新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)

中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室專業(yè)委員會(huì)

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100730,E-mail:xycpumch@139.com 2國(guó)家老年醫(yī)學(xué)中心 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院老年醫(yī)學(xué)研究院 北京醫(yī)院國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心，北京 100730，E-mail:hujh68@126.com

2019年12月，新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)感染引起的新型冠狀病毒肺炎(coronavirus disease 2019，COVID-19)疫情暴發(fā)，并在全球范圍內(nèi)大流行。雖然我國(guó)對(duì)COVID-19疫情的防控取得了階段性勝利，但全球疫情仍極為嚴(yán)峻。當(dāng)前我國(guó)疫情防控的重點(diǎn)，已從對(duì)本土病例的防控轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)境外輸入性病例的防控，以及對(duì)經(jīng)冷鏈運(yùn)輸進(jìn)口物品攜帶污染及密切接觸人群的監(jiān)測(cè)。各臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防控制部門的SARS-CoV-2檢測(cè)工作已呈常態(tài)化，應(yīng)大力提升并具備隨時(shí)應(yīng)對(duì)新一波疫情暴發(fā)、流行的能力?；谀壳芭R床檢測(cè)SARS-CoV-2所積累的經(jīng)驗(yàn)和常見(jiàn)問(wèn)題，并結(jié)合最新研究進(jìn)展，中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室專業(yè)委員會(huì)組織我國(guó)臨床微生物學(xué)、分子生物學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜夜餐珜懥恕缎滦凸跔畈《緦?shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)》。本共識(shí)明確了目前SARS-CoV-2臨床常用檢測(cè)方法的技術(shù)特點(diǎn)、注意事項(xiàng)、生物安全要求、檢測(cè)和結(jié)果解讀的常見(jiàn)問(wèn)題及應(yīng)對(duì)策略，以期在疫情防控常態(tài)化形勢(shì)下，為臨床實(shí)驗(yàn)室正確、高效開(kāi)展SARS-CoV-2檢測(cè)提供參考意見(jiàn)。

1 共識(shí)形成方法

本共識(shí)由中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室專業(yè)委員會(huì)發(fā)起，共識(shí)專家組由該委員會(huì)委員及其推薦的相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜夜餐M成，并通過(guò)共識(shí)形成會(huì)議法[1]達(dá)成共識(shí)意見(jiàn)。專家組擬訂關(guān)鍵問(wèn)題和共識(shí)提綱后，以“新型冠狀病毒”“新型冠狀病毒肺炎”“severe acute respiratory syndrome coronavirus 2”“SARS-CoV-2”“coronavirus disease 2019”和“COVID-19”為關(guān)鍵詞，檢索2019年12月至2020年11月期間PubMed、EMBase、Cochrane Library、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)、維普網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)中關(guān)于SARS-CoV-2和COVID-19實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)的中、英文文獻(xiàn)，以及國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)和世界衛(wèi)生組織發(fā)布的COVID-19診療方案和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)組織現(xiàn)行的感染控制、生物安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、指南和共識(shí)等。經(jīng)3輪遠(yuǎn)程會(huì)議討論及反復(fù)修訂，形成共識(shí)草案，然后由所有專家對(duì)草案進(jìn)行函審并提出書面意見(jiàn)，共收集函審意見(jiàn)539條(含重復(fù)意見(jiàn))，全部意見(jiàn)在第4次會(huì)議上逐條進(jìn)行討論確認(rèn)，并采納其中的458條，經(jīng)23次修訂最終形成本共識(shí)終稿。鑒于目前對(duì)SARS-CoV-2的認(rèn)知程度及共識(shí)參與人員的專業(yè)背景，本共識(shí)的制定可能存在一定局限性。

2 新型冠狀病毒核酸檢測(cè)

