復(fù)方血栓通膠囊對(duì)高海拔視網(wǎng)膜病變大鼠的保護(hù)作用

楊 義，張文芳，李玉婷，趙 鑫，張金紅，張冬梅，李 志

0引言

高海拔視網(wǎng)膜病變是一種常見(jiàn)的高原疾病，臨床上常常以視網(wǎng)膜血管的扭曲擴(kuò)張，視網(wǎng)膜斑點(diǎn)狀或火焰狀出血，棉絮斑，玻璃體出血和視盤(pán)水腫為特征[1]。近年隨著高原地區(qū)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，高海拔視網(wǎng)膜病變成為影響高原旅游人群視功能損傷的主要原因，高海拔視網(wǎng)膜病變的發(fā)病率逐年增加[2]。目前對(duì)高海拔視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制并不清楚，其預(yù)防及治療仍在探索研究階段。既往有研究指出黃芪、人參、紅景天、蕨麻等傳統(tǒng)中藥在高原疾病防治中有著重要的臨床應(yīng)用價(jià)值[3]，復(fù)方血栓通膠囊的主要成分為三七、黃芪、丹參和玄參，具有活血化瘀，益氣養(yǎng)陰的功效。本文擬利用高原倉(cāng)模擬高原缺氧環(huán)境，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究高海拔視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制，初步探討復(fù)方血栓通膠囊在高海拔視網(wǎng)膜病變的預(yù)防作用。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)雄性SD大鼠48只，年齡8～10周齡，體質(zhì)量200±20g，來(lái)自于蘭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心[SCXK(甘)2013-0002]，裂隙燈下見(jiàn)雙眼角膜透明，前房清，晶狀體透明，直接檢眼鏡下眼底未見(jiàn)明顯異常。飼養(yǎng)于通風(fēng)、安靜、陰暗環(huán)境，室內(nèi)溫度18℃～26℃，濕度30%～60%，干燥、新鮮飼料喂養(yǎng)大鼠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)使用條件均參照國(guó)家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》的規(guī)定執(zhí)行。本研究通過(guò)蘭州大學(xué)第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批編號(hào)：D2017-098)。

1.1.2主要試劑與儀器主要試劑：戊巴比妥鈉(北京普博斯生物有限公司)，速眠新Ⅱ注射液(吉林省敦化市圣達(dá)動(dòng)物藥品有限公司)，復(fù)方托吡卡胺滴眼液(沈陽(yáng)興齊)，卡波姆眼用凝膠，蘇木素染液(北京，Solarbio life science)，HIF-1兔抗鼠抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，DAB顯色試劑(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，大花紅景天口服液(國(guó)藥準(zhǔn)字B20070002，西藏藏藥集團(tuán)股份有限公司)，復(fù)方血栓通膠囊(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20030017，廣東眾生藥業(yè)股份有限公司)，肌苷片(國(guó)藥準(zhǔn)字H44021166，廣東恒健制藥有限公司)。主要儀器設(shè)備：高原環(huán)境負(fù)壓模擬艙(HA-6，濰坊華信氧業(yè)有限公司)，羅蘭視覺(jué)電生理儀(德國(guó)ROLAND)。

1.2方法

1.2.1高海拔視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型的建立雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為6組，每組4只，速眠新Ⅱ注射液和1%戊巴比妥鈉注射液腹腔麻醉后，散瞳，暗適應(yīng)3h，行電生理檢查，再次標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng)1d，然后分別飼養(yǎng)于模擬高海拔艙內(nèi)2、4、6、10、24、72h。模擬艙的各參數(shù)設(shè)置為：海拔5000m，氣壓：54.02kPa，氧分壓：11.3kPa，溫度：22℃～26℃，相對(duì)濕度：26%～30%，海拔上升速度：16m/s，控制器參數(shù)設(shè)置SP1=0.304，SP2=0.307，自動(dòng)調(diào)控系統(tǒng)維持艙內(nèi)負(fù)壓恒定。各組大鼠出艙后，立即腹腔注射麻醉藥物麻醉大鼠后，再次行電生理檢查，隨后處死大鼠，將右眼球浸入固定液內(nèi)固定，行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)及免疫組織化學(xué)(IHC)染色觀察大鼠視網(wǎng)膜缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α的表達(dá)。

