• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    UHPLC/Q-Orbitrap-MS結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法研究酸棗仁入血成分

    2021-01-29 08:10:28武錦春杜晨暉秦雪梅
    分析測試學(xué)報(bào) 2021年1期
    關(guān)鍵詞:水提物負(fù)離子酸棗仁

    武錦春,杜晨暉,秦雪梅,閆 艷*

    (1.山西大學(xué) 中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心,山西 太原 030006;2.山西中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院,山西 晉中 030619)

    中藥的精髓在于多組分、多環(huán)節(jié)協(xié)同發(fā)揮效應(yīng)。多數(shù)情況下,中藥需要吸收入血,通過代謝轉(zhuǎn)化生成活性產(chǎn)物后才能發(fā)揮整體藥效作用。因此,選取有效成分時(shí),應(yīng)與藥效和代謝關(guān)聯(lián)分析才更精準(zhǔn)、全面[1]。此外,當(dāng)機(jī)體處于不同狀態(tài)下藥物的分布及消除明顯不同[2],因此考察病理狀態(tài)下中藥成分在體內(nèi)的吸收、代謝等過程更有意義。中藥的化學(xué)成分復(fù)雜,加之內(nèi)源性成分的干擾使得檢測和鑒定藥源性代謝物十分困難。經(jīng)典的體內(nèi)代謝產(chǎn)物鑒別方法是通過比較空白樣品和給藥后樣品的色譜圖,從復(fù)雜的背景中提取低響應(yīng)的藥源性代謝產(chǎn)物的信號,但該方法周期長、成本高?;瘜W(xué)計(jì)量學(xué)具有大數(shù)據(jù)運(yùn)算的優(yōu)勢,能在不損失信息的情況下,通過變換和構(gòu)造模型,使復(fù)雜數(shù)據(jù)簡單化[3-4]。將化學(xué)計(jì)量學(xué)的主成分分析(PCA)、偏最小二乘判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)應(yīng)用于中藥體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒別分析中,將大大加快從化學(xué)測量數(shù)據(jù)中最大限度提取有用化學(xué)信息的速度,提高鑒別準(zhǔn)確性。

    酸棗仁為鼠李科植物酸棗ZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge) Hu ex H.F.Chou的干燥成熟種子,具有養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津之功效[5],是中醫(yī)治療失眠之要藥。藥理學(xué)研究表明,酸棗仁水提物具有鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮性抑郁等作用[6-7];其醇提物具有抗心律失常、抗心肌缺血等作用[8]。植物化學(xué)研究表明,酸棗仁本底化學(xué)成分基本清晰,主要含有皂苷類、黃酮類、生物堿類和脂肪酸類成分[9]。酸棗仁體內(nèi)代謝研究雖有報(bào)道,但多集中于酸棗仁總黃酮部位或幾個(gè)主要單體化合物的研究[10-12]。本課題組前期采用超高效液相色譜-靜電場軌道離子阱質(zhì)譜(UHPLC/Q-Orbitrap-MS)研究了正常大鼠灌胃酸棗仁水提物后的入血成分[13],然而對于失眠模型大鼠口服給予酸棗仁水提物的入血成分研究尚屬空白。

    高分辨質(zhì)譜儀能獲得準(zhǔn)確、豐富的數(shù)據(jù)信息,同時(shí)利用化學(xué)計(jì)量學(xué)大數(shù)據(jù)運(yùn)算的優(yōu)勢,可使復(fù)雜信息簡單化,能夠快速、準(zhǔn)確識別目標(biāo)成分。因此,本文采用UHPLC/Q-Orbitrap-MS結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法,研究對氯苯丙氨酸(PCPA)誘導(dǎo)的失眠模型大鼠口服給予酸棗仁水提物后的入血成分。通過對比模型組與給藥組大鼠血清樣品的色譜數(shù)據(jù),并結(jié)合PCA和OPLS-DA等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法發(fā)現(xiàn)并識別入血成分。該方法可快速、全面地檢測潛在藥物入血成分,為進(jìn)一步闡明酸棗仁藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及進(jìn)行質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 儀器、試劑與材料

    Thermo fisher U3000超高效液相色譜儀,配置在線脫氣機(jī)、四元梯度泵(HPG-3400RS)、柱溫箱(TCC-3000RS)、自動(dòng)進(jìn)樣器(WPS-3000TRS),Thermo ScientificTMQ ExactiveTMFocus質(zhì)譜儀(德國Thermo公司);全自動(dòng)氮吹濃縮儀(TV1603N21312,英國Biotage公司)。

    乙腈(質(zhì)譜級,西班牙Fisher公司),甲酸、甲醇(色譜級,德國Merck公司);實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q超純水;其它試劑均為分析純。