2.1 核酸檢測(cè)方法

國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第八版)》[2]指出，對(duì)疑似病例采用實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)SARS-CoV-2核酸為陽(yáng)性或病毒基因測(cè)序結(jié)果與已知的SARS-CoV-2序列高度同源，即可確診為SARS-CoV-2感染。核酸檢測(cè)陽(yáng)性是發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2攜帶者(SARS-CoV-2核酸陽(yáng)性但無(wú)明顯臨床和影像學(xué)表現(xiàn)，且血清特異性SARS-CoV-2抗體陰性者)和確診SARS-CoV-2感染的金標(biāo)準(zhǔn)。

在SARS-CoV-2基因組序列確定的情況下[3-5]，靶標(biāo)可針對(duì)病毒基因組保守區(qū)域進(jìn)行設(shè)計(jì)。SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的靶基因主要包括：開(kāi)放讀碼框1ab(open reading frame 1ab，ORF1ab)、核殼蛋白(nucleocapsid protein，N)、包膜蛋白(envelop protein，E)和刺突糖蛋白編碼(spike glycoprotein，S)基因[6]。目前在中國(guó)獲批的試劑盒主要是針對(duì)其中的一個(gè)或多個(gè)靶標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，建議同時(shí)檢測(cè)2個(gè)及以上靶標(biāo)，以保證結(jié)果的特異度和準(zhǔn)確性。

目前國(guó)家藥品監(jiān)督管理局(National Medical Pro-ducts Administration，NMPA)批準(zhǔn)上市的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑盒所采用的檢測(cè)方法主要有實(shí)時(shí)熒光PCR法、恒溫?cái)U(kuò)增法、聯(lián)合探針錨定聚合測(cè)序法、雜交捕獲免疫熒光法、RNA 捕獲探針?lè)?、RNA 恒溫?cái)U(kuò)增捕獲—金探針層析法、雙擴(kuò)增法以及基于下一代測(cè)序技術(shù)(next-genera-tion sequencing,NGS)的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)方法等。

2.1.1 實(shí)時(shí)熒光PCR法

目前醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展SARS-CoV-2核酸檢測(cè)所采用的方法以實(shí)時(shí)熒光PCR法為主，其檢測(cè)下限為102～103copies/mL，部分產(chǎn)品可達(dá)10 copies/mL。該方法檢測(cè)耗時(shí)存在差異，通常兩步法(即核酸提取與PCR擴(kuò)增步驟獨(dú)立進(jìn)行)約需3～3.5 h(包括核酸提取0.5～1.5 h，PCR擴(kuò)增1.5～2 h)，一步法(即核酸提取與PCR擴(kuò)增一體化)可縮短至1 h以內(nèi)。

2.1.2 恒溫?cái)U(kuò)增法

恒溫?cái)U(kuò)增法是在固定的溫度條件下進(jìn)行擴(kuò)增，包含恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光法和恒溫?cái)U(kuò)增芯片法。恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光法是將恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，可將SARS-CoV-2核酸檢測(cè)全流程時(shí)間縮短至1.5 h以內(nèi)。恒溫?cái)U(kuò)增芯片法是將恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與微流控芯片技術(shù)相結(jié)合，其特點(diǎn)是可在同一份樣本中同時(shí)檢測(cè)多種病原體。恒溫?cái)U(kuò)增法具有集成能力強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、檢測(cè)時(shí)間短、檢測(cè)下限低(可達(dá)102copies/mL)等特點(diǎn)。

2.1.3 其他PCR方法

聯(lián)合探針錨定聚合測(cè)序法、雜交捕獲免疫熒光法、RNA捕獲探針?lè)āNA恒溫?cái)U(kuò)增捕獲—金探針層析法、雙擴(kuò)增法和巢式多重PCR法在SARS-CoV-2核酸檢測(cè)中亦發(fā)揮了重要作用。在擴(kuò)增多重病原靶標(biāo)時(shí)，需同時(shí)檢測(cè)1～2種室內(nèi)質(zhì)控，以確保樣本處理、核酸提取及PCR反應(yīng)的有效性。此外，也有研究使用PCR-核酸飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行SARS-CoV-2核酸檢測(cè)[7]；或應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)直接使用臨床樣本從多組學(xué)角度檢測(cè)SARS-CoV-2[8-10]。

SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的方法較多且各具特點(diǎn)，即使同一種檢測(cè)方法，由于檢測(cè)試劑生產(chǎn)廠家或檢測(cè)儀器不同，所需檢測(cè)時(shí)間及檢測(cè)下限均可能存在差異。因此，在實(shí)際工作中實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所使用的檢測(cè)試劑及設(shè)備說(shuō)明書，制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，開(kāi)展SARS-CoV-2核酸檢測(cè)工作。

2.1.4 基于NGS的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)

NGS不依賴傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)，具有高通量、一次可檢測(cè)多個(gè)靶基因的特點(diǎn)，可發(fā)現(xiàn)新發(fā)病原體、監(jiān)測(cè)病原體變異，為診斷試劑、疫苗、藥物等研發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù)。在此次疫情初期，利用NGS從臨床樣本中成功鑒定出了SARS-CoV-2的基因組序列[11]，為SARS-CoV-2的早期發(fā)現(xiàn)和診斷提供了重要依據(jù)。疫情期間，NMPA應(yīng)急批準(zhǔn)SARS-CoV-2測(cè)序試劑盒可用于臨床樣本的常規(guī)檢測(cè)。但目前NGS主要用于科研，其臨床大規(guī)模應(yīng)用需進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。

2.2 核酸檢測(cè)注意事項(xiàng)與生物安全要求

SARS-CoV-2核酸檢測(cè)主要包括樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和接收、核酸提取、PCR擴(kuò)增、報(bào)告解讀及醫(yī)療垃圾處理等步驟。其注意事項(xiàng)及生物安全要求見(jiàn)表1。

表1 新型冠狀病毒核酸檢測(cè)常見(jiàn)注意事項(xiàng)及生物安全要求

2.3 核酸檢測(cè)結(jié)果解讀存在的問(wèn)題與對(duì)策

2.3.1 核酸檢測(cè)與復(fù)檢

以下情況建議復(fù)檢：(1)樣本經(jīng)PCR擴(kuò)增后，目的基因Ct值大于試劑說(shuō)明書閾值，但原始峰圖有信號(hào)；(2)擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性，但原始峰圖并非典型的“S”形曲線；(3)雙靶標(biāo)試劑檢測(cè)結(jié)果不一致；(4)雙份試劑檢測(cè)結(jié)果不一致；(5)檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀、影像學(xué)表現(xiàn)不一致；(6)若不同病程階段核酸檢測(cè)結(jié)果發(fā)生變化，需連續(xù)多次采樣；(7)大規(guī)模人群篩查流行率極低(<0.1%)時(shí)，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)使用1～2種更靈敏且擴(kuò)增區(qū)域不同的試劑復(fù)檢[12]。

2.3.2 流行病學(xué)結(jié)合臨床分析原則

雖然核酸檢測(cè)是SARS-CoV-2病原學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但仍存在一定的局限性。當(dāng)臨床高度懷疑SARS-CoV-2感染而核酸檢測(cè)陰性時(shí)，需結(jié)合患者肺部CT、SARS-CoV-2特異性抗體、血常規(guī)等其他檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

2.4 核酸檢測(cè)結(jié)果假陰性、假陽(yáng)性分析

2.4.1 假陰性結(jié)果主要原因：(1)感染的不同時(shí)期，病毒在人體不同部位載量存在差異；(2)樣本采集不規(guī)范；(3)樣本轉(zhuǎn)運(yùn)、保存或滅活方法不當(dāng)，導(dǎo)致RNA降解；(4)病毒基因序列發(fā)生變異。

2.4.2 假陽(yáng)性結(jié)果多由實(shí)驗(yàn)室污染或操作不當(dāng)造成。

2.4.3 避免假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果的應(yīng)對(duì)策略

(1)試劑質(zhì)量控制：對(duì)不同的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑性能進(jìn)行比較，對(duì)試劑的性能參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，選取各種性能均較好的試劑。

(2)操作質(zhì)量控制：核酸檢測(cè)的整個(gè)流程操作復(fù)雜，不同產(chǎn)品的反應(yīng)體系及適用機(jī)型等存在差異，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)嚴(yán)格按照各自產(chǎn)品說(shuō)明書要求進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)與保存、核酸提取、PCR擴(kuò)增、結(jié)果審核及報(bào)告進(jìn)行全流程質(zhì)量控制。