1.2.2復(fù)方血栓通對(duì)大鼠高原視網(wǎng)膜病變的預(yù)防作用雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為4組，每組6只，腹腔麻醉后行電生理檢查，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)1d后，根據(jù)人體用藥量換算成大鼠等效劑量作為大鼠給藥量，分別在每日13∶00給予安慰劑(生理鹽水)，大花紅景天口服液(40mL/kg)，肌苷片(240mg/kg)及復(fù)方血栓通膠囊(0.45g/kg)灌胃，連續(xù)7d，7d喂藥結(jié)束后飼養(yǎng)于模擬海拔為5000m模擬艙內(nèi)(具體參數(shù)如高海拔視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型的建立)。10h后出艙，腹腔麻醉后再次行電生理檢查，然后處死大鼠摘取右眼球行HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)及免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠視網(wǎng)膜HIF-1α的表達(dá)。

1.2.3電生理檢查根據(jù)大鼠視網(wǎng)膜電圖和閃光視覺(jué)誘發(fā)電位記錄標(biāo)準(zhǔn)化方案，每只大鼠出艙后，暗適應(yīng)3h后，暗箱轉(zhuǎn)移至暗室，弱紅光照明條件下行大鼠腹腔麻醉，散瞳，雙眼角膜處放置角膜電極，尾部皮下刺入接地電極，雙側(cè)頰黏膜刺入?yún)⒖茧姌O后再次暗適應(yīng)5min后進(jìn)行F-ERG檢查，記錄雙眼F-ERG的b波振幅。每只大鼠均統(tǒng)一選擇右眼F-ERG數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.4 HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)大鼠處死后，取右眼球?qū)⑵浣牍潭ㄒ簝?nèi)固定48h，然后用眼科顯微剪沿著角鞏緣剪開(kāi)眼球，小心去除角膜，晶狀體后沿視神經(jīng)剪開(kāi)眼球，乙醇脫水，石蠟包埋，冷卻切片，展片，烤片，脫臘后蘇木精染色，0.5%鹽酸乙醇分化，氨水返藍(lán)，伊紅染色，酒精脫水，最后滴入中性樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察、采集圖像。

1.2.5 IHC染色觀察大鼠視網(wǎng)膜HIF-1α的表達(dá)取出固定液內(nèi)的眼球，去除角膜、晶狀體，平行視軸切開(kāi)眼球，脫水，包埋，切片后，切片常規(guī)脫臘至水，熱修復(fù)抗原，切片冷卻，PBS漂洗，3% H2O2溫室孵育，再次PBS漂洗，滴加Ultra V Block室溫孵育后PBS液漂洗，加兔抗原HIF-1α(1∶300)；0.1mol/L PBS替代一抗作陰性對(duì)照。滴加生物素標(biāo)記二抗，孵育后沖洗，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，孵育沖洗，DAB顯色，鏡下觀察染色效果，漂洗，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片，觀察采圖。

圖1 5000m海拔高度HE染色顯示的視網(wǎng)膜水腫狀態(tài)(×200) A：0h；B：2h；C：4h；D：6h；E：10h；F：24h；G：72h。

圖2 5000m海拔高度各組SD大鼠視網(wǎng)膜組織HIF-1α免疫組化染色像(×200) A：0h；B：2h；C：4h；D：6h；E：10h；F：24h；G：72h。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：本實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)均輸入SPSS 22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每個(gè)時(shí)間組入艙前和入艙后的SD大鼠視網(wǎng)膜F-ERG自身前后對(duì)照比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。每組大鼠相互之間進(jìn)艙前后視網(wǎng)膜F-ERG變化比較采用單因素方差分析，如總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1高海拔視網(wǎng)膜病變SD大鼠模型的建立

2.1.1 5000m海拔高度下不同時(shí)間SD大鼠視網(wǎng)膜HE染色HE結(jié)果顯示模擬海拔5000m時(shí)，正常對(duì)照組(0h)SD大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)規(guī)整，細(xì)胞排列整齊，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞邊緣清晰完整，分布均勻。在高海拔視網(wǎng)膜病變SD大鼠模型中，隨著各實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞腫脹明顯，內(nèi)核層細(xì)胞間水腫明顯，外核層層距明顯增加，外叢狀層疏松；并且在10h達(dá)到高峰，隨著時(shí)間的進(jìn)一步推移，視網(wǎng)膜各層水腫仍存在，但逐漸減輕(圖1)。

