IGF-I EGFR在子宮組織的表達(dá)及與肌瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系

顏紅麗，鄭麗華，白昌民，邵美麗

(西北婦女兒童醫(yī)院/陜西省婦幼保健院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

子宮肌瘤為常見(jiàn)婦科生殖系統(tǒng)良性腫瘤，其主要是因子宮平滑肌細(xì)胞增生引起，故稱(chēng)為子宮平滑肌瘤較為確切，簡(jiǎn)稱(chēng)子宮肌瘤[1]。對(duì)于希望保留生育功能的子宮肌瘤患者而言，子宮肌瘤剔除術(shù)具有傷口美觀、術(shù)后恢復(fù)快、微創(chuàng)、安全等優(yōu)勢(shì)，但其術(shù)后復(fù)發(fā)率較高[2]。近年研究顯示，雌激素介導(dǎo)的促有絲分裂活動(dòng)對(duì)子宮肌瘤發(fā)生、進(jìn)展具有重要作用，而這種作用是通過(guò)如胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(Insulin like growth factor-I,IGF-I)、表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)等生長(zhǎng)因子來(lái)實(shí)現(xiàn)[3]。但關(guān)于IGF-I、EGFR在子宮肌瘤復(fù)發(fā)中的作用尚不明確[4]?；诖耍狙芯炕仡櫺苑治隽俗訉m肌瘤復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)患者子宮不同組織中的IGF-I、EGFR表達(dá)情況，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料:選擇2018年1月至2018年12月于醫(yī)院行子宮肌瘤剔除術(shù)的子宮肌瘤患者為研究對(duì)象，實(shí)際入組875例，按照1：7比例隨機(jī)抽取，最終納入125例患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合子宮肌瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)術(shù)后病理活檢、宮腔鏡、超聲檢查等確診者；②希望保留生育能力，且符合子宮肌瘤剔除術(shù)指征者；③年齡為26～40歲者；④患者及其家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他婦科惡性腫瘤者；②合并心、肝、肺、腎等器官?lài)?yán)重功能障礙者；③術(shù)前3個(gè)月激素類(lèi)藥物使用史者；④合并甲狀腺功能異常、糖尿病等影響內(nèi)分泌代謝疾病者；⑤不符合子宮肌瘤剔除術(shù)指征者；⑥術(shù)后拒絕隨訪者；⑦妊娠、哺乳期者。

1.2方 法

1.2.1手術(shù)方法:術(shù)前常規(guī)消毒鋪巾，靜脈全麻，囑患者取膀胱截石位。行氣腹針穿刺，輸入二氧化碳(CO2)，構(gòu)建人工氣腹，保持腹內(nèi)壓在12～14mmHg范圍內(nèi)，穿刺部位選擇為臍左旁、右下腹、左下腹、臍輪上緣等處，放置手術(shù)器械及腹腔鏡；在肌壁和肌瘤交匯處注入用生理鹽水稀釋過(guò)的垂體后葉素，在周?chē)M織變白后，縱向切開(kāi)子宮肌瘤最明顯突出處，并依次將子宮漿膜、子宮肌層、肌瘤假包膜切開(kāi)，暴露肌瘤表面，牽引肌瘤，沿假包膜剝離、剔除子宮肌瘤，然后放置旋切器，將肌瘤粉碎并從套管內(nèi)取出；最后用可吸收線連續(xù)或間斷逐層縫合創(chuàng)口。

