IL-8基因多態(tài)性對α-2b干擾素治療毛細支氣管炎療效的影響

徐 杰，吳建祥，陳 偉，吳嘉晟，芮 強

0 引言

毛細支氣管炎是嬰幼兒時期高發(fā)的呼吸系統(tǒng)疾病，研究發(fā)現(xiàn)[1]，呼吸道合胞病毒誘發(fā)的毛細支氣管炎患兒血清白細胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)水平異常升高，且其可促進中性粒細胞在呼吸道黏膜聚集，激活中性粒細胞釋放溶酶體酶及超氧化物酶，誘發(fā)炎性反應。研究顯示，機體IL-8水平由IL-8基因決定，且IL-8基因變異與疾病的發(fā)生、治療效果有關[2]。部分多態(tài)性位點基因型可通過調(diào)控基因表達影響疾病發(fā)生與進展[3]，由此可推測呼吸道合胞病毒誘發(fā)的毛細支氣管炎的發(fā)展和治療效果可能也與IL-8基因部分多態(tài)性位點基因型有關。本研究以136例毛細支氣管炎患兒為例，探討IL-8基因多態(tài)性對α-2b干擾素治療效果的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2018年6月至2020年6月收治的136例毛細支氣管炎患兒作為研究對象，男72例、女64例;年齡1～3歲，平均(1.76±0.29)歲;病程1～4 d，平均(2.85±0.68)d。納入標準：符合《實用兒科學》[4]中毛細支氣管炎診斷標準；發(fā)病至就診時間≤96 h；既往無哮喘病史；患兒監(jiān)護人簽署知情同意書。

排除標準：入組前有相關藥物治療史者；伴血液和免疫系統(tǒng)疾病者；伴先天肺疾病者；伴嚴重肝腎疾病、全身感染者；伴心臟病、腫瘤者；對治療藥物過敏者；治療依從性差者；治療期間使用其他抗病毒藥物者；早產(chǎn)兒。

在本院同期進行健康體檢的健康兒童中隨機抽取136例作為對照，男76例、女60例;年齡1～3歲，平均(1.85±0.36)歲。近2周內(nèi)無上呼吸道感染史和喘息史。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 病例組患兒均給予止咳、祛痰、平喘、抗感染、抗病毒等常規(guī)治療，采用0.5 mg布地奈德混懸液(瑞典阿斯利康制藥，規(guī)格2 ml∶1 mg)、0.1 ml異丙托溴銨溶液(法國Laboratoire Unither，規(guī)格：250 μg∶2 ml)進行霧化治療，2次/d;同時霧化吸入1.2 ml重組人干擾素α-2b
注射液(北京凱因科技，規(guī)格：3 mIU/0.3 ml)，2次/d，治療時間7 d。

1.2.2 IL-8基因多態(tài)性檢測 采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)測定IL-8基因多態(tài)性位點基因型：入院后采集患兒1 ml外周靜脈血，抗凝后用基因組DNA提取試劑盒(美國Promega)提取白細胞基因組DNA，操作方法按試劑盒要求進行。-251A/T啟動子PCR反應條件：正向引物：TGATTGGCTGGCTTATCTTCA;反向引物：GAGGAAATTCCACGATTTGC。94 ℃下3 min，94 ℃下30 s，59 ℃下30 s，72 ℃下60 s，30個循環(huán);72 ℃下7 min。

1.3 觀察指標

1.3.1 療效標準[4]①控制：患兒治療5 d后體溫轉歸，咳嗽、喘息、哮鳴音等癥狀基本消失;②顯效：治療5 d后體溫有所下降，相關癥狀明顯緩解;③好轉：治療5 d后體溫有所下降但仍存在反復發(fā)熱，相關癥狀減輕，偶有喘息發(fā)生;④無效：治療5 d后發(fā)熱，咳嗽、喘息等癥狀無改善或加重?？傆行?(控制+顯效+好轉)/總例數(shù)×100%。

1.3.2 癥狀消失時間 記錄不同基因型患兒的咳嗽消失時間、喘息消失時間、哮鳴音消失時間、體溫恢復正常時間、住院時間。

1.3.3 炎癥相關介質(zhì) 于治療前、治療7 d后采集3 ml肘靜脈血，3 000 r/min離心15 min，采用ELISA法測定血清人嗜酸粒細胞陽離子蛋白(ECP)、白細胞介素-4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)水平，檢測試劑盒購自森貝伽(南京)生物。