(3)設(shè)置對(duì)照：除每個(gè)檢測(cè)批次至少設(shè)置3份陰性對(duì)照、1份弱陽(yáng)性對(duì)照(第三方質(zhì)控品)[12]和內(nèi)標(biāo)控制孔外，應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室污染。

(4)多指標(biāo)診斷：對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性但臨床疑似感染患者，應(yīng)進(jìn)行多部位樣本、多次采樣檢測(cè)，并結(jié)合血清學(xué)結(jié)果、影像學(xué)表現(xiàn)等進(jìn)行綜合判斷。

3 新型冠狀病毒免疫學(xué)檢測(cè)

N蛋白和S蛋白是免疫檢測(cè)的主要抗原靶點(diǎn)。N蛋白位于病毒顆粒包膜內(nèi)核，與正義單鏈RNA纏繞并將其封裝成RNA核衣殼體；S蛋白分布于病毒外殼，冷凍電鏡超微結(jié)構(gòu)為三聚體，其受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(receptor binding domain,RBD)與人體細(xì)胞血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2受體結(jié)合后入侵人體細(xì)胞并導(dǎo)致感染[25]。

3.1 新型冠狀病毒特異性抗體檢測(cè)

《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》[26]首次將“血清SARS-CoV-2特異性抗體IgM和IgG陽(yáng)性；血清SARS-CoV-2特異性抗體IgG由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或恢復(fù)期較急性期4倍及以上升高”作為疑似病例的確診標(biāo)準(zhǔn)之一?！缎滦凸跔畈《痉窝自\療方案(試行第八版)》[2]將“SARS-CoV-2特異性抗體IgM陽(yáng)性”作為疑似病例診斷依據(jù)之一，并指出“SARS-CoV-2特異性抗體IgM和IgG在發(fā)病1周內(nèi)陽(yáng)性率較低，一般不單獨(dú)以血清學(xué)檢測(cè)作為診斷依據(jù)，需結(jié)合流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和基礎(chǔ)疾病等情況進(jìn)行綜合判斷”，強(qiáng)調(diào)動(dòng)態(tài)觀察抗體水平變化。因此，核酸檢測(cè)仍是判斷SARS-CoV-2感染的金標(biāo)準(zhǔn)[27]，抗體檢測(cè)可用于核酸檢測(cè)陰性疑似病例的補(bǔ)充檢測(cè)，或在疑似病例診斷中與核酸檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用，但不能代替核酸檢測(cè)單獨(dú)作為SARS-CoV-2感染者確診與否的依據(jù)，亦不適用于一般人群的篩查。隨著SARS-CoV-2疫苗接種人群的逐漸擴(kuò)大，詳細(xì)詢問(wèn)患者疫苗接種史及免疫相關(guān)基礎(chǔ)疾病，對(duì)理解其抗體水平變化趨勢(shì)及抗體檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。

3.1.1 抗體檢測(cè)方法

SARS-CoV-2抗體檢測(cè)試劑多以N蛋白和S蛋白作為捕獲抗原，主要檢測(cè)IgM、IgG。一般情況下，機(jī)體感染病毒后抗體水平變化如圖1。IgM產(chǎn)生最早(SARS-CoV-2特異性抗體IgM多在發(fā)病3～5 d后開(kāi)始出現(xiàn)陽(yáng)性[2,28])，但濃度及親和力較低、維持時(shí)間短，是急性期感染的診斷指標(biāo)；IgG產(chǎn)生較晚(一般在出現(xiàn)癥狀一周后[28-29])，但濃度及親和力高、維持時(shí)間較長(zhǎng)(有研究顯示SARS-CoV-2特異性抗體IgG維持時(shí)間約為3～6個(gè)月)，是感染中后期或既往感染的診斷指標(biāo)[30]。機(jī)體感染SARS-CoV-2產(chǎn)生抗體的時(shí)間和規(guī)律仍需更多的科學(xué)研究加以證實(shí)。