    烏藥堿(批號HC225036198)、木蘭花堿(批號20160710)、維采寧Ⅱ(批號 HV187847198)、6?-阿魏酰斯皮諾素(批號20160303)、斯皮諾素(批號20160314)、酸棗仁皂苷A(批號20160315)均購于寶雞市辰光生物科技有限公司;酸棗仁皂苷B(批號20170210)購于南京春秋生物工程有限公司。經(jīng)高效液相色譜(HPLC)歸一化法測得對照品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%。

    酸棗仁飲片購自山西振東道地藥材有限公司(批號:20161108)。經(jīng)山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室杜晨暉副教授鑒定為鼠李科植物酸棗ZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge) Hu ex H.F.Chou 的干燥成熟種子,留樣于山西大學(xué)中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心冷庫。健康雄性SD大鼠(180~220 g),購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司(SCXK京2016-0006)。

    1.2 酸棗仁水提物的制備

    酸棗仁(ZSS)水提物的制備參考課題組前期方法[14],取酸棗仁樣品約100 g,粉碎(60%過1號藥典篩),精密稱定,加10倍量水,浸泡30 min,加熱至沸,回流提取2 h,過濾。濾渣再加8倍量水,繼續(xù)回流提取2 h,過濾,合并濾液,減壓濃縮至0.5 g/mL(生藥量計(jì)),冷凍干燥,得酸棗仁水提物凍干粉。

    1.3 動(dòng)物造模與給藥

    24只SD大鼠在室溫22~24 ℃,相對濕度55%~65%的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為2組:空白組(NC,n=6),模型組(IM,n=18)。模型組18只大鼠連續(xù)3 d腹腔注射PCPA混懸液400 mg/kg(0.5%羧甲基纖維素鈉,0.5%CMC-Na)[15]。于第二天末注射后眼眶取血,NC組大鼠同法眼眶采血,離心(3 500 r/min,4 ℃,10 min),得血清。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法[16]測定血清中5-羥色胺(5-HT)的質(zhì)量濃度。將18只造模成功大鼠隨機(jī)分為3組,分別為IM組、給藥(IM+ZSS)2 h組和4 h組。后兩組于PCPA腹腔注射第三天后1 h開始給藥(30 g/kg ZSS),連續(xù)給藥5 d,每天2次,末次給藥前禁食12 h(自由飲水)。NC組和IM組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。

    1.4 樣品采集及制備

    IM組和NC組大鼠于末次給予0.5%CMC-Na溶液1 h后腹主動(dòng)脈取血,IM+ZSS組大鼠分別于給藥后2 h和4 h腹主動(dòng)脈取血,離心(3 500 r/min,4 ℃,15 min),收集上清液,得血清樣品,-80 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

    分別取2 h和4 h含藥血清樣品各100 μL等體積混合,其他組血清樣品各取200 μL于1.5 mL EP管中,分別加入600 μL甲醇,渦旋混勻3 min,離心(13 000 r/min,4 ℃,10 min),轉(zhuǎn)移上清液上樣于Oasis PRIME HLB 96孔μElution提取板(Waters公司)進(jìn)行抽濾,收集濾液。氮?dú)獯蹈?37 ℃),殘?jiān)?00 μL初始流動(dòng)相復(fù)溶,離心(13 000 r/min,4 ℃,10 min),轉(zhuǎn)移上清液于內(nèi)襯管中待分析。

    質(zhì)控(QC)樣本的制備為隨機(jī)抽取模型組和給藥組的血清樣品各2個(gè),分別精密吸取50 μL制成混合樣本,按照以上處理制備QC樣本。

    1.5 UHPLC/Q-Orbitrap-MS分析條件

    1.5.1 色譜條件色譜柱為ACQUITY UPLC?HSS T3柱(150 mm×2.1 mm,1.8 μm),流動(dòng)相為0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)。洗脫梯度:0~8 min,5%~17%B;8~10 min,17%B;10~11 min,17%~18%B;11~12 min,18%~20%B;12~17 min,20%~23%B;17~22 min,23%~33%B;22~30 min,33%~60%B;30~32 min,60%~100%B;32~34 min,100%B;34~36 min,100%~5%B;36~40 min,5%B。流速為0.3 mL/min;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣量為3 μL。

    1.5.2 質(zhì)譜條件離子源:電噴霧電離(ESI)源;正、負(fù)離子切換掃描;工作模式:全掃描-數(shù)據(jù)依賴二級掃描(Full MS-ddMS2);質(zhì)譜參數(shù)為:鞘氣流速:30 arb(ESI+)、35 arb(ESI-);輔助氣流速:10 arb;噴霧電壓:3.5 kV(ESI+)、3.0 kV(ESI-);正離子模式下的歸一化裂解能量(NCE)為20%、30%、50%,負(fù)離子模式下NCE為30%、45%、60%。毛細(xì)管溫度:320 ℃;離子源溫度:350 ℃;一級質(zhì)量分辨率:70 000;掃描范圍:m/z100~1 500;動(dòng)態(tài)排除持續(xù)時(shí)間:8 s。

