鄭州地區(qū)11299例急性呼吸道感染兒童病原體檢查結(jié)果分析

郭鵬波 王彥紅 章波 張小慢

急性呼吸道感染是全世界嬰幼兒發(fā)病和死亡的重要病因，約有30%的病例是由病毒引起[1]。在我國(guó)兒科門(mén)診中，急性呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病占大部分[2]。此外，肺炎支原體感染和肺炎衣原體感染在臨床表現(xiàn)上與病毒感染相似，均可導(dǎo)致發(fā)熱、咳嗽、乏力、頭痛、打噴嚏、流鼻涕等臨床癥狀，臨床醫(yī)生很難鑒別，因其病原體的特殊性，治療上與病毒存在很大不同，不予區(qū)分的治療就會(huì)耽誤病情。因此，明確鑒別病原體具有重要意義，可以協(xié)助醫(yī)生選擇特異性藥物，提高治療的針對(duì)性和時(shí)效性。呼吸道病原體的流行有一定的地域、季節(jié)、年齡分布特點(diǎn)。本研究還可以幫助相關(guān)人員了解鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體流行情況，為臨床診治和疾病預(yù)防控制提供參考。

資料與方法

一、研究對(duì)象

2019年3月-2020年2月鄭州兒童醫(yī)院急性呼吸道感染住院患兒共11299 例，其中男孩6638例，女孩4661例，0～3(不含)歲6306例，3～6歲3231例，6歲以上1762例。急性呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《諸福堂實(shí)用兒科學(xué)(第8版)》[3]。

二、標(biāo)本采集與檢測(cè)

采集患兒咽部分泌物、痰液或肺泡灌洗液，置于VTM運(yùn)送培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)內(nèi)，立即送到實(shí)驗(yàn)室，4℃保存，并于兩天內(nèi)檢測(cè)。采用臺(tái)灣圓點(diǎn)公司的TANBead核酸提取試劑盒提取總核酸，基于毛細(xì)管電泳的多重PCR法檢測(cè)12種呼吸道病原體，包括甲型流感病毒H1N1(以下簡(jiǎn)稱H1N1)、甲型流感病毒H3N2(以下簡(jiǎn)稱H3N2)、乙型流感病毒(InfB)、腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HPIV)、肺炎衣原體(Ch)、偏肺病毒(HMPV)、肺炎支原體(MP)、冠狀病毒(HCOV)和呼吸道合胞病毒(HRSV)。該試劑盒購(gòu)自寧波海爾施基因科技有限公司，具體操作按照試劑盒操作要求。

三、統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分率(% ) 表示，兩組間差異比較采用卡方檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、核酸檢測(cè)結(jié)果

鄭州兒童醫(yī)院急性呼吸道感染住院患兒標(biāo)本11299份，檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性8742例，總體陽(yáng)性率為77.37%[95%Cl：(0.7660,0.7814)]，其中，單純感染6943例(79.42%)，混合感染1799例(20.58%)。陽(yáng)性標(biāo)本中HRV陽(yáng)性的標(biāo)本最多，2859份，陽(yáng)性率25.3%；其次為MP，2047份，陽(yáng)性率18.12%；其他依次為HRSV，15.78%(1783/11299)；H3N2，9.05%(1023/11299)；HADV，8.66%(978/11299)；HPIV，7.22%(816/11299)；InfB，3.27%(370/11299)；HMPV，3.27%(369/11299)；Boca，2.02%(228/11299)；HCOV，1.95%(220/11299)；Ch，0.41%(46/11299)；H1N1，0.11%(13/11299)。陽(yáng)性標(biāo)本的病原體構(gòu)成百分比(見(jiàn)圖1)所示。

圖1 陽(yáng)性標(biāo)本的病原體構(gòu)成百分比

二、不同性別患兒病原體檢出情況

僅HRV和MP的陽(yáng)性檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他的病原體陽(yáng)性檢出率無(wú)明顯差異(見(jiàn)表1)。

表1 鄭州地區(qū)不同性別患兒病原體檢查陽(yáng)性例數(shù)[n(%)]

三、不同年齡段患兒的病原體檢出情況

依據(jù)就學(xué)階段，將急性呼吸道感染患兒分為三組，0～3(不含)歲組、3～6歲組、大于6歲組。0～3(不含)歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。0～3(不含)歲組患兒HRSV陽(yáng)性檢出率明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=565.9，P<0.05)。3～6歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6歲組患兒病原體檢出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。大于6歲組MP陽(yáng)性檢出率明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1105.5，P<0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 鄭州地區(qū)不同年齡段兒童的陽(yáng)性例數(shù)[n(%)]

四、12種病原體的感染時(shí)間分布

H3N2、HRSV全年散發(fā)，冬季為高發(fā)季節(jié)。MP主要在秋季高發(fā)。HADV、HPIV、HRV、HCOV全年都有發(fā)生，夏季檢出率明顯高于其他季節(jié)。InfB全年可有發(fā)生，高發(fā)季節(jié)為冬春季。HMPV、Ch、H1N1、Boca全年散發(fā)，無(wú)明顯季節(jié)性差異。(見(jiàn)圖2)。

圖2 陽(yáng)性檢出率時(shí)間分布圖

討 論

本研究以引發(fā)兒童急性呼吸道感染的12種呼吸道病原體為檢測(cè)對(duì)象，以病原體中的高度保守序列為靶區(qū)域，同時(shí)加入多種引物進(jìn)行RNA/DNA擴(kuò)增；采用毛細(xì)管電泳方法對(duì)不同片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離，得到檢測(cè)結(jié)果；同時(shí)檢測(cè)樣品中的人RNA和人DNA作為內(nèi)參，可以在試驗(yàn)中檢測(cè)標(biāo)本質(zhì)量，保證檢測(cè)結(jié)果的有效性；本檢測(cè)含逆轉(zhuǎn)錄PCR內(nèi)參，用于核酸提取、擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳等所有試驗(yàn)流程，可以對(duì)整個(gè)流程進(jìn)行監(jiān)控，便于查找檢測(cè)失敗的原因。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)短、機(jī)械化程度高，4 h之內(nèi)就可以完成 8個(gè)樣本的檢測(cè)，人為操作時(shí)間不超過(guò)半小時(shí)。