圖1 新型冠狀病毒檢測(cè)項(xiàng)目在不同感染病程中的應(yīng)用示意圖

NMPA已批準(zhǔn)的SARS-CoV-2抗體檢測(cè)方法主要有化學(xué)發(fā)光法、膠體金法和熒光免疫層析法。化學(xué)發(fā)光法具有線性范圍寬、通量高、自動(dòng)化程度高、操作易于標(biāo)準(zhǔn)化等特點(diǎn)，但依賴于特定的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀，成本較高，臨床普及受限。膠體金法和熒光免疫層析法操作簡(jiǎn)便、快捷，突破了現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)對(duì)人員、場(chǎng)所的限制，可在15 min內(nèi)獲得結(jié)果，適用于基層醫(yī)療單位及現(xiàn)場(chǎng)篩查，但靈敏度受限[31]。上述方法均為定性檢測(cè)，目前尚無(wú)可用于定量分析的試劑盒。

3.1.2 抗體檢測(cè)注意事項(xiàng)與生物安全要求

SARS-CoV-2抗體檢測(cè)的注意事項(xiàng)及生物安全要求見(jiàn)表2。

表2 新型冠狀病毒抗體檢測(cè)常見(jiàn)注意事項(xiàng)及生物安全要求

3.1.3 抗體檢測(cè)結(jié)果解讀中的問(wèn)題與對(duì)策

3.1.3.1 抗體檢測(cè)與復(fù)檢

(1)在低流行風(fēng)險(xiǎn)人群中，若抗體檢測(cè)結(jié)果呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性，建議結(jié)合核酸檢測(cè)等結(jié)果進(jìn)行解讀，亦可采用另一種高特異度的方法或試劑盒進(jìn)行復(fù)檢；

(2)如抗體檢測(cè)結(jié)果呈陰性，但臨床懷疑為SARS-CoV-2感染，建議進(jìn)行核酸檢測(cè)，并采用另一種高靈敏度的方法或試劑盒進(jìn)行復(fù)檢；

(3)如考慮存在干擾因素，可通過(guò)樣本滅活、使用類風(fēng)濕因子吸附劑處理等方式處理后，進(jìn)行復(fù)檢。

3.1.3.2 不同檢測(cè)方法間性能存在差異的原因

(1)原理不同：雙抗原夾心法、捕獲法、間接法等不同檢測(cè)方法的靈敏度不同。

(2)捕獲抗原不同：①抗原種類或選擇的片段不同：N蛋白的免疫原性和特異度均高于S蛋白，但靈敏度低[37]，不同試劑盒可能單獨(dú)采用S蛋白、N蛋白或S+N蛋白抗原組合、全長(zhǎng)或僅RBD為捕獲抗原；②S∶N抗原比不同；③體外重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)不同，真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白具有一定程度的折疊加工和糖基化修飾，性質(zhì)較原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白更穩(wěn)定，特異度更高。

(3)待檢抗體種類不同：如單獨(dú)檢測(cè)(IgM或IgG)、雙重檢測(cè)(IgM+IgG)或總抗體檢測(cè)(IgM+IgG+IgA)，聯(lián)合檢測(cè)可提高檢出率。

3.1.3.3 抗體檢測(cè)結(jié)果假陰性、假陽(yáng)性分析

假陰性檢測(cè)結(jié)果的可能原因：(1)抗體表達(dá)存在窗口期；(2)檢測(cè)試劑盒靈敏度受限；(3)樣本保存或?qū)嶒?yàn)操作不當(dāng)；(4)輕癥患者抗體反應(yīng)較弱[38]；(5)樣本滅活導(dǎo)致低水平抗體降解。