    圖1 各組大鼠血清中5-HT的質(zhì)量濃度(n=6)Fig.1 The concentration of 5-HT in rat serum from each group (n=6) NC:normal control,IM:insomnia model,IM+ZSS: dosed group;***:significant difference

    1.6 多元統(tǒng)計(jì)分析

    LC-MS采集的原始數(shù)據(jù)經(jīng)Thermo自帶Compound Discoverer (CD) 3.0軟件中Workflow TemplatesMetabolomicsUntargeted Metabolomics with Statistics Detect Unknowns with ID using Online Databases and mzLogic模塊進(jìn)行預(yù)處理。Workflow設(shè)置如下:Min Precursor Mass:100 Da,Max Precursor Mass:1 500 Da;S/NThreshold:1.5;Mass Tolerance:5 ppm;Min Peak Intensity:50 000;Max Element Counts:C90、H190、N10、Na2、O90、P3、S5;RT Tolerance:0.5 min;Ions:[M+H]+、[M+Na]+、[2M+H]+或[M-H]-、[2M-H]-、[M+FA-H]-、[2M+FA-H]-。經(jīng)過軟件進(jìn)行峰提取、峰對齊、峰校準(zhǔn)后得到一個(gè)保留時(shí)間、質(zhì)荷比和強(qiáng)度的三維數(shù)據(jù)矩陣。對數(shù)據(jù)集的空缺值采用“80%原則”進(jìn)行刪減[17]??杖敝涤迷摻M最小值的1/5進(jìn)行填充,并進(jìn)行SUM歸一化,數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 14.0軟件(Umetrics AB)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后,進(jìn)行PCA和OPLS-DA等多變量分析,通過OPLS-DA的變量投影重要性分析(VIP)和S-plot圖比較模型組與模型給藥組的差異離子,結(jié)合VIP>1發(fā)現(xiàn)差異性的藥源性代謝物。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 失眠大鼠模型的復(fù)制

    與NC組大鼠相比,IM組大鼠表現(xiàn)為興奮性增強(qiáng),呈現(xiàn)易激怒、好爭斗的狀態(tài);毛色暗淡、無光澤,脫毛現(xiàn)象明顯;糞便呈灰黃色、質(zhì)地軟,排尿增多。各組大鼠血清中5-HT的質(zhì)量濃度如圖1所示,與NC組相比,IM組大鼠血清中5-HT的質(zhì)量濃度顯著降低,表明模型復(fù)制成功;與IM組相比,給予ZSS水提物(30 g/kg)后,IM+ZSS組大鼠血清中5-HT的質(zhì)量濃度顯著升高。結(jié)果表明,ZSS水提物(30 g/kg)可改善大鼠血清中5-HT的質(zhì)量濃度,從而改善失眠。

    2.2 直觀分析與多變量統(tǒng)計(jì)分析

    采用UHPLC/Q-Orbitrap-MS分析得到IM組和IM+ZSS組血清樣本的基峰離子圖見圖2。利用CD軟件對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理,從正離子數(shù)據(jù)集提取46 644個(gè)信號離子,負(fù)離子數(shù)據(jù)集提取41 901個(gè)信號離子。

    PCA是一種無監(jiān)督的模式識別方法,能夠真實(shí)地反映原始數(shù)據(jù)的分組情況。QC組、IM組及IM+ZSS組大鼠血清樣本的PCA聚類得分圖如圖3所示,在正、負(fù)離子模式下,QC組、IM組和IM+ZSS組明顯聚成3類。QC樣品聚類良好,說明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量好。此外,IM組和IM+ZSS組沿t[2]軸分開,表明服用ZSS水提物是造成樣品分類的主要原因。

    根據(jù)來源,代謝指紋譜的變量理論上可分為3類:吸收的成分,新產(chǎn)生成分,藥物干預(yù)改變的內(nèi)源性代謝物。外源性成分及其代謝物僅出現(xiàn)在藥物處理的樣品中,所以當(dāng)使用代謝組學(xué)技術(shù)時(shí),藥物處理模型組和模型對照組的差異主要來自外源性成分及其代謝物[18]。因此,為進(jìn)一步找出IM+ZSS組相對于IM組的差異性藥源成分,采用有監(jiān)督的OPLS-DA對兩組樣本進(jìn)行分析。