不同地區(qū)急性呼吸道感染兒童非細(xì)菌性病原體總陽(yáng)性率有一定差異。鄭州地區(qū)2019年3月-2020年2月急性呼吸道感染住院兒童非細(xì)菌性病原體總陽(yáng)性率為77.37%，高于長(zhǎng)春地區(qū)2017年1月-2018年2月的總陽(yáng)性率62.82%[4]。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心的監(jiān)測(cè)資料顯示大陸的流感流行模式主要有兩種，南方地區(qū)主要在夏季流行，北方地區(qū)則在冬季流行[5]，本研究顯示，H3N2在2019年12月-2020年1月呈現(xiàn)爆發(fā)態(tài)勢(shì)，檢測(cè)結(jié)果的季節(jié)分布特點(diǎn)與北京地區(qū)報(bào)道一致[6]。Zhang等[7]報(bào)道在全球溫帶地區(qū)，HRSV在寒冷干燥的環(huán)境中致病性最強(qiáng)。 我們的研究中，HRSV在鄭州地區(qū)的陽(yáng)性率在2019年12月到來(lái)年1月達(dá)到高峰，與Zhang等[7]、謝菲等[8]報(bào)道一致。 兒童HADV感染有明顯的時(shí)間分布特點(diǎn)，北方地區(qū)冬春季節(jié)發(fā)病率高，而南方以春夏季高發(fā)[9-11]，本研究顯示HADV全年可發(fā)，夏季的陽(yáng)性率稍微高于其他季節(jié)，考慮鄭州地處南北方交界處，急性呼吸道感染患兒可來(lái)自于南方和北方地區(qū)，所以HADV全年都有發(fā)生，季節(jié)差異相對(duì)不明顯。HRV在急性呼吸道感染患兒中陽(yáng)性率較高，是常見(jiàn)的呼吸道病原體，本研究中HRV的陽(yáng)性率與流行情況和成都地區(qū)大致相同[12],總體陽(yáng)性率25.3%,每年夏季高發(fā)，但是鄭州的高發(fā)季稍微提前，可能與鄭州地區(qū)7月平均氣溫較高有關(guān)。HCOV的陽(yáng)性率比劉軍等[13]報(bào)道的稍低，具體原因有待探討。HMPV、Ch、Boca、H1N1全年散發(fā)，陽(yáng)性率與季節(jié)因素關(guān)系不大。

鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體陽(yáng)性率與性別的相關(guān)性總體上不明顯，僅HRV和MP的陽(yáng)性率在不同性別的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與蔣華芳等[14]報(bào)道的有所不同，具體原因有待探討。

此外，鄭州地區(qū)急性呼吸道感染患兒病原體流行情況與年齡有關(guān)。0～3(不含)歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。3～6歲組患兒病原體檢出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6歲組患兒病原體檢出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。H3N2在3～6歲患兒和大于6歲患兒中檢出率較高，考慮與外界接觸機(jī)會(huì)增多，增加感染機(jī)會(huì)有關(guān)。 MP主要通過(guò)飛沫傳播，還可通過(guò)接觸傳播，全年可發(fā)，夏末秋初為高發(fā)季，患兒以6～15歲兒童居多。本研究中MP的檢出率隨著年齡增長(zhǎng)呈現(xiàn)增高趨勢(shì)，主要感染6歲以上兒童，與瑞典報(bào)道一致[15]。HADV在3～6歲組患兒中檢出率最高，既與北京地區(qū)的報(bào)道[16]不同，也與蘇州地區(qū)[10]不同。HMPV、Boca、HCOV的檢出率大體上與患兒年齡呈負(fù)相關(guān)，隨著年齡增長(zhǎng)，感染率呈下降趨勢(shì)。可能是由于低齡兒童免疫功能尚未發(fā)育完善，免疫力較低，而隨著年齡增長(zhǎng)，免疫功能逐漸發(fā)育完善，免疫力提高，抵御病原體的能力增強(qiáng)。Ch、H1N1的檢出率與患兒年齡的關(guān)系不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

鄭州地區(qū)急性呼吸道感染兒童最常見(jiàn)的病原體是HRV，12種呼吸道病原體的陽(yáng)性率隨月份變化呈現(xiàn)不同的特點(diǎn)；甲型流感病毒H1N1型和肺炎衣原體(Ch)的陽(yáng)性率與兒童年齡無(wú)關(guān)，其他病原體的陽(yáng)性率與兒童年齡相關(guān)。急性呼吸道感染在兒童中發(fā)病率高，并且可重復(fù)感染，分析鄭州地區(qū)急性呼吸道感染兒童的病原體流行情況對(duì)臨床診療有重要意義，可以幫助臨床醫(yī)生有針對(duì)性的采取預(yù)防措施、減少檢查項(xiàng)目、開(kāi)具特異性的抗生素，提高診療效果，縮短診療時(shí)間。

本研究尚有不足之處：第一，缺乏急性呼吸道感染住院兒童細(xì)菌感染的分析數(shù)據(jù)；第二，所有標(biāo)本來(lái)自同一醫(yī)院，未能理想的反應(yīng)鄭州地區(qū)急性呼吸道感染住院兒童的病原體流行情況。