如何防止柞蠶蛹蟲草培育過程中的感染

李元洪 朱榮才 崔自學(xué)

蛹蟲草又名北冬蟲夏草，俗稱北蟲草、蟲草花，隸屬子囊菌亞門（Ascomycotina）麥角菌目（Clavicipitales）麥角菌科（Cordycepps）蟲草屬（Cordyceps）真菌，是蟲草屬的模式種。蛹蟲草和我們常說的冬蟲夏草十分相似，藥理作用也基本相同，并且在某些功能成分含量上達(dá)到甚至超過天然冬蟲夏草。研究發(fā)現(xiàn)，蛹蟲草富含蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗腫瘤、抗輻射及調(diào)節(jié)免疫功能等重要作用。我國已知的100多種蟲草，由于寄主不同，又有不同的物名，以冬蟲夏草和蛹蟲草在中藥領(lǐng)域最為著名。冬蟲夏草目前還不能完全人工栽培?！度珖胁菟巺R編》記載：“北蟲草（蛹蟲草）的子實體及蟲體也可作為冬蟲夏草入藥。”由于野生資源有限，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場的需求，故催生出了蟲草人工栽培技術(shù)的高科技研發(fā)。目前，科研人員利用從野生蛹蟲草分離的菌種，栽植在活體的蠶蛹體內(nèi)，模擬野生蛹蟲草的生態(tài)環(huán)境，已成功大規(guī)模培育出柞蠶蛹蟲草和桑蠶蛹蟲草。但在近年各地大規(guī)模生產(chǎn)過程中，往往由于不同環(huán)節(jié)的蠶蛹被雜菌感染問題，導(dǎo)致大批生產(chǎn)全軍覆沒，損失慘重，這也是許多想從事蛹蟲草栽培的人望而生畏的原因，從某種層面來說，也是阻礙蛹蟲草行業(yè)發(fā)展的原因之一。筆者通過走訪調(diào)查，結(jié)合多年生產(chǎn)經(jīng)驗，總結(jié)出以下幾點(diǎn)要求，以期對從事蛹蟲草生產(chǎn)的人員有所幫助。

一、對菌種的要求

（一）菌種純凈無雜菌、無污染

用于接種蠶蛹的菌種一般都是用蛹蟲草母種接種在培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)而制成的液體菌種。第一，所用的母種必須是純凈的母種，這就需要從正規(guī)有資質(zhì)的科研單位購買母種。如果對所用母種有懷疑，可以挑取一點(diǎn)母種菌絲，在顯微鏡下觀察，看有無雜菌，也可以先用少量蠶蛹試驗，即先少制一點(diǎn)培養(yǎng)液接種蠶蛹觀察。通過事先少量接種一點(diǎn)蠶蛹，3～5 d后觀察所接種的蠶蛹，如果母種純凈無污染，所接蠶蛹體內(nèi)就會大量繁殖菌絲而使蠶體僵硬。如果所用母種有污染，3～5 d后蛹體就會因被雜菌感染而腐敗。第二，所制培養(yǎng)基必須嚴(yán)格滅菌。滅菌時間也要根據(jù)所用器皿和所裝培養(yǎng)基的多少而定。盛裝培養(yǎng)基的器皿大，裝的培養(yǎng)基的量也較大，滅菌時間就要適度延長，確保滅菌徹底。第三，一定要在無菌室的超凈工作臺內(nèi)嚴(yán)格按照無菌操作接入母種，確保接入菌種后菌液無污染。第四，接入母種后，在培養(yǎng)的過程中要細(xì)心觀察，看培養(yǎng)基中是否有雜菌在繁殖。如果經(jīng)過合適的溫濕度培養(yǎng)，培養(yǎng)基沒有變化，沒有菌絲生成，或者有不同顏色的菌物形成，此培養(yǎng)液一定要淘汰。此時也可通過上述方法檢驗所制菌液是否被雜菌感染，即挑少量菌液在顯微鏡下觀察，看是否有雜菌或者先用少量蠶蛹試驗。

（二）菌種新鮮有活力

由于蛹蟲草菌種的特異性，非常容易變異和難以保存，在保存不當(dāng)或保存時間過長時，菌種往往失去活力，致使接種后不能感染蠶蛹，從而使蠶蛹被其他雜菌感染成為敗血蛹。