    如圖4A和4B所示,在正、負(fù)離子模式下,IM組與IM+ZSS組均可沿t[1]軸分開,R2X(cum,predictive+orthogonal)值分別為0.450和0.461,表明模型分別累積概括了PC1、PC2兩種整體信息的45.0%和46.1%。R2Y(cum)值均為1,表明模型可解釋因變量100%的變異信息。Q2(cum)值分別為0.858和0.904,表明模型可預(yù)測準(zhǔn)確程度分別為85.8%和90.4%。用排列驗(yàn)證和交叉驗(yàn)證方差分析(CV-ANOVA)對模型進(jìn)行驗(yàn)證。如圖4C和4D所示,在正、負(fù)離子模式下,模型經(jīng)200次置換檢驗(yàn),Q2點(diǎn)的回歸線與Y軸交于負(fù)軸。此外,CV-ANOVA的p值分別為0.004 29和0.005 15(p<0.05),表明所建模型有效。如圖4E和4F所示,在正、負(fù)離子模式下,S-plot圖中代謝物距原點(diǎn)越遠(yuǎn),對分組差異貢獻(xiàn) (VIP) 越大。

    2.3 代謝產(chǎn)物的鑒別

    將OPLS-DA模型所對應(yīng)的S-plot載荷圖和VIP>1作為酸棗仁水提物口服給予失眠模型大鼠后藥源性入血原型成分和代謝產(chǎn)物的篩選標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果從正離子數(shù)據(jù)矩陣中提取出586個(gè)差異離子,負(fù)離子數(shù)據(jù)矩陣中提取出496個(gè)差異離子。這些離子應(yīng)是酸棗仁外源性代謝物組的成分(原型成分或代謝產(chǎn)物),或是服用酸棗仁引起濃度改變的內(nèi)源性成分。然而,酸棗仁原型成分及其代謝產(chǎn)物只能在服藥后的樣品中檢出,而在模型對照組的樣品未檢出,內(nèi)源性成分則在兩組均能夠檢出,只是濃度有改變。通過對比模型對照組,在正離子模式下提取出61個(gè)潛在藥源性物質(zhì);在負(fù)離子模式下提取出50個(gè)潛在藥源性物質(zhì)。最終,在正離子模式下共鑒定7個(gè)差異藥源性代謝物,在負(fù)離子模式下共鑒定13個(gè)差異藥源性代謝物,包括11個(gè)原型成分及9個(gè)代謝產(chǎn)物(見表1)。其中,將烏藥堿、維采寧Ⅱ、木蘭花堿、斯皮諾素、6?-阿魏酰斯皮諾素、酸棗仁皂苷A及酸棗仁皂苷B與對照品比較進(jìn)行鑒別。

    2.3.1 生物堿及其代謝產(chǎn)物烏藥堿為酸棗仁中含量較高的芐基異喹啉類生物堿[14]。如表1所示,正離子模式下,烏藥堿(2號化合物)產(chǎn)生m/z286.141 45的分子離子峰,丟失NH3中性分子生成m/z269.12;m/z269.12相繼丟失CH3OH和CO生成碎片離子m/z237.09和209.10,或相繼丟失C6H6O、CH4O生成碎片離子m/z175.07、143.05。1號化合物與烏藥堿具有相同的二級碎片,參考文獻(xiàn)[19],推斷其為6-葡萄糖烏藥堿。正離子模式下,MA1和MA2分別產(chǎn)生m/z462.174 59和m/z462.175 51的分子離子峰,較烏藥堿的分子量增加了176 Da,且與烏藥堿有相同的特征碎片離子,推測兩個(gè)化合物均為烏藥堿的葡萄糖醛酸化產(chǎn)物。

    木蘭花堿為酸棗仁中的阿樸菲類異喹啉生物堿。如表1所示,正離子模式下,木蘭花堿(4號化合物)產(chǎn)生m/z342.169 37的準(zhǔn)分子離子峰,其脫掉(CH3)2NH中性分子生成m/z297.11的碎片離子。m/z297.11通過中性丟失CH3,生成碎片離子m/z282.06,或相繼中性丟失CH3OH及CO分子生成碎片離子m/z265.09和m/z237.09。MA3產(chǎn)生m/z314.138 64的分子離子峰,比木蘭花堿少了28 Da,且產(chǎn)生和木蘭花堿相同的上述碎片離子,結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[20],初步推斷MA3是木蘭花堿去二甲基的產(chǎn)物。

    表1 UHPLC/Q-Orbitrap-MS鑒定酸棗仁水提物灌胃的失眠大鼠血清中的原型成分及代謝產(chǎn)物Table 1 Prototype components and metabolites identified in serum of insomnia rats intragastricing administration of water extract of Ziziphi Spinosae Semen by UHPLC/Q-Orbitrap-MS