2.1.2 5000m海拔高度下不同時(shí)間SD大鼠視網(wǎng)膜免疫組化染色免疫組化HIF-1α染色顯示在正常對(duì)照組(0h)SD大鼠視網(wǎng)膜組織中，HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層微量表達(dá)，在高海拔視網(wǎng)膜病變SD大鼠模型中，隨著各實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，大鼠視網(wǎng)膜組織中，HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及內(nèi)核層細(xì)胞胞漿明顯著色，表達(dá)增高，10h時(shí)最為明顯，隨后24h及72h HIF-1α表達(dá)較10h降低(圖2)。

表1 各組SD大鼠進(jìn)入高原模擬艙前后F-ERG 暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅

2.1.3 5000m海拔高度下不同時(shí)間入艙前后SD大鼠視網(wǎng)膜F-ERG

2.1.3.1 5000m海拔高度下各時(shí)間組入艙前后SD大鼠視網(wǎng)膜F-ERG比較模擬5000m海拔高度下，各組SD大鼠進(jìn)艙前后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，各組進(jìn)艙前后自身對(duì)照比較，結(jié)果顯示2h和24h組F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅在進(jìn)入高原模擬艙前后未見(jiàn)明顯改變(P>0.05)，4、6、10、72h組F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅在進(jìn)入高原模擬艙前后有明顯改變，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

圖3 各時(shí)間組SD大鼠進(jìn)艙前和進(jìn)艙后的視網(wǎng)膜F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅 a P<0.05 vs 進(jìn)艙前。

圖4 各組SD大鼠進(jìn)入高原模擬艙前后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅 b P<0.05 vs 2h組；c P<0.05 vs 24h組。

圖5 5000m海拔高度各組SD大鼠視網(wǎng)膜HE染色結(jié)果(×200) A：安慰劑組；B：復(fù)方血栓通組；C：紅景天組；D：肌苷組。

2.1.3.2 5000m海拔高度下各時(shí)間組間入艙前后SD大鼠視網(wǎng)膜F-ERG比較模擬5000m海拔高度下，各組SD大鼠進(jìn)艙前和進(jìn)艙后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4。進(jìn)艙前各組間b波幅值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.471，P=0.236)；進(jìn)艙后各組間b波幅值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.809，P=0.010)。進(jìn)艙后各組間兩兩比較，2h組與4h組、6h組、10h組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007、0.008、0.002)；24h組與4h組、6h、10h組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035、0.040、0.012)，余各組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2復(fù)方血栓通對(duì)SD大鼠高海拔視網(wǎng)膜病變預(yù)防作用

2.2.1各組SD大鼠視網(wǎng)膜HE染色結(jié)果分別給予安慰劑(生理鹽水)、復(fù)方血栓通、紅景天及肌苷連續(xù)灌胃7d后，將SD大鼠置于模擬海拔5000m高原艙內(nèi)10h后，結(jié)果顯示復(fù)方血栓通組、紅景天組及肌苷組的視網(wǎng)膜水腫與安慰劑組相比較均明顯減輕，且復(fù)方血栓通組與紅景天組視網(wǎng)膜水腫程度明顯低于肌苷組，其中復(fù)方血栓通組內(nèi)核層細(xì)胞水腫程度最低，紅景天組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層水腫程度最低(圖5)。

2.2.2各組SD大鼠視網(wǎng)膜HIF-1α表達(dá)免疫組化染色分別予安慰劑(生理鹽水)，復(fù)方血栓通，紅景天及肌苷連續(xù)灌胃7d后，將SD大鼠置于模擬海拔5000m高原艙內(nèi)10h后，結(jié)果顯示HIF-1α在安慰劑組SD大鼠視網(wǎng)膜組織的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層明顯表達(dá)，復(fù)方血栓通組及紅景天組HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層表達(dá)較安慰劑組明顯下降，尤其在紅景天組HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層表達(dá)最少，但肌苷組同安慰劑組相比HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層表達(dá)無(wú)明顯差異(圖6)。

圖6 5000m海拔高度各組SD大鼠視網(wǎng)膜HIF-1α表達(dá)免疫組化染色(×200) A：安慰劑組；B：復(fù)方血栓通組；C：紅景天組；D：肌苷組。

圖7 各組SD大鼠進(jìn)艙前后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅 a P<0.05 vs 安慰劑組；c P<0.05 vs 肌苷組。