（三）接種室和接種工具要嚴(yán)格消毒

在蛹蟲草批量生產(chǎn)過程中，基本不可能在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行，故接種環(huán)境非常重要。如果環(huán)境內(nèi)有雜菌，接種所用的菌種、蠶蛹表面和接種工具易被污染，蠶蛹接種后就容易被感染。因此，接種環(huán)境必須是能夠密閉且易于消毒的場所。這樣在接種前先用液體消毒液進(jìn)行消毒，還要用熏蒸劑進(jìn)行空氣消毒或用紫外燈照射，保證整個接種場所沒有雜菌。工作人員進(jìn)入工作室時必須換上消過毒的工作服，接種人員戴無菌手套或用酒精擦洗手。培育柞蠶蛹蟲草一般是用柞蠶蛹的活體，把菌液直接接入活的蛹體內(nèi)，因此所用的接種工具必須是無菌的，這樣才能保證不通過接種工具把雜菌帶入蠶蛹體內(nèi)。

二、培育柞蠶蛹蟲草對柞蠶蛹的要求

（一）選蠶蛹

培育柞蠶蛹蟲草首先選用健康無病的蠶蛹，一個不健康或帶病的蠶蛹體內(nèi)有無數(shù)的細(xì)菌或病毒。蛹蟲草接種是一個連續(xù)接種的過程，因此，如果接種工具一旦接觸一個帶病的蠶蛹，在連續(xù)接種過程中可能會污染無數(shù)個健康的蠶蛹。為避免出現(xiàn)此類問題，削繭時和削繭后要嚴(yán)格認(rèn)真挑選，做到絕不用一個帶病蠶蛹，這樣可以避免在接種時把不健康蠶蛹體內(nèi)的雜菌帶入其他健康蠶蛹體內(nèi)而造成蠶蛹感染。

（二）蛹體消毒

所用的活體蠶蛹也要嚴(yán)格消毒。柞蠶繭在存儲過程中，會有一部分蠶蛹因各種原因死去。這部分死去的蛹體會污染很多蠶繭，導(dǎo)致從蠶繭剝出的鮮活蠶蛹，蛹體表面也會有各種雜菌污染。因此，蠶蛹在接入菌液之前一定要對蛹體表面徹底消毒。原則上所用的消毒藥品是對人體無害和易于揮發(fā)的藥物，如75%的酒精等。

（三）在接種過程中盡量減少蛹體創(chuàng)傷

從削繭到接種，都有可能對蛹體造成創(chuàng)傷，這也是造成蛹后期感染的主要因素之一。在這一系列操作過程中，動作不能簡單粗暴，要輕拿輕放，不使蛹體因人為因素受到創(chuàng)傷。受傷的蠶蛹即使不接種菌種，也會變成敗血蛹，因此在接種前的各個環(huán)節(jié)都要及時剔除創(chuàng)傷蛹。接種時所使用的工具要盡量精細(xì)，動作要輕、準(zhǔn)、穩(wěn)，盡可能減小蛹體創(chuàng)傷，以便接種后的蠶蛹傷口快速愈合，減少雜菌感染的機(jī)會。

（四）接種后嚴(yán)格控制培養(yǎng)室的溫濕度

培養(yǎng)室要求在使用前3～5 d進(jìn)行嚴(yán)格洗刷消毒，確保干凈衛(wèi)生無污染源，以免造成對蛹體的再次污染和感染。接種后的蠶蛹要放在消毒后的培養(yǎng)室保護(hù)，培養(yǎng)室的溫濕度要嚴(yán)格控制在合理范圍內(nèi)。溫度過高或過低都會增加蠶蛹感染的概率。溫度過高不利于蟲草菌的生長，還會加快雜菌繁殖速度。溫度過低，會影響蟲草菌的生長，也會增加蠶蛹感染雜菌的機(jī)會。蛹蟲草菌喜中低溫度環(huán)境。接種后的蠶蛹在菌絲培養(yǎng)階段即培養(yǎng)前期，溫度最好控制在18～19 ℃，這樣既可抑制雜菌繁殖生長，也有利于蛹蟲草菌絲的快速生長。待蛹蟲草菌絲長滿蛹體，蛹體硬化后將培養(yǎng)室溫度調(diào)整到20～22 ℃繼續(xù)培養(yǎng)。發(fā)菌培養(yǎng)階段相對濕度可控制在60%左右，可降低雜菌感染機(jī)會。

三、討論

用柞蠶蛹培育蛹蟲草是一個系統(tǒng)工程，過程是用活體蠶蛹直接接入蛹蟲草菌種，工序多，每個環(huán)節(jié)都是基礎(chǔ)，每個環(huán)節(jié)都是整個過程中的關(guān)鍵鏈接，都必須嚴(yán)格執(zhí)行技術(shù)操作規(guī)程。每個環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格要求，做到環(huán)環(huán)相扣，每個環(huán)節(jié)都不出漏洞，做到接種時沒有雜菌進(jìn)入蛹體，接種后也沒有雜菌通過傷口進(jìn)入蛹體，加上合理的溫濕度保護(hù)，才能保證菌絲在蛹體快速生長，從而保證蛹蟲草培育的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)。

〔資助項目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項（No.CARS-18）〕