1.2.2檢測(cè)方法:①標(biāo)本采集及處理：術(shù)中留取部分子宮肌瘤中心處肌瘤組織、子宮肌層(距肌瘤包膜外>5cm)及肌瘤旁組織(距肌瘤包膜外1cm)各1份，標(biāo)本大小均為1×1×0.2cm3，使用10%甲醛液進(jìn)行固定，再石蠟包埋，切4μm厚切片待檢。②IGF-I、EGFR表達(dá)檢測(cè)：采用免疫組化SABC法檢測(cè)3種標(biāo)本中的IGF-I、EGFR表達(dá)情況，主要試劑為兔抗人IGF-I多克隆抗體(試劑1)、兔抗人EGFR單克隆抗體(試劑2)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。具體檢測(cè)方法見(jiàn)表1。③結(jié)果判定：以已知IGF-I、EGFR陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。①I(mǎi)GF-I：高倍鏡下(×400)，隨機(jī)選取5個(gè)視野，觀察切片顯色情況，細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒為IGF-I陽(yáng)性表現(xiàn)。最終結(jié)果采用陽(yáng)性細(xì)胞百分比與陽(yáng)性細(xì)胞染色深度計(jì)分總和判定：陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分：細(xì)胞著色≤5%計(jì)0分、細(xì)胞著色≤25%計(jì)1分、細(xì)胞著色≤50%計(jì)2分、細(xì)胞著色≤75%計(jì)3分、細(xì)胞著色>75%計(jì)4分。陽(yáng)性細(xì)胞染色深度：未見(jiàn)染色計(jì)0分、輕度染色計(jì)1分、中度染色計(jì)2分、深度染色計(jì)3分?？偡?～2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。②EGFR：高倍鏡下(×400)，隨機(jī)選取5個(gè)視野，觀察切片顯色情況，細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜內(nèi)有棕黃色顆粒為EGFR陽(yáng)性表現(xiàn)。根據(jù)著色癌細(xì)胞占總細(xì)胞百分?jǐn)?shù)判定EGFR表達(dá)強(qiáng)度，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞≤5%；弱陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞占6%～30%；中等陽(yáng)性(++)：陽(yáng)性細(xì)胞占31%～60%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：陽(yáng)性細(xì)胞>60%。

1.3免疫組化SABC法操作過(guò)程:1.將切片放入二甲苯溶液中脫蠟、水化；2.用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗，2次，5min/次；3.用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10min，蒸餾水洗3次；4.放入乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液中，抗原高壓熱修復(fù)；5.PBS沖洗5min；6.滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min。甩去多余液體；7.滴加(試劑1/試劑2)，室溫1h或者4℃過(guò)夜或者37℃1h(4℃過(guò)夜后在37℃復(fù)溫45min)；8.PBS沖洗，3次，2min/次；9.滴加生物素化二抗，20℃～37℃20min；10.PBS沖洗，3次，2min/次；11.滴加試劑SABC(鏈霉卵白素+辣根酶標(biāo)記生物素)，20℃～37℃20min；12.PBS沖洗，4次，5min/次；13.DAB(二氨基聯(lián)苯胺)顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)；14.蒸餾水洗。蘇木素復(fù)染2min、鹽酸酒精分化；15.脫水、透明、封片、鏡檢。

1.4觀察指標(biāo):術(shù)后隨訪1年，根據(jù)肌瘤是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組(37例)和未復(fù)發(fā)組(88例)。收集兩組患者的臨床資料(年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發(fā)病情況、疾病類(lèi)型(依據(jù)肌瘤與子宮壁的關(guān)系分類(lèi))、文化程度、典型癥狀)，并行回顧性分析。分析并比較兩組患者3種子宮組織(肌瘤組織、子宮肌層及肌瘤旁組織)中的IGF-I、EGFR表達(dá)情況。肌瘤復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn)[5]：術(shù)后3個(gè)月未檢出新發(fā)肌瘤，但術(shù)后6個(gè)月后經(jīng)婦科檢查、盆腔超聲等手段檢出新發(fā)肌瘤，且直徑超過(guò)5cm。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者臨床資料比較:兩組患者的年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發(fā)病情況、疾病類(lèi)型、文化程度、典型癥狀等臨床資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

2.2兩組患者不同子宮組織中的IGF-I、EGFR表達(dá)情況比較:IGF-I、EGFR在不同子宮組織中的表達(dá)情況比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)發(fā)組患者肌瘤組織、瘤旁組織、肌層組織中的IGF-I、EGFR表達(dá)情況均高于未復(fù)發(fā)組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2、表3。

表2 兩組患者不同子宮組織中的IGF-I陽(yáng)性表達(dá)情況比較n(%)

表3 兩組患者不同子宮組織中的EGFR表達(dá)情況比較

3 討 論

子宮肌瘤系一類(lèi)常見(jiàn)激素依賴(lài)性婦科良性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[6]。目前，尚未完全探明子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制，推測(cè)其可能主要與雌性激素、生長(zhǎng)因子有關(guān)。研究顯示，在應(yīng)用抗孕激素藥物米非司酮及選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑三苯氧胺治療患者中，雖可獲得不錯(cuò)療效，但無(wú)法徹底治愈[7]。提示除性激素外，還有其他因素參與了子宮肌瘤的發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程[8]。

胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(IGF-I)系一類(lèi)多肽類(lèi)促有絲分裂原，對(duì)機(jī)體各類(lèi)組織細(xì)胞的增殖、分類(lèi)、凋亡抑制等具有刺激作用，且在多種生理、病理調(diào)節(jié)過(guò)程中扮演重要角色。宋瑜[9]報(bào)道顯示，IGF-I在多種腫瘤中表達(dá)增高，但在正常組織中低表達(dá)甚至不表達(dá)，表明IGF-I在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖中發(fā)揮作用。鄒曉嵐等[10]研究稱(chēng)，子宮肌瘤患者肌瘤組織中的IGF-I表達(dá)水平遠(yuǎn)高于瘤旁組織及肌層組織。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者肌瘤組織中的IGF-I表達(dá)水平均明顯高于瘤旁組織及正常肌層組織，與大多數(shù)研究結(jié)果一致。分析原因?yàn)椋杭×鲋械母弑磉_(dá)IGF-I與其受體(IGF-IR)結(jié)合，并通過(guò)酪氨酸激酶及β亞單位跨膜區(qū)，催化位于β亞單位內(nèi)的磷酸化位點(diǎn)，啟動(dòng)有絲分裂原激活蛋白激酶及磷脂酰肌醇-3激酶激活途徑等2條信號(hào)傳遞鏈，將代謝與有絲分裂信號(hào)傳遞至細(xì)胞核中，誘導(dǎo)肌瘤細(xì)胞有絲分裂并增殖，因而IGF-I表達(dá)強(qiáng)度呈向周?chē)f減態(tài)勢(shì)。

EGFR為1186個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成單鏈跨膜蛋白，特異性結(jié)合其細(xì)胞外配基(EGF)后參與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，EGFR所介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被證實(shí)與肌瘤細(xì)胞增殖有關(guān)。文獻(xiàn)提出[11]，子宮肌瘤為單克隆良性腫瘤，由肌瘤母細(xì)胞增殖、分裂產(chǎn)生，其發(fā)生與EFGR高表達(dá)密切相關(guān)。趙欣等[12]表示，EGFR在肌瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較瘤旁組織及正常肌層組織更高，說(shuō)明EGFR表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)在肌瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中起到關(guān)鍵作用，推測(cè)其為子宮肌瘤細(xì)胞持續(xù)增殖重要因素。本研究結(jié)果顯示，兩組患者肌瘤組織中的EGFR表達(dá)水平顯著高于瘤旁組織及正常肌層組織。推測(cè)此結(jié)果與EGFR與其特異性配基EGF結(jié)合引發(fā)細(xì)胞增殖、分化并惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。

陳霞等[13]研究結(jié)果表明，子宮肌瘤患者行子宮剔除術(shù)后的復(fù)發(fā)率達(dá)33.3%，說(shuō)明子宮肌瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。因此，有必要對(duì)子宮肌瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)原因進(jìn)行分析。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后隨訪1年的125例子宮肌瘤患者中，37例出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況，復(fù)發(fā)率達(dá)29.6%。復(fù)發(fā)組患者不同子宮組織內(nèi)的IGF-I表達(dá)情況均高于未復(fù)發(fā)組患者，結(jié)果顯示IGF-I高表達(dá)可能促進(jìn)了子宮肌瘤術(shù)后復(fù)發(fā)。此外，EGFR在復(fù)發(fā)組患者不同子宮組織內(nèi)的表達(dá)亦高于未復(fù)發(fā)組患者，提示EGFR可能為子宮肌瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的潛在推動(dòng)因子。究其原因?yàn)楦弑磉_(dá)IGF-I、EGFR會(huì)與其特異性受體結(jié)合，從而促進(jìn)肌瘤組織周?chē)M織不斷增殖分裂，最終導(dǎo)致肌瘤復(fù)發(fā)，提高術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，IGF-I、EGFR在子宮肌瘤患者肌瘤組織中的表達(dá)水平高于瘤旁組織及肌層組織，且IGF-I、EGFR的表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)可能為肌瘤復(fù)發(fā)的潛在因素之一。