2.2.3各組SD大鼠進(jìn)艙前后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅比較分別予安慰劑(生理鹽水)、肌苷、復(fù)方血栓通及紅景天連續(xù)灌胃7d后，將SD大鼠置于模擬海拔5000m高原艙內(nèi)10h，各組SD大鼠進(jìn)艙前后F-ERG暗適應(yīng)最大反應(yīng)b波振幅檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖7，進(jìn)艙前各組總體上不存在差異(F=0.177，P=0.911)，進(jìn)艙后各組總體上存在差異(F=5.432，P=0.007)。進(jìn)艙后各組間兩兩比較，安慰劑組與復(fù)方血栓通組(P=0.032)，安慰劑組與紅景天組(P=0.001),肌苷組與紅景天組(P=0.042)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；復(fù)方血栓通組及紅景天組b波振幅進(jìn)艙前后差值均遠(yuǎn)低于安慰劑組，可見(jiàn)復(fù)方血栓通及紅景天對(duì)高海拔下大鼠視網(wǎng)膜功能均有保護(hù)作用。但肌苷組與安慰劑組、復(fù)方血栓通組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

近年交通業(yè)的迅速發(fā)展使進(jìn)入高原地區(qū)旅游、建設(shè)、生活、訓(xùn)練的人群越來(lái)越多，對(duì)于初進(jìn)入高原的人群，高海拔視網(wǎng)膜病變常是引起其視力下降的主要原因，也成為了制約高原地區(qū)旅游業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展因素之一，因此高海拔視網(wǎng)膜病變的防治顯得尤為重要。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外對(duì)高海拔視網(wǎng)膜病變的研究主要集中在個(gè)案病例報(bào)告，臨床觀察及流行病學(xué)調(diào)查方面。Russo等[4]報(bào)道了3例患者在完成海拔6000m以上地區(qū)探險(xiǎn)返回后，視物出現(xiàn)暗點(diǎn)，視力下降。眼底檢查發(fā)現(xiàn)多發(fā)性后極部出血，2mo后視力恢復(fù)眼底出血完全消退。我們團(tuán)隊(duì)曾對(duì)青海省瑪沁縣40歲以上世居藏族人群視網(wǎng)膜血管性疾病相關(guān)因素的流行病學(xué)調(diào)查，顯示高海拔是視網(wǎng)膜血管性疾病的高危因素[5]。有研究指出高海拔視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制是由血視網(wǎng)膜屏障完整性破壞，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷及炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子的異常釋放等多種因素共同作用[6-9]，但是確切原因并未完全清楚。此外高海拔地區(qū)自然環(huán)境惡劣、多變也增加了研究難度，因此，建立有效穩(wěn)定的高海拔視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型，繼續(xù)探索其發(fā)病機(jī)制及防治的實(shí)驗(yàn)研究仍然是十分必要的。

本研究運(yùn)用動(dòng)物高原環(huán)境模擬實(shí)驗(yàn)艙構(gòu)建高海拔視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型。在模擬海拔5000m的高海拔視網(wǎng)膜病變大鼠模型中，組織形態(tài)上通過(guò)病理組織切片觀察到隨著入艙時(shí)間的增加，大鼠視網(wǎng)膜水腫明顯，其中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞腫脹明顯，內(nèi)核層細(xì)胞間水腫明顯，外核層層距明顯增加，外叢狀層疏松；并且在10h達(dá)到高峰，隨著時(shí)間的進(jìn)一步推移，視網(wǎng)膜各層水腫仍存在，但逐漸減輕。分子水平上通過(guò)免疫組織化學(xué)染色觀察到，隨著各入艙時(shí)間的增加，大鼠視網(wǎng)膜組織中，HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及內(nèi)核層細(xì)胞胞漿明顯著色，表達(dá)增高，10h時(shí)最為明顯，隨后24、72h HIF-1α表達(dá)較10h降低。視網(wǎng)膜功能上通過(guò)F-ERG檢查，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，ERG暗視視錐-視桿細(xì)胞反應(yīng)b波振幅逐漸下降，在10h下降最為明顯；隨后機(jī)體逐漸適應(yīng)并開(kāi)始恢復(fù)即耐受，b波振幅下降趨勢(shì)逐漸變緩慢。因此我們推測(cè)在模擬高海拔環(huán)境下，缺氧使得HIF-1α表達(dá)增高，HIF-1α通過(guò)激活血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等的表達(dá)，導(dǎo)致血視網(wǎng)膜屏障功能受損，視網(wǎng)膜組織水腫，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的腫脹、變性甚至凋亡，造成視網(wǎng)膜的形態(tài)及功能受損。

