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    如何防止柞蠶蛹蟲草培育過程中的感染

    2021-02-04 07:45:27李元洪朱榮才崔自學(xué)
    河南農(nóng)業(yè)·綜合版 2021年1期

    李元洪 朱榮才 崔自學(xué)

    蛹蟲草又名北冬蟲夏草,俗稱北蟲草、蟲草花,隸屬子囊菌亞門(Ascomycotina)麥角菌目(Clavicipitales)麥角菌科(Cordycepps)蟲草屬(Cordyceps)真菌,是蟲草屬的模式種。蛹蟲草和我們常說的冬蟲夏草十分相似,藥理作用也基本相同,并且在某些功能成分含量上達(dá)到甚至超過天然冬蟲夏草。研究發(fā)現(xiàn),蛹蟲草富含蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等生物活性物質(zhì),具有抗菌、抗腫瘤、抗輻射及調(diào)節(jié)免疫功能等重要作用。我國(guó)已知的100多種蟲草,由于寄主不同,又有不同的物名,以冬蟲夏草和蛹蟲草在中藥領(lǐng)域最為著名。冬蟲夏草目前還不能完全人工栽培?!度珖?guó)中草藥匯編》記載:“北蟲草(蛹蟲草)的子實(shí)體及蟲體也可作為冬蟲夏草入藥?!庇捎谝吧Y源有限,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求,故催生出了蟲草人工栽培技術(shù)的高科技研發(fā)。目前,科研人員利用從野生蛹蟲草分離的菌種,栽植在活體的蠶蛹體內(nèi),模擬野生蛹蟲草的生態(tài)環(huán)境,已成功大規(guī)模培育出柞蠶蛹蟲草和桑蠶蛹蟲草。但在近年各地大規(guī)模生產(chǎn)過程中,往往由于不同環(huán)節(jié)的蠶蛹被雜菌感染問題,導(dǎo)致大批生產(chǎn)全軍覆沒,損失慘重,這也是許多想從事蛹蟲草栽培的人望而生畏的原因,從某種層面來說,也是阻礙蛹蟲草行業(yè)發(fā)展的原因之一。筆者通過走訪調(diào)查,結(jié)合多年生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),總結(jié)出以下幾點(diǎn)要求,以期對(duì)從事蛹蟲草生產(chǎn)的人員有所幫助。

    一、對(duì)菌種的要求

    (一)菌種純凈無雜菌、無污染

    用于接種蠶蛹的菌種一般都是用蛹蟲草母種接種在培養(yǎng)基中,進(jìn)一步培養(yǎng)而制成的液體菌種。第一,所用的母種必須是純凈的母種,這就需要從正規(guī)有資質(zhì)的科研單位購(gòu)買母種。如果對(duì)所用母種有懷疑,可以挑取一點(diǎn)母種菌絲,在顯微鏡下觀察,看有無雜菌,也可以先用少量蠶蛹試驗(yàn),即先少制一點(diǎn)培養(yǎng)液接種蠶蛹觀察。通過事先少量接種一點(diǎn)蠶蛹,3~5 d后觀察所接種的蠶蛹,如果母種純凈無污染,所接蠶蛹體內(nèi)就會(huì)大量繁殖菌絲而使蠶體僵硬。如果所用母種有污染,3~5 d后蛹體就會(huì)因被雜菌感染而腐敗。第二,所制培養(yǎng)基必須嚴(yán)格滅菌。滅菌時(shí)間也要根據(jù)所用器皿和所裝培養(yǎng)基的多少而定。盛裝培養(yǎng)基的器皿大,裝的培養(yǎng)基的量也較大,滅菌時(shí)間就要適度延長(zhǎng),確保滅菌徹底。第三,一定要在無菌室的超凈工作臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格按照無菌操作接入母種,確保接入菌種后菌液無污染。第四,接入母種后,在培養(yǎng)的過程中要細(xì)心觀察,看培養(yǎng)基中是否有雜菌在繁殖。如果經(jīng)過合適的溫濕度培養(yǎng),培養(yǎng)基沒有變化,沒有菌絲生成,或者有不同顏色的菌物形成,此培養(yǎng)液一定要淘汰。此時(shí)也可通過上述方法檢驗(yàn)所制菌液是否被雜菌感染,即挑少量菌液在顯微鏡下觀察,看是否有雜菌或者先用少量蠶蛹試驗(yàn)。

    (二)菌種新鮮有活力

    由于蛹蟲草菌種的特異性,非常容易變異和難以保存,在保存不當(dāng)或保存時(shí)間過長(zhǎng)時(shí),菌種往往失去活力,致使接種后不能感染蠶蛹,從而使蠶蛹被其他雜菌感染成為敗血蛹。

    (三)接種室和接種工具要嚴(yán)格消毒

    在蛹蟲草批量生產(chǎn)過程中,基本不可能在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,故接種環(huán)境非常重要。如果環(huán)境內(nèi)有雜菌,接種所用的菌種、蠶蛹表面和接種工具易被污染,蠶蛹接種后就容易被感染。因此,接種環(huán)境必須是能夠密閉且易于消毒的場(chǎng)所。這樣在接種前先用液體消毒液進(jìn)行消毒,還要用熏蒸劑進(jìn)行空氣消毒或用紫外燈照射,保證整個(gè)接種場(chǎng)所沒有雜菌。工作人員進(jìn)入工作室時(shí)必須換上消過毒的工作服,接種人員戴無菌手套或用酒精擦洗手。培育柞蠶蛹蟲草一般是用柞蠶蛹的活體,把菌液直接接入活的蛹體內(nèi),因此所用的接種工具必須是無菌的,這樣才能保證不通過接種工具把雜菌帶入蠶蛹體內(nèi)。