    2.3.2 皂苷及其代謝產(chǎn)物酸棗仁皂苷類成分在負(fù)離子模式下響應(yīng)較高,碎片豐富。負(fù)離子模式下,酸棗仁皂苷A(10號化合物)和酸棗仁皂苷B(11號化合物)的裂解規(guī)律(見表1)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]。失眠模型大鼠血清中未檢測到酸棗仁皂苷的代謝產(chǎn)物酸棗仁皂苷元。研究表明,酸棗仁水提物體外經(jīng)正常人體腸道菌群轉(zhuǎn)化后的腸道菌液中未檢測到酸棗仁皂苷元[21]。推測酸棗仁皂苷元可能通過糞便排泄,有待進(jìn)一步的研究。此外,樣品備樣方法中,上清液上樣于Oasis PRIME HLB 96孔μElution提取板時(shí),75%的甲醇過濾液可能導(dǎo)致極性較弱代謝物的吸附,造成濾液不含或較少含有這些成分,而使酸棗仁皂苷元未被儀器檢測到。

    2.3.3 黃酮及其代謝產(chǎn)物斯皮諾素(7號化合物)和6?-阿魏酰斯皮諾素(9號化合物)是以芫花素為母核的6位黃酮碳糖苷類。如表1所示,負(fù)離子模式下,斯皮諾素與6?-阿魏酰斯皮諾素均通過中性丟失C4H8O4、C3H6O3和C2H4O2產(chǎn)生相同的碎片離子。負(fù)離子模式下,MF2和MF5均產(chǎn)生m/z283.06的碎片,同時(shí)分子離子峰分別比碎片283.06大176 Da和80 Da,因此推測其為芫花素肝腸循環(huán)代謝產(chǎn)生的芫花素葡萄糖醛酸化和硫酸酯化的產(chǎn)物。斯皮諾素和6?-阿魏酰斯皮諾素在腸道發(fā)生水解反應(yīng)生成當(dāng)藥黃素和斯皮諾素,進(jìn)一步發(fā)生裂解反應(yīng)生成芫花素。負(fù)離子模式下,MF6產(chǎn)生分子離子峰253.050 32,結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[22],推測其為芫花素去甲氧基的產(chǎn)物。

    正離子模式下,維采寧Ⅱ(3號化合物)產(chǎn)生m/z595.165 22的分子離子峰,隨后裂解產(chǎn)生m/z559.14[M-2H2O]-和457.11[M-H2O-C4H8O4]-的碎片離子,m/z457.11依次丟失中性分子CH2O、H2O分別生成m/z427.10、409.09等一系列典型的黃酮C糖30、60、90、120中性丟失的產(chǎn)物碎片。

    異牡荊素(8號化合物)是以芹菜素為母核的6位黃酮碳糖苷類。負(fù)離子模式下,其產(chǎn)生m/z431.098 18的分子離子峰,并產(chǎn)生C糖的相同碎片。參考文獻(xiàn)[23],推斷5號峰為異牡荊素-2″-O-β-D-葡萄糖苷。負(fù)離子模式下,MF1和MF4分別產(chǎn)生m/z349.001 74和445.077 91的準(zhǔn)分子離子峰,繼而分別裂解脫掉80 Da和176 Da,產(chǎn)生碎片離子m/z269.05,因此推斷MF1和MF4是芹菜素硫酸酯化和葡萄糖醛酸化的代謝產(chǎn)物。MF3的準(zhǔn)分子離子峰為m/z364.999 85,較芹菜素增加了96 Da,且產(chǎn)生碎片離子m/z285.04[M-H-80 Da]-,推斷為芹菜素羥基化和硫酸酯化的代謝產(chǎn)物。

    綜上,與課題組前期研究結(jié)果相比[13],正常與失眠模型大鼠血清中均檢測到原型成分烏藥堿、維采寧Ⅱ、異牡荊素-2″-O-β-D-葡萄糖苷、斯皮諾素、6?-阿魏酰斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B。然而,與正常大鼠相比,烏藥堿、斯皮諾素、6?-阿魏酰斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B的血藥濃度在失眠病理狀態(tài)下發(fā)生了明顯改變[15]。