缺氧是引起高海拔視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展的主要因素，以紅景天、人參、當(dāng)歸等中藥制劑及肌苷片，苯丙胺等西藥制劑為代表的抗缺氧藥物的應(yīng)用成了預(yù)防高海拔視網(wǎng)膜病變的研究熱點(diǎn)。紅景天是世居西藏高原的藏族人民防治高原病的經(jīng)驗(yàn)用藥，盡管具體藥物機(jī)制不詳，但越來(lái)越多的研究指出紅景天可以降低氧耗速度又可以增加供氧作用，顯著提高機(jī)體的抗氧能力。郄濤等[10]研究認(rèn)為紅景天提取物紅景天苷可以改善心肌的缺血缺氧，減少心肌的細(xì)胞損傷，周林甫等[11]發(fā)現(xiàn)紅景天苷可通過(guò)提高腦組織內(nèi)的抗氧化酶的活性，清除自由基，上調(diào)抗凋亡蛋白的表達(dá)而對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起保護(hù)作用。肌苷在體內(nèi)轉(zhuǎn)化后參與細(xì)胞的能量代謝和蛋白質(zhì)合成，可提高輔酶A等活性，保護(hù)細(xì)胞在缺氧狀態(tài)仍繼續(xù)進(jìn)行代謝[12]。然而,現(xiàn)有的中西藥物還不能滿足有效預(yù)防和治療缺氧的需求。尋找與發(fā)現(xiàn)安全有效的抗缺氧藥物,對(duì)積極防治高海拔視網(wǎng)膜病變?nèi)匀痪哂兄匾饬x。復(fù)方血栓通膠囊為復(fù)方藥，其主要成分為三七、黃芪、丹參和玄參，研究表明三七可通過(guò)對(duì)抗氧自由基損傷、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制鈣通道防止鈣超載等途徑減輕細(xì)胞損傷[13]。黃芪被證實(shí)具有增強(qiáng)免疫、抗疲勞、耐缺氧以及抗菌、降壓、改善缺血再灌注損傷等多種藥理作用[14]。丹參和玄參具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、改善微循環(huán)、抑制和解除血小板聚集，提高機(jī)體耐缺氧能力,抑制膠原纖維的產(chǎn)生和促進(jìn)纖維蛋白的降解、抗炎、抗脂質(zhì)過(guò)氧化和清除自由基的功效[15-16]。

本研究通過(guò)構(gòu)建高海拔視網(wǎng)膜病變大鼠模型，以中藥紅景天，西藥肌苷片及安慰劑生理水為對(duì)照，運(yùn)用HE染色、免疫組化及電生理觀察復(fù)方血栓通膠囊對(duì)模擬的高海拔缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)及功能的影響，以期為高原眼病的防治提供新的依據(jù)。鑒于高海拔視網(wǎng)膜病變大鼠造模階段發(fā)現(xiàn)，模擬海拔5000m入艙10h，大鼠視網(wǎng)膜HE染色顯示視網(wǎng)膜水腫最為明顯，其中以神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞腫脹及內(nèi)核細(xì)胞層間水腫為甚，故我們選擇在模擬海拔5000m入艙10h，觀察復(fù)方血栓通膠囊，紅景天及肌苷片對(duì)高海拔視網(wǎng)膜病變有無(wú)保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，入艙前連續(xù)給藥7d后，復(fù)方血栓通、紅景天及肌苷均可減輕視網(wǎng)膜水腫，其中復(fù)方血栓通減輕內(nèi)核層細(xì)胞水腫程度最低，紅景天減輕神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層水腫程度最低。紅景天和復(fù)方血栓通均可使大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層HIF-1α表達(dá)明顯下降，尤以紅景天更為明顯，而肌苷同安慰劑組相比，HIF-1α在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層表達(dá)無(wú)明顯差異，提示紅景天和復(fù)方血栓通均可抑制高海拔環(huán)境下HIF-1α的表達(dá)，改善視網(wǎng)膜缺血狀態(tài)。F-ERG檢測(cè)顯示，預(yù)防給予復(fù)方血栓通及紅景天進(jìn)入高原艙后，b波入艙前后振幅差值均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于預(yù)防給予生理鹽水，提示復(fù)方血栓通及紅景天對(duì)高海拔下大鼠視網(wǎng)膜功能均有保護(hù)作用。

我們的研究證實(shí)在模擬高海拔環(huán)境下，復(fù)方血栓通及紅景天可能是通過(guò)抑制HIF-1α的表達(dá)對(duì)大鼠高海拔視網(wǎng)膜病變有保護(hù)作用，但是具體作用機(jī)制有待我們進(jìn)一步研究。