PAF與腫瘤壞死因子-α及肺表面活性蛋白A在新生兒急性肺損傷中的表達(dá)及相關(guān)性*

王嘉興 袁二偉 王瑞娟 趙美林 張艷君

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院新生兒科，河北 張家口 075000)

新生兒急性肺損傷是指機(jī)體因?yàn)閲?yán)重的疾病導(dǎo)致肺泡毛細(xì)血管膜損傷，引發(fā)肺水腫、肺不張，患兒的主要臨床表現(xiàn)為起病急，呼吸窘迫，嚴(yán)重的低氧血癥[1]。也有研究指出，各種危重病均會(huì)損傷新生兒肺組織，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)，新生兒急性肺損傷發(fā)生[2]。新生兒急性肺損傷重點(diǎn)在于早期治療，肺組織病理學(xué)檢查雖然準(zhǔn)確，但是難以在臨床重視實(shí)現(xiàn)，因此尋找有效的診斷方式對新生兒來說具有重要意義。當(dāng)炎性介質(zhì)釋放過度，也會(huì)引發(fā)新生兒急性肺損傷發(fā)生，肺瘤壞死因子-α(TNF-α)參與組織炎癥損傷過程，對其他炎癥因子有促進(jìn)釋放的作用[3-4]。血小板活化因子(PAF)也參與新生兒急性肺損傷過程。肺表面活性蛋白A(SP-A)主要存在與肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、細(xì)支氣管非纖毛上皮細(xì)胞中，表達(dá)較強(qiáng)，信號也較為豐富，常作為肺部疾病的監(jiān)測指標(biāo)[5]。本文探討PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中的表達(dá)及相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2018年9月～2019年9月在我院就診的急性肺損傷新生兒70例設(shè)為急性肺損傷組，選取同一時(shí)期在我院就診的肺炎新生兒50例設(shè)為肺炎組，另外選取在我院健康體檢的新生兒50例設(shè)為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒均符合急性肺損傷的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：①起病急，患兒表現(xiàn)為呼吸急促、窘迫。②伴有低氧血癥、PaO2/FiO2值<300 mmHg。③經(jīng)X線胸片檢查發(fā)現(xiàn)患兒兩肺有彌漫性浸潤影。④患兒肺動(dòng)脈楔壓≤18 mmHg。所有患兒入院時(shí)間為24～48h。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天性肺功能不全患兒。②合并肝、腎、心等重要臟器功能損傷患兒。③病歷資料不全患兒。本研究所有患兒家屬均知情并簽署知情通知書。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 抽取所有研究對象入院當(dāng)天的空腹靜脈血液3 mL，以3000 r/min離心速度，離心處理10 min后，分離上層血清，在-80 ℃環(huán)境中保存，待檢。

1.2.2 PAF、TNF-α檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測PAF、TNF-α水平，具體操作：①將待檢標(biāo)本使用0.05 mol/L PH為9.6的NaCO3-NaHCO3緩沖液稀釋，加入酶聯(lián)板孔中，每孔加入100 μL稀釋液，在4 ℃過夜保存。②使用PBST洗滌液清洗3次，每次3 min。③每孔中加入5%的小牛血清PBST 200 μL，在37 ℃封閉處理30 min。④使用PBS洗滌液清洗3次，每次3 min。⑤每孔中加入5%的小牛血清PBST稀釋后的酶標(biāo)單克隆抗體100 μL，37 ℃孵育1 h。⑥使用PBST洗滌液清洗3次，每次3 min。⑦每孔中加入100 μL由(20 mg的鄰苯二胺，24.3 mL 0.1 mol/L的檸檬酸，25.7 mL 0.2 mol/L的Na2HPO4，75 μL 30%的H2O2)配制的底物溶液，37 ℃處理30 min。⑧每孔中滴加2 mol/L的H2SO4給予反應(yīng)終止。觀察結(jié)果。

1.2.3 SP-A檢測 SP-A檢測采用免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行，具體操作：將0.01 M PBS PH為7.4的稀釋抗原液取2 μL，滴入硝酸纖維素膜中，在37 ℃的溫箱中連續(xù)干燥20～30 min，之后滴加封閉液，繼續(xù)在37 ℃的溫箱中干燥10 min，使用洗滌液清洗1～2次，濾紙吸干，滴加待檢的標(biāo)本，在37 ℃的濕盒中干預(yù)30 min，使用洗滌液進(jìn)行震蕩沖洗3次，每次3 min，之后吸干水分，水洗終止反應(yīng)，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象一般資料比較 3組研究對象性別、平均胎齡、自然分娩/剖宮產(chǎn)、平均體重等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組研究對象一般資料比較Table 1 Comparison of general data of each group

2.2 PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中的表達(dá) 肺炎組和急性肺損傷組PAF、TNF-α表達(dá)水平高于對照組，SP-A水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性肺損傷組PAF、TNF-α表達(dá)水平高于肺炎組，SP-A水平低于肺炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組PAF、TNF-α、SP-A表達(dá)比較Table 2 Comparison of PAF,TNF -α and SP-A expression in each group

2.3 不同時(shí)期患兒PAF、TNF-α、SP-A表達(dá)比較 急性期PAF、TNF-α表達(dá)水平高于恢復(fù)期，SP-A水平低于恢復(fù)期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 不同時(shí)期患兒PAF、TNF-α、SP-A表達(dá)比較Table 3 Comparison of PAF,TNF -α and SP-A expression in children of different periods