    由表1可知,與失眠模型大鼠相比,正常大鼠血清中檢測到更多的原型成分,如酸李堿、當(dāng)藥黃素、青天葵黃酮J、酸棗仁皂苷H、酸棗仁皂苷G和美洲茶酸。與正常大鼠相比,失眠模型大鼠血清中鑒定到的豐富的代謝產(chǎn)物,多為水解、硫酸化或葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物。其原因可能為:①睡眠障礙與功能性消化不良、腸易激綜合征等腸道疾病有關(guān)[24-25]。失眠癥患者腸道菌群的數(shù)量、組成和多樣性發(fā)生了變化[26-27]。因此推斷失眠引起的腸道消化吸收功能和腸道菌群的改變導(dǎo)致酸棗仁中原型成分的吸收差異,促進(jìn)了黃酮、生物堿和皂苷的代謝;②大鼠腹腔注射的PCPA通過改變?nèi)ゼ啄I上腺素能系統(tǒng)和5-HT能系統(tǒng)影響肝臟細(xì)胞色素P450表達(dá)[28],進(jìn)而引起藥物代謝的差異。由此可見,正常大鼠血清中原型成分的種類豐富且濃度發(fā)生了變化,而失眠模型大鼠血清中代謝產(chǎn)物的種類更為豐富。

    3 結(jié) 論

    本文基于UHPLC/Q-Orbitrap-MS結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法研究了酸棗仁水提物口服給予PCPA誘導(dǎo)失眠大鼠后的入血成分。通過對比模型組與模型給藥組血清樣品的色譜數(shù)據(jù)并結(jié)合PCA和OPLS-DA的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法,共鑒定出20個(gè)入血成分,包括11個(gè)原型成分及9個(gè)代謝產(chǎn)物。該方法有別于傳統(tǒng)的直觀分析法,能夠快速、準(zhǔn)確地分析體內(nèi)的入血成分。此研究結(jié)果可為明確酸棗仁的質(zhì)量標(biāo)志物提供科學(xué)依據(jù)。

