上。邊會(huì)喜（2010）研究發(fā)現(xiàn)，溫度在25.0 ℃以下時(shí)丁香油麻醉劑對(duì)克氏原螯蝦的保活效果較好，能有效提高長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)拇婊盥省Ｖx慧明等（2010）通過對(duì)比幾種麻醉劑對(duì)克氏原螯蝦無水干運(yùn)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在25.0～30.0 ℃下存放時(shí)經(jīng)60 mg/L丁香—乙醇水溶液麻醉的克氏原螯蝦?；钚Ч罴?，與非麻醉組相比，20 h后的存活率提高9%。任紅梅等（2015）在對(duì)青蝦的模擬無水運(yùn)輸研究中發(fā)現(xiàn)，6.0 ℃下運(yùn)輸青蝦6 h以內(nèi)其存活率顯著高于相同運(yùn)輸時(shí)間其他溫度的存活率，均在80.0%以上。梁敏（2018）對(duì)凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行無水?；钛芯?，結(jié)果發(fā)現(xiàn)?；顣r(shí)間在8 h內(nèi)的最佳無水保活處理?xiàng)l件為溫度18.2 ℃和pH 6.08，該條件下凡納濱對(duì)蝦的存活率高達(dá)86.4%。徐子涵（2018）研究表明，將凡納濱對(duì)蝦事先在常溫充氧海水中暫養(yǎng)6 h，13.0 ℃水浴中冷擊3 min，充純氧包裝后15.0 ℃模擬空運(yùn)12 h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水低溫脅迫會(huì)引起凡納濱對(duì)蝦的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而影響其抗氧化狀態(tài)，但并未引起難以逆轉(zhuǎn)的損傷。因此，在確保運(yùn)輸存活率的同時(shí)應(yīng)綜合考慮各項(xiàng)生理生化指標(biāo)的變化（Pan et al.，2007;吳佳靜等，2016）。

本研究結(jié)果表明，經(jīng)模擬空運(yùn)后密封組克氏原螯蝦血清LZM活性、PPO活性及MDA含量顯著升高，而SOD活性顯著降低。MDA是反映細(xì)胞受損傷程度的重要指標(biāo)，MDA積累越多，表明細(xì)胞受損傷程度越嚴(yán)重（姜冬梅和康波，2020）;PPO是氧化酶源激活系統(tǒng)的重要組成部分，在機(jī)體應(yīng)對(duì)抗氧化的過程中發(fā)揮重要作用;LZM具有抗菌消炎、抗病毒及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理功能，還可激活血小板，改善組織局部血液循環(huán)障礙，增強(qiáng)局部防衛(wèi)功能，具有止血消腫等作用;SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，能將有害的超氧自由基轉(zhuǎn)化為H2O2，再通過過氧化氫酶（CAT）將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O（劉雨等，2019）。本研究的模擬空運(yùn)也對(duì)克氏原螯蝦產(chǎn)生一定應(yīng)激反應(yīng)，克氏原螯蝦通過調(diào)節(jié)LZM活性和SOD活性以緩解應(yīng)激帶來的影響，其體內(nèi)MDA含量未出現(xiàn)明顯變化可能與這一調(diào)節(jié)有關(guān)。PPO在模擬空運(yùn)中并未發(fā)揮明顯的作用，可能是因?yàn)閼?yīng)激時(shí)間不夠長(zhǎng)，血清免疫指標(biāo)尚未發(fā)生變化。此外，模擬空運(yùn)結(jié)束后，密封組克氏原螯蝦肝胰腺蛋白質(zhì)羰基含量、MDA含量和T-AOC水平均顯著高于打孔組及模擬空運(yùn)前，而SOD活性變化不顯著。蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊，最后轉(zhuǎn)變成醛基并釋放NH3+的過程，羰基含量增加是蛋白喪失正常功能甚至被降解的重要原因（周家華等，2020）。說明模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺已造成損傷，與組織切片觀察到的肝胰腺細(xì)胞空泡化相互印證。T-AOC主要包括機(jī)體內(nèi)的抗氧化酶體系和抗氧化物質(zhì)體系，是衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)（徐文杰等，2020）。模擬空運(yùn)結(jié)束后，克氏原螯蝦肝胰腺T-AOC水平顯著提升，而SOD活性變化不顯著，說明克氏原螯蝦在模擬空運(yùn)過程中受到脅迫后，其機(jī)體通過自身的免疫系統(tǒng)來抵抗應(yīng)激反應(yīng)，但SOD并不是主要的調(diào)節(jié)方式，而是通過別的途徑進(jìn)行調(diào)節(jié)，因此后續(xù)研究宜選擇其他抗氧化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，如酸性磷酸酶或堿性磷酸酶等。Na+K+-ATP廣泛存在于生物體內(nèi)，可催化腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）水解生成二磷酸腺苷（ADP）和無機(jī)磷，在離子調(diào)節(jié)中發(fā)揮核心作用，對(duì)細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)、物質(zhì)吸收（葡萄糖和氨基酸等）及跨細(xì)胞離子運(yùn)動(dòng)等至關(guān)重要。鰓是克氏原螯蝦重要的呼吸器官，直接與外界環(huán)境接觸，因此其Na+K+-ATP活性能反映細(xì)胞主動(dòng)運(yùn)輸?shù)哪芰?，?duì)判斷鰓絲的活力具有重要意義。密封組和打孔組克氏原螯蝦經(jīng)模擬空運(yùn)18 h后，其鰓絲Na+K+-ATP活性均顯著高于模擬空運(yùn)前，說明克氏原螯蝦通過提升Na+K+-ATP活性以應(yīng)對(duì)缺氧脅迫，從而增強(qiáng)鰓組織的工作效率，獲取更多氧氣。

經(jīng)18 h模擬空運(yùn)后，無論是打孔組還是密封組的克氏原螯蝦存活率均較高，與王海鋒等（2019）對(duì)克氏原螯蝦空氣暴露18 h的存活率相近。說明克氏原螯蝦具有較強(qiáng)的抗逆性，能通過自身免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)應(yīng)對(duì)模擬空運(yùn)應(yīng)激，與Demers等（2006）對(duì)歐洲原產(chǎn)克氏原螯蝦進(jìn)行低氧脅迫的研究結(jié)果相似。但模擬空運(yùn)后暫養(yǎng)1周發(fā)現(xiàn)，密封組和打孔組的克氏原螯蝦存活率均從第4 d開始顯著下降，至?xí)吼B(yǎng)第7 d密封組克氏原螯蝦的存活率僅為59.33%，顯著低于打孔組克氏原螯蝦，未能滿足引種對(duì)存活率的要求，也說明模擬空運(yùn)已對(duì)克氏原螯蝦造成嚴(yán)重?fù)p傷且不可逆轉(zhuǎn)。

4 結(jié)論

溫度和含氧量是影響克氏原螯蝦空運(yùn)存活率的主要環(huán)境因子。模擬空運(yùn)對(duì)克氏原螯蝦造成嚴(yán)重?fù)p傷且不可逆轉(zhuǎn)，在模擬空運(yùn)結(jié)束后克氏原螯蝦因自身缺乏修復(fù)能力而大量死亡。因此，實(shí)際生產(chǎn)中可通過在運(yùn)輸前投喂免疫增強(qiáng)劑，或在運(yùn)輸后優(yōu)化其暫養(yǎng)環(huán)境等方式以提高克氏原螯蝦空運(yùn)存活率，進(jìn)而確保其引種成功。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）