2.4 存活組和死亡組PAF、TNF-α、SP-A表達(dá)比較 死亡組PAF、TNF-α表達(dá)高于存活組，SP-A水平低于存活組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 存活組和死亡組PAF、TNF-α、SP-A表達(dá)比較Table 4 Comparison of expression of PAF,TNF -α and SP-A in survival and death groups

2.5 PAF、TNF-α、SP-A相關(guān)性分析 經(jīng)過Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PAF、TNF-α之間呈正相關(guān)(r=0.485,P=0.001)；TNF-α、SP-A之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.358,P=0.002)；PAF、SP-A之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.245,P=0.041)，見圖1。

圖1 PAF、TNF-α、SP-A相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of PAF,TNF -α and SP-A

3 討論

新生兒急性肺損傷發(fā)生時(shí)，肺部炎癥表現(xiàn)為瀑布反應(yīng)，呼吸膜結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷，增加呼吸膜對液體、溶質(zhì)的通透性，引發(fā)肺水腫[7]。新生兒急性肺損傷屬于新生兒急重癥，引起患兒肺功能出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致新生兒死亡。引起新生兒急性肺損傷發(fā)病的因素有很多，主要有機(jī)體創(chuàng)傷、酸中毒、休克、感染等，嚴(yán)重的新生兒急性肺損傷會(huì)發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合征[8-9]。相關(guān)研究[10]顯示，缺氧的嚴(yán)重程度、器官功能衰竭等均會(huì)導(dǎo)致新生兒急性肺損發(fā)病率上升。

PAF屬于一種磷脂介質(zhì)，具有內(nèi)源性及廣泛的生物活性，相關(guān)研究顯示，PAF能促進(jìn)核因子κB活化，中性粒細(xì)胞也因此在肺組織中集聚，造成肺組織損傷，在成人急性肺損傷疾病中，PAF顯示高水平[11-12]。在動(dòng)物研究中，PAF抑制劑通過調(diào)控PAF水平，抑制急性肺損傷發(fā)展，并且降低PAF活化，能起到抗炎性作用[13]。本研究肺炎組和急性肺損傷組PAF表達(dá)水平高于對照組，其中急性肺損傷組PAF表達(dá)水平最高。說明PAF在急性肺損傷中顯示高水平，參與其疾病發(fā)展。TNF-α由多種單核吞噬細(xì)胞分泌、產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，并且對其他的炎性介質(zhì)有誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)功能。TNF-α水平升高對血管內(nèi)皮損傷起到直接作用，通過對中性粒細(xì)胞進(jìn)行刺激，釋放脫顆粒以及溶酶體酶，促進(jìn)細(xì)胞因子合成、釋放，對血管活性物質(zhì)的形成產(chǎn)生影響[14-15]。本研究結(jié)果顯示在新生兒急性肺損傷中TNF-α水平較高，可能參與其疾病發(fā)生。分析原因是，TNF-α水平升高，刺激內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞發(fā)生黏附，釋放PAF、蛋白酶等大量的毒性介質(zhì)；同時(shí)刺激單核巨噬細(xì)胞，促進(jìn)IL-8、IL-1等因子釋放，對肺組織帶來損傷[16]。SP-A是一種表面活性物質(zhì)的特異性蛋白，具有復(fù)雜的功能和生物學(xué)特性，在新生兒急性肺損傷以及急性呼吸窘迫綜合征研究中，SP-A可以作為兩種疾病早期診斷指標(biāo)[17]。研究認(rèn)為，新生兒急性肺損傷中SP-A通過被損傷的肺泡-毛細(xì)血管膜進(jìn)入到血液中，導(dǎo)致血液中SP-A含量增加，與肺損傷病情嚴(yán)重程度有關(guān)，通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測SP-A表達(dá)水平，對疾病的判斷以及預(yù)后具有重要作用[18-19]。本文肺炎組和急性肺損傷組SP-A水平低于對照組，急性肺損傷組SP-A水平低于肺炎組，說明SP-A可以作為診斷新生兒急性肺損傷的有效指標(biāo)。

急性期PAF、TNF-α表達(dá)水平高于恢復(fù)期，SP-A水平低于恢復(fù)期；死亡組PAF、TNF-α表達(dá)水平高于存活組，SP-A水平低于存活組。分析原因：SP-A蛋白為雙向流動(dòng)，在新生兒急性肺損傷中，流入到肺泡腔中的血漿蛋白會(huì)將白細(xì)胞激活，促進(jìn)白細(xì)胞介素、TNF-α、蛋白酶等釋放，對肺泡-毛細(xì)血管膜產(chǎn)生損傷，增加滲透性，從而引發(fā)疾病發(fā)生[20]。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PAF、TNF-α、SP-A之間呈相關(guān)性，其中一種水平發(fā)生變化均會(huì)對其他兩者產(chǎn)生影響，PAF、TNF-α、SP-A參與新生兒急性肺損傷發(fā)病，可以作為新生兒急性肺損傷的診斷指標(biāo)，反應(yīng)患兒病情。

4 結(jié)論

PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中表達(dá)異常，三者水平與新生兒急性肺損傷不同患病程度、存活情況有關(guān)，三者之間有一定的相關(guān)性，參與新生兒急性肺損傷的發(fā)生，具有重要臨床意義。