假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的可能原因：(1)不同種屬冠狀病毒的N蛋白或S蛋白存在免疫交叉反應(yīng)[39]；(2)患者自身存在高濃度類風(fēng)濕因子、抗核抗體等免疫學(xué)干擾因素[40-41]；(3)實(shí)驗(yàn)室或試劑盒污染；(4)樣本檢測(cè)前的滅活可能導(dǎo)致熒光免疫層析法檢測(cè)假陽(yáng)性[42]；(5)陽(yáng)性判斷值的設(shè)定：陽(yáng)性判斷值附近的弱陽(yáng)性，有一部分可能為假陽(yáng)性，因此弱陽(yáng)性患者建議3～5 d后復(fù)查；(6)樣本溶血、血液樣本凝固不全或患者出現(xiàn)黃疸等，可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，但目前缺乏實(shí)驗(yàn)證據(jù)，需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

3.2 新型冠狀病毒核酸和特異性抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果解讀

核酸檢測(cè)結(jié)果是判斷患者有無(wú)SARS-CoV-2感染的直接證據(jù)，抗體檢測(cè)結(jié)果可作為輔助判斷SARS-CoV-2感染的間接證據(jù)以及評(píng)估疫苗效果，核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)各有優(yōu)劣，不能互相替代。單獨(dú)采用抗體檢測(cè)時(shí)，其結(jié)果解讀需謹(jǐn)慎，尤其應(yīng)核對(duì)患者流行病學(xué)史、是否接種SARS-CoV-2疫苗及是否合并免疫相關(guān)基礎(chǔ)疾病。人體感染SARS-CoV-2后核酸載量、抗體水平呈現(xiàn)不同的變化(圖1)，在不同病程階段，核酸和抗體檢測(cè)的靈敏度不同，特別是在感染中后期，核酸檢出率降低，抗體檢出率升高，核酸與抗體聯(lián)合檢測(cè)可降低漏診率，提高檢出率，對(duì)臨床診斷具有重要意義。針對(duì)實(shí)驗(yàn)室SARS-CoV-2核酸及抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果的解讀見(jiàn)表3。

表3 新型冠狀病毒核酸及抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果解讀[31]

3.3 新型冠狀病毒抗原檢測(cè)

抗原檢測(cè)是指應(yīng)用SARS-CoV-2特異性抗體直接檢測(cè)樣本中的病原體，其結(jié)果可作為早期確認(rèn)該病原體感染與否的直接證據(jù)，且具有操作簡(jiǎn)便、報(bào)告時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)。所檢測(cè)抗原主要是N蛋白和S蛋白，N蛋白在β屬冠狀病毒之間相對(duì)保守、合成數(shù)量多，具有很強(qiáng)的抗原性，其抗原決定簇是特異性抗體結(jié)合的主要位點(diǎn)?？乖瓩z測(cè)適用的樣本類型一般為感染部位樣本，主要為鼻咽拭子和肺泡灌洗液等。檢測(cè)結(jié)果受樣本質(zhì)量、感染部位及病毒表達(dá)量等因素影響較大，靈敏度低、易產(chǎn)生假陰性結(jié)果。如何提高抗原檢測(cè)的靈敏度是影響該檢測(cè)方法在臨床上應(yīng)用的關(guān)鍵問(wèn)題，需進(jìn)一步篩選制備高親和力和高特異度的抗體，以用于抗原檢測(cè)試劑的開(kāi)發(fā)。

目前，國(guó)內(nèi)外許多企業(yè)致力于SARS-CoV-2抗原檢測(cè)試劑盒的研發(fā)，已有試劑盒獲得食品藥品監(jiān)督管理局緊急使用授權(quán)并批準(zhǔn)上市，NMPA亦應(yīng)急審批通過(guò)2款SARS-CoV-2抗原檢測(cè)試劑盒上市。

4 新型冠狀病毒培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒是病原學(xué)鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，所獲毒株是檢測(cè)試劑和疫苗開(kāi)發(fā)、抗病毒藥物篩選等研究的重要基礎(chǔ)。SARS-CoV-2的培養(yǎng)必須在具備生物安全三級(jí)(BSL-3)及以上資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，不得在臨床常規(guī)生物安全二級(jí)(BSL-2)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，因此不推薦新型冠狀病毒培養(yǎng)作為常規(guī)診斷方法。鼻咽拭子、痰及其他下呼吸道分泌物等臨床樣本均可通過(guò)接種人呼吸道上皮細(xì)胞、Vero-E6和Huh-7細(xì)胞系等進(jìn)行分離培養(yǎng)。選取經(jīng)熒光定量PCR和/或NGS方法檢測(cè)出核酸陽(yáng)性且Ct值較低(即病毒載量較高)的樣本進(jìn)行分離培養(yǎng)，應(yīng)考慮取材部位、取材時(shí)間及樣本送檢與保存等因素的影響。

