HPLC法測(cè)定毛竹筍中核苷類成分的含量

★陳笑天 李聰 胡慧明 杜文鵬 鄧雅瓊 李斌（.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004；.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 南昌 330006）

毛竹筍系禾本科竹亞科剛竹屬（Phyllostachys）植 物 毛 竹Phyllostachys edulis（Carr.）Lehaie 竹或稈基上的芽萌發(fā)分化而成的膨大的芽和幼嫩的莖［1］。毛竹筍既是營(yíng)養(yǎng)豐富的食材，又具有較高的藥用價(jià)值。毛竹筍含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素、微量元素等化學(xué)成分，具有促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)、助消化等藥理作用，且對(duì)肥胖、高脂血、高血壓、腫瘤等疾病具有預(yù)防作用［2-5］。核苷類成分具有重要的生理功能，是生物細(xì)胞維持生命的重要物質(zhì)。為了有效控制毛竹筍的質(zhì)量，在參考有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上［6-11］，選取毛竹筍中4個(gè)核苷類成分尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷作為指標(biāo)，測(cè)量毛竹筍中核苷類成分的含量。

1 儀器與試藥

安捷倫1260高效液相色譜儀，配四元泵、VWD檢測(cè)器；上海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；梅特勒托利多萬分之一分析天平；昆山超聲儀器KQ2200B型超聲波清洗機(jī)。

毛竹筍2018年春季采自南昌梅嶺，由江西中醫(yī)藥大學(xué)賴學(xué)文教授鑒定為禾本科竹亞科剛竹屬植物毛竹的竹筍。尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院。甲醇為色譜純，水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速；0.5 mL/min；柱溫：30 ℃ ；流動(dòng)相：甲醇 - 水，梯度洗脫：0～10 min，3 % 甲醇；10～25 min，3 %～5 % 甲醇；25～50 min，5 %～30 %甲醇；50～80 min，30 %～60 % 甲醇。4 種成分的分離度均大于1.5。4種對(duì)照品及樣品的色譜圖見圖1。

圖1 4種對(duì)照品及竹筍樣品的HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱取尿嘧啶10.2 mg、尿苷 10.0 mg、胸腺嘧啶 9.8 mg、腺苷 10.2 mg，分別置于100 mL容量瓶中，超純水溶解定容，搖勻，即得到4種對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 將毛竹筍粉碎處理，準(zhǔn)確稱取 10 g，置 250 mL 具塞錐形瓶中，加入 100 mL 95 %乙醇，超聲提取，共3次。合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮并定容至100 mL容量瓶中，即得毛竹筍供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取2.2項(xiàng)下的4種對(duì)照品溶液，分別稀釋2、5、10、20倍，連同對(duì)照品原液組成5組不同濃度的對(duì)照品液，過濾后精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 4種化合物的線性方程

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)下的4種對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的精密度RSD分別為0.89 %，0.62 %，1.05 %，0.76 %，結(jié)果顯示儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取毛竹筍樣品5份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定，計(jì)算峰面積。結(jié)果顯示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的RSD分別為 1.73 %，1.47 %，2.15 %，1.66 %，說明本法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取新制備的供試品溶液，分別在0，4，8，12，18，24h進(jìn)樣，結(jié)果顯示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的RSD分別為1.91 %，1.66 %，2.35 %，1.45 %，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 按2.3項(xiàng)下方法制備毛竹筍樣品溶液3份，在定容前分別加入4種對(duì)照品溶液各2、4、6 mL，在上述色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果顯示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的平均回收率（n=6）分別為 98.13 %，1.15 %；97.55 %，0.89 %；RSD 分別為97.90 %，1.48 %；98.61 %，1.92 %。

2.5 樣品含量測(cè)定 精密量取按2.2項(xiàng)下方法制備的對(duì)照品溶液與按2.3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為20 μL，尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷測(cè)定結(jié)果分別為129.10，86.08，23.28，151.35 mg/kg。

3 討論

核苷類成分多偏堿性，溶于水，尿嘧啶在甲醇-水條件下出峰時(shí)間較短，尿苷與胸腺嘧啶出峰時(shí)間相近，因此將流速設(shè)為0.5 mL/min，可得到較好的分離效果。

當(dāng)前使用的抗病毒藥物中近50 %是核苷類藥物，許多抗腫瘤藥物也是核苷類成分。核苷類成分的研究具有廣闊的前景，也可從中藥中分離有效的核苷類成分作為先導(dǎo)化合物來尋求更為有效的藥物。竹筍中核苷類成分的含量很高，具有開發(fā)作為補(bǔ)充核苷的功能性食品的潛力。