    猜你喜歡
    水提物負(fù)離子酸棗仁
    森林公園負(fù)離子濃度及負(fù)離子物質(zhì)量和價(jià)值量研究
    負(fù)離子人造板研究現(xiàn)狀及發(fā)展建議
    靜電對負(fù)離子地板測試的影響
    鬼針草水提物對大鼠腎結(jié)石改善作用
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:39:02
    酸棗仁:失眠嗜睡均可調(diào)
    天麻水提物HPLC指紋圖譜的建立及其真?zhèn)舞b別
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:25:38
    枇杷葉水提物的急性毒性和遺傳毒性
    酸棗仁湯治療甲亢失眠的效果觀察
    高壓脈沖電刺激下龍舌蘭釋放負(fù)離子的研究
    歸脾湯與酸棗仁湯合用治療抑郁癥25例療效觀察
    国产精品一区二区在线观看99| 亚洲国产精品999| 在线观看人妻少妇| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲成人免费av在线播放| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美 日韩 精品 国产| 9热在线视频观看99| 91九色精品人成在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久精品国产综合久久久| 亚洲av片天天在线观看| 天堂8中文在线网| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品少妇久久久久久888优播| 一区二区三区四区激情视频| 精品少妇久久久久久888优播| 真人做人爱边吃奶动态| www.熟女人妻精品国产| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲精品国产一区二区精华液| 多毛熟女@视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av国产精品久久久久影院| 午夜91福利影院| 在线 av 中文字幕| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲av片天天在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 美国免费a级毛片| 国产99久久九九免费精品| 91精品国产国语对白视频| 一级毛片精品| 欧美激情久久久久久爽电影 | 麻豆av在线久日| 国产有黄有色有爽视频| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 欧美精品人与动牲交sv欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品免费久久久久久久清纯 | netflix在线观看网站| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av成人一区二区三| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产在视频线精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 丝袜在线中文字幕| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品国产av在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 久久人妻熟女aⅴ| 成年人黄色毛片网站| 桃花免费在线播放| 国产成人啪精品午夜网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 成年人午夜在线观看视频| 黄色 视频免费看| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品自拍成人| 国产av国产精品国产| 中文字幕制服av| 黄色视频不卡| 十分钟在线观看高清视频www| 一区二区三区乱码不卡18| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩欧美免费精品| 日韩中文字幕视频在线看片| www日本在线高清视频| 欧美97在线视频| 日本欧美视频一区| 黄片大片在线免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产欧美日韩一区二区精品| 一区二区三区四区激情视频| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品无人区| 色综合欧美亚洲国产小说| 美女国产高潮福利片在线看| 午夜福利,免费看| 免费观看a级毛片全部| 国产1区2区3区精品| 嫩草影视91久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 操美女的视频在线观看| 午夜激情av网站| 他把我摸到了高潮在线观看 | 精品一区二区三区av网在线观看 | 久久狼人影院| 久久免费观看电影| 国精品久久久久久国模美| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲 欧美一区二区三区| 另类精品久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品 欧美亚洲| 国产日韩欧美视频二区| 国产成人精品在线电影| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久精品区二区三区| www.av在线官网国产| 国产国语露脸激情在线看| 91九色精品人成在线观看| 天天影视国产精品| 成人手机av| 亚洲 欧美一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久影院123| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲人成77777在线视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲国产精品999| 欧美日韩福利视频一区二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美性长视频在线观看| 人妻一区二区av| 中文字幕人妻熟女乱码| www日本在线高清视频| 他把我摸到了高潮在线观看 | 黄色毛片三级朝国网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 老鸭窝网址在线观看| 制服人妻中文乱码| av在线app专区| 男女下面插进去视频免费观看| 制服人妻中文乱码| 亚洲成人免费av在线播放| av网站免费在线观看视频| 制服人妻中文乱码| av在线app专区| 美女大奶头黄色视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品亚洲成国产av| 青草久久国产| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 性色av乱码一区二区三区2| 国产男女内射视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久中文字幕一级| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本五十路高清| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 啦啦啦视频在线资源免费观看| tube8黄色片| 视频在线观看一区二区三区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黄色视频不卡| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美日韩黄片免| 免费高清在线观看日韩| 国产精品一区二区在线不卡| 一个人免费看片子| 制服诱惑二区| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品二区激情视频| 高清av免费在线| 国产成人欧美| 母亲3免费完整高清在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| av欧美777| 久9热在线精品视频| 午夜91福利影院| 少妇被粗大的猛进出69影院| 最新在线观看一区二区三区| 不卡一级毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久热在线av| 日本欧美视频一区| 欧美日韩视频精品一区| 97人妻天天添夜夜摸| 久久久水蜜桃国产精品网| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久热爱精品视频在线9| 五月开心婷婷网| 一级片'在线观看视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲成人免费av在线播放| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲成人手机| 国产欧美日韩一区二区三 | 啦啦啦啦在线视频资源| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 看免费av毛片| 午夜福利一区二区在线看| 制服诱惑二区| 国产精品免费视频内射| 丝袜美腿诱惑在线| 日日夜夜操网爽| 国产又爽黄色视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产日韩欧美视频二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 日本wwww免费看| 国产男女内射视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲av电影在线进入| 午夜老司机福利片| 咕卡用的链子| 无遮挡黄片免费观看| 精品福利永久在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲五月色婷婷综合| 久久中文看片网| 成人亚洲精品一区在线观看| 大码成人一级视频| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美日韩视频精品一区| 一本综合久久免费| 日本五十路高清| 捣出白浆h1v1| 一级片免费观看大全| 久久久国产一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 99久久人妻综合| 女人久久www免费人成看片| av福利片在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 激情视频va一区二区三区| kizo精华| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 美女午夜性视频免费| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 五月开心婷婷网| 久久ye,这里只有精品| 久久久国产欧美日韩av| 精品国产一区二区久久| 美女视频免费永久观看网站| 十八禁人妻一区二区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 91成人精品电影| 亚洲熟女精品中文字幕| 曰老女人黄片| 亚洲欧美精品自产自拍| 99九九在线精品视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 制服人妻中文乱码| 两个人免费观看高清视频| 亚洲av男天堂| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 两性夫妻黄色片| 精品福利观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产成人精品久久二区二区免费| www.av在线官网国产| 国产高清国产精品国产三级| 青春草视频在线免费观看| 国产麻豆69| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品国产国语对白av| 国产在线视频一区二区| 黄片播放在线免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久ye,这里只有精品| 国产又爽黄色视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产在线观看jvid| 国产97色在线日韩免费| av天堂在线播放| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 又黄又粗又硬又大视频| 久久中文字幕一级| 日韩免费高清中文字幕av| 大香蕉久久网| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品一二三| 国产精品免费大片| 美女中出高潮动态图| 国产97色在线日韩免费| 在线观看人妻少妇| 成人国语在线视频| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲免费av在线视频| 91字幕亚洲| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 