5 小結(jié)

SARS-CoV-2是一種新發(fā)病原體，目前對(duì)該病毒的致病性、檢測(cè)方法性能的了解仍有限，需開(kāi)展更多的基礎(chǔ)和臨床研究，以提高其檢測(cè)方法效能、提升臨床及實(shí)驗(yàn)室診斷能力。本共識(shí)基于現(xiàn)有研究結(jié)果和相關(guān)指南，對(duì)SARS-CoV-2實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行了分析，并提出了應(yīng)對(duì)策略，以供臨床實(shí)驗(yàn)室參考和應(yīng)用。在SARS-CoV-2檢測(cè)過(guò)程中，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)積極與臨床溝通，結(jié)合患者流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)、影像學(xué)改變及其他檢測(cè)結(jié)果綜合分析。對(duì)于未來(lái)可能發(fā)生甚至目前已經(jīng)發(fā)生的病毒生物學(xué)變異所帶來(lái)的檢測(cè)挑戰(zhàn)，仍有諸多未知因素有待進(jìn)一步探索和研究。

本共識(shí)專家組成員(按貢獻(xiàn)度排序)：

王瑤(北京協(xié)和醫(yī)院)，李軍(解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心)，寧雅婷(北京協(xié)和醫(yī)院)，羅燕萍(解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心)，周澤奇[丹娜(天津)生物科技有限公司]，林勇平(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)，徐英春(北京協(xié)和醫(yī)院)，胡繼紅(國(guó)家老年醫(yī)學(xué)中心 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院老年醫(yī)學(xué)研究院 北京醫(yī)院國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心)，李永哲(北京協(xié)和醫(yī)院)，馬筱玲(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院)，邵育曉(北京貝爾生物工程股份有限公司)，張戈(北京協(xié)和醫(yī)院)，盧國(guó)萍[梅里埃診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]，季煦(武漢大學(xué)健康學(xué)院)，劉勇(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院)，喻華(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 四川省人民醫(yī)院)，張櫻(解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心)，柯江維(江西省兒童醫(yī)院)，李俊明(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院)，胡云建(北京醫(yī)院)，單斌(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)，吳潔(北京協(xié)和醫(yī)院)，劉文恩(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院)，楊濱(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)，阿祥仁(青海省人民醫(yī)院)，郭鷹(陸軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院)，褚云卓(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)，朱鐳(山西省兒童醫(yī)院 山西省婦幼保健院)，張利俠(陜西省人民醫(yī)院)，康梅(四川大學(xué)華西醫(yī)院)，李彬(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院)，劉小平(北京大學(xué)深圳醫(yī)院)，顧兵(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院)，佘丹陽(yáng)(解放軍總醫(yī)院)，徐雪松(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院)，胡龍華(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院)，胡辛蘭(福建省立醫(yī)院)，賈偉(寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院)，李六億(北京大學(xué)第一醫(yī)院)，魏蓮花(甘肅省人民醫(yī)院)，張義(山東大學(xué)齊魯醫(yī)院)，周俊(圣湘生物科技股份有限公司)

執(zhí)筆人(按貢獻(xiàn)度排序)：

王瑤(北京協(xié)和醫(yī)院)，李軍(解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心)，寧雅婷(北京協(xié)和醫(yī)院)，羅燕萍(解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心)，周澤奇[丹娜(天津)生物科技有限公司]，林勇平(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)，徐英春(北京協(xié)和醫(yī)院)

利益沖突：丹娜(天津)生物科技有限公司、北京貝爾生物工程股份有限公司和圣湘生物科技股份有限公司在本共識(shí)撰寫過(guò)程中提供了技術(shù)支持