    二、培育柞蠶蛹蟲草對(duì)柞蠶蛹的要求

    (一)選蠶蛹

    培育柞蠶蛹蟲草首先選用健康無病的蠶蛹,一個(gè)不健康或帶病的蠶蛹體內(nèi)有無數(shù)的細(xì)菌或病毒。蛹蟲草接種是一個(gè)連續(xù)接種的過程,因此,如果接種工具一旦接觸一個(gè)帶病的蠶蛹,在連續(xù)接種過程中可能會(huì)污染無數(shù)個(gè)健康的蠶蛹。為避免出現(xiàn)此類問題,削繭時(shí)和削繭后要嚴(yán)格認(rèn)真挑選,做到絕不用一個(gè)帶病蠶蛹,這樣可以避免在接種時(shí)把不健康蠶蛹體內(nèi)的雜菌帶入其他健康蠶蛹體內(nèi)而造成蠶蛹感染。

    (二)蛹體消毒

    所用的活體蠶蛹也要嚴(yán)格消毒。柞蠶繭在存儲(chǔ)過程中,會(huì)有一部分蠶蛹因各種原因死去。這部分死去的蛹體會(huì)污染很多蠶繭,導(dǎo)致從蠶繭剝出的鮮活蠶蛹,蛹體表面也會(huì)有各種雜菌污染。因此,蠶蛹在接入菌液之前一定要對(duì)蛹體表面徹底消毒。原則上所用的消毒藥品是對(duì)人體無害和易于揮發(fā)的藥物,如75%的酒精等。

    (三)在接種過程中盡量減少蛹體創(chuàng)傷

    從削繭到接種,都有可能對(duì)蛹體造成創(chuàng)傷,這也是造成蛹后期感染的主要因素之一。在這一系列操作過程中,動(dòng)作不能簡(jiǎn)單粗暴,要輕拿輕放,不使蛹體因人為因素受到創(chuàng)傷。受傷的蠶蛹即使不接種菌種,也會(huì)變成敗血蛹,因此在接種前的各個(gè)環(huán)節(jié)都要及時(shí)剔除創(chuàng)傷蛹。接種時(shí)所使用的工具要盡量精細(xì),動(dòng)作要輕、準(zhǔn)、穩(wěn),盡可能減小蛹體創(chuàng)傷,以便接種后的蠶蛹傷口快速愈合,減少雜菌感染的機(jī)會(huì)。

    (四)接種后嚴(yán)格控制培養(yǎng)室的溫濕度

    培養(yǎng)室要求在使用前3~5 d進(jìn)行嚴(yán)格洗刷消毒,確保干凈衛(wèi)生無污染源,以免造成對(duì)蛹體的再次污染和感染。接種后的蠶蛹要放在消毒后的培養(yǎng)室保護(hù),培養(yǎng)室的溫濕度要嚴(yán)格控制在合理范圍內(nèi)。溫度過高或過低都會(huì)增加蠶蛹感染的概率。溫度過高不利于蟲草菌的生長(zhǎng),還會(huì)加快雜菌繁殖速度。溫度過低,會(huì)影響蟲草菌的生長(zhǎng),也會(huì)增加蠶蛹感染雜菌的機(jī)會(huì)。蛹蟲草菌喜中低溫度環(huán)境。接種后的蠶蛹在菌絲培養(yǎng)階段即培養(yǎng)前期,溫度最好控制在18~19 ℃,這樣既可抑制雜菌繁殖生長(zhǎng),也有利于蛹蟲草菌絲的快速生長(zhǎng)。待蛹蟲草菌絲長(zhǎng)滿蛹體,蛹體硬化后將培養(yǎng)室溫度調(diào)整到20~22 ℃繼續(xù)培養(yǎng)。發(fā)菌培養(yǎng)階段相對(duì)濕度可控制在60%左右,可降低雜菌感染機(jī)會(huì)。

    三、討論

    用柞蠶蛹培育蛹蟲草是一個(gè)系統(tǒng)工程,過程是用活體蠶蛹直接接入蛹蟲草菌種,工序多,每個(gè)環(huán)節(jié)都是基礎(chǔ),每個(gè)環(huán)節(jié)都是整個(gè)過程中的關(guān)鍵鏈接,都必須嚴(yán)格執(zhí)行技術(shù)操作規(guī)程。每個(gè)環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格要求,做到環(huán)環(huán)相扣,每個(gè)環(huán)節(jié)都不出漏洞,做到接種時(shí)沒有雜菌進(jìn)入蛹體,接種后也沒有雜菌通過傷口進(jìn)入蛹體,加上合理的溫濕度保護(hù),才能保證菌絲在蛹體快速生長(zhǎng),從而保證蛹蟲草培育的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)。

    〔資助項(xiàng)目:現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(No.CARS-18)〕

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