天天操日日干夜夜撸| 一本久久精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲国产欧美网| 老汉色av国产亚洲站长工具| 看免费av毛片| 欧美日本中文国产一区发布| av在线播放精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日本精品一区二区三区蜜桃| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜福利,免费看| 伦理电影免费视频| 在线永久观看黄色视频| 国产成人啪精品午夜网站| 啦啦啦免费观看视频1| 两人在一起打扑克的视频| 自线自在国产av| 麻豆国产av国片精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精品自拍成人| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久久免费高清国产稀缺| 18在线观看网站| 丝袜脚勾引网站| 天堂中文最新版在线下载| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利免费观看在线| 99九九在线精品视频| 国产免费现黄频在线看| 丝袜美足系列| 天天添夜夜摸| 亚洲国产欧美网| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲免费av在线视频| 中文字幕最新亚洲高清| 久久午夜综合久久蜜桃| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 中文字幕av电影在线播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲九九香蕉| av天堂久久9| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲综合色网址| 性色av一级| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲三区欧美一区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产男人的电影天堂91| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲精品一二三| 桃花免费在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 在线观看免费日韩欧美大片| 悠悠久久av| 一区在线观看完整版| 悠悠久久av| 精品熟女少妇八av免费久了| 好男人电影高清在线观看| 国产精品成人在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产区一区二久久| 精品一区二区三卡| av网站在线播放免费| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产片内射在线| 国产91精品成人一区二区三区 | 一本久久精品| 满18在线观看网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲人成电影观看| 欧美 日韩 精品 国产| 在线观看免费午夜福利视频| 97在线人人人人妻| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产日韩欧美在线精品| 成人三级做爰电影| 久久久精品免费免费高清| 正在播放国产对白刺激| 久久毛片免费看一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 一二三四社区在线视频社区8| 国产一区二区 视频在线| 久久中文看片网| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品国产国语对白av| 日韩欧美免费精品| 午夜激情av网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄色 视频免费看| bbb黄色大片| 国产精品影院久久| 欧美黄色淫秽网站| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 伦理电影免费视频| 亚洲精品美女久久av网站| 美女福利国产在线| 91av网站免费观看| 国产精品1区2区在线观看. | 大香蕉久久网| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产视频一区二区在线看| 国产一区二区三区av在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产一区二区在线观看av| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲avbb在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩视频一区二区在线观看| 老司机影院成人| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 人人妻人人澡人人看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产男女内射视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美在线一区亚洲| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久久国产成人免费| 亚洲伊人色综图| 国产男人的电影天堂91| a级片在线免费高清观看视频| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 下体分泌物呈黄色| 欧美成狂野欧美在线观看| 男人舔女人的私密视频| 91麻豆av在线| 精品人妻在线不人妻| 青青草视频在线视频观看| 国产精品.久久久| 中文字幕高清在线视频| 永久免费av网站大全| 亚洲成人免费电影在线观看| 女警被强在线播放| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产伦理片在线播放av一区| 黄色a级毛片大全视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久毛片免费看一区二区三区| 人人澡人人妻人| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲一区中文字幕在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲成人免费av在线播放| 99热网站在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| bbb黄色大片| 热re99久久精品国产66热6| 欧美日韩成人在线一区二区| av免费在线观看网站| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久国产欧美日韩av| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产免费福利视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 视频区欧美日本亚洲| 日本av手机在线免费观看| 宅男免费午夜| 搡老乐熟女国产| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 真人做人爱边吃奶动态| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产黄色免费在线视频| 下体分泌物呈黄色| 免费观看av网站的网址| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲人成77777在线视频| 窝窝影院91人妻| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国精品久久久久久国模美| 亚洲精品美女久久av网站| 91老司机精品| 亚洲国产日韩一区二区| 国精品久久久久久国模美| 女性生殖器流出的白浆| 窝窝影院91人妻| 岛国毛片在线播放| 丁香六月欧美| 99精品欧美一区二区三区四区| 人人澡人人妻人| 欧美日本中文国产一区发布| 精品国内亚洲2022精品成人 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲国产av新网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一本大道久久a久久精品| 亚洲人成77777在线视频| 99久久综合免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲中文日韩欧美视频| 视频区欧美日本亚洲| 国产免费视频播放在线视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久欧美国产精品| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲国产看品久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久亚洲精品不卡| √禁漫天堂资源中文www| av视频免费观看在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美午夜高清在线| 91大片在线观看| 亚洲,欧美精品.| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美日本中文国产一区发布| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线观看人妻少妇| 色视频在线一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久久久久大尺度免费视频| av网站在线播放免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产国语露脸激情在线看| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲av成人一区二区三| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲精品第二区| 亚洲欧美精品自产自拍| tocl精华| 91字幕亚洲| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 丝瓜视频免费看黄片| 成人国语在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美在线黄色| 91大片在线观看| 岛国毛片在线播放| 无限看片的www在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 一级a爱视频在线免费观看| 成年人黄色毛片网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产在线一区二区三区精| 精品久久久久久电影网| 99国产极品粉嫩在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 51午夜福利影视在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 男女国产视频网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品国内亚洲2022精品成人 | 我的亚洲天堂| 日韩三级视频一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 五月天丁香电影| 青草久久国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 色播在线永久视频| 两性夫妻黄色片| 一区福利在线观看| 91九色精品人成在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 人妻 亚洲 视频| 一区二区三区乱码不卡18| 69精品国产乱码久久久| 在线永久观看黄色视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 老司机影院成人| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久av网站| 9热在线视频观看99| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲久久久国产精品| 水蜜桃什么品种好| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产一区二区激情短视频 | 老司机午夜十八禁免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| www日本在线高清视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 99re6热这里在线精品视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产麻豆69| 久久久久精品人妻al黑| av免费在线观看网站|