1.3.4 不良反應 患兒治療期間定期觀察生命體征(體溫、心率、呼吸頻率)、血尿常規(guī)、肝腎功能、心電圖和胸部X光檢查，記錄患兒新發(fā)癥狀、體征或新發(fā)主訴不適，計算不良反應發(fā)生率。

2 結果

2.1 兩組IL-8基因多態(tài)性檢測結果 病例組中AA基因型占比、A等位基因頻率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不同基因型患兒的療效比較 136例患兒中控制64例、顯效30例、好轉16例，總有效率80.88%(110/136)。AA、AT、TT基因型患兒總有效率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.051,P=0.029)。進一步兩兩比較顯示，AT、TT基因型患兒的總有效率明顯高于AA患兒(P<0.05)，AT和TT基因型患兒比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 不同基因型患兒的癥狀緩解情況 不同基因型患兒的各癥狀緩解時間的整體差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。AT和TT患兒的咳嗽消失時間、喘息消失時間、哮鳴音消失時間、體溫恢復正常時間、住院時間明顯短于AA患兒，同時TT患兒短于AT患兒，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

2.4 不同基因型患兒的炎癥相關介質(zhì) 不同基因型患兒治療前的血清ECP、IL-4、IFN-γ差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，不同基因型患兒的血清ECP、IL-4均較治療前降低、血清IFN-γ較治療前升高(均P<0.05)。AT和TT患兒治療后的血清ECP、IL-4低于AA患兒，同時TT患兒低于AT患兒;AT和TT患兒治療后的血清IFN-γ高于AA患兒，同時TT患兒高于AT患兒(P<0.05)。見表4。

表1 兩組患兒IL-8基因多態(tài)性檢測結果比較[例(%)]

表2 不同基因型患兒的總有效率比較[例(%)]

表3 不同基因型患兒的癥狀緩解情況比較(d)

表4 不同基因型患兒炎癥相關介質(zhì)比較

2.5 不良反應 治療期間患兒均未見嚴重不良反應，治療未受影響。136例患兒中新發(fā)4例發(fā)熱、5例腹瀉、3例乏力、4例頭痛、3例肌肉或關節(jié)酸痛，不良反應發(fā)生率13.97%(19/136)。AA、AT、TT基因型患兒不良反應發(fā)生率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 不同基因型患兒的不良反應比較(例，%)

3 討論

嬰幼兒呼吸道黏膜抵抗力差，毛細支氣管炎發(fā)病率高[5-6]。病毒多由呼吸道黏膜或肺侵入機體，呼吸道黏膜表皮細胞、上皮細胞、肺組織均含豐富Ⅰ型干擾素受體，這是機體對病毒入侵的防御機制[7-8]?；诖?，有研究推測，霧化吸入干擾素α可有效抵抗呼吸道病毒感染[9]。

本研究采用α-2b干擾素治療毛細支氣管炎患兒取得了較好的療效，與相關報道結果相符[10]。干擾素α是廣譜抗病毒藥，可與靶細胞膜上受體結合，促使細胞分泌抗病毒蛋白，起到抗病毒效果。研究證實，干擾素α幾乎可抑制及殺滅所有病毒，尤其是RNA病毒[11]。α-2b干擾素屬于干擾素α的一種亞型，具有較高的抗病毒活性，其產(chǎn)生的抗病毒蛋白水平高于其他亞型。有報道，吸入干擾素α-2b霧化液的大鼠肺中含抗病毒活性，給藥24～48 h后干擾素濃度逐漸降低并消失[12]。動物實驗發(fā)現(xiàn)，一次性霧化吸入3萬IU的重組干擾素α時，血清抗病毒蛋白濃度大幅升高，可起到直接抗病毒作用[13]。重組干擾素α-2b主要從以下幾個途徑對毛細支氣管炎進行治療：①阻斷病毒活動通路，延緩病毒內(nèi)基因表達及病毒外殼吸附，激活巨噬細胞、自然殺傷細胞對免疫功能的調(diào)控;②阻礙細胞免疫，降低氣道反應性;③與布地奈德發(fā)揮協(xié)同作用，阻斷相關炎癥介質(zhì)的分泌[14-15]。研究顯示，重組干擾素α-2b主要成分是糖蛋白，是病毒誘導宿主細胞產(chǎn)生的反應物，會局部作用于病變部位，使病變部位及鄰近細胞對病毒進行抵抗[16]，與本研究結論一致。

IL-8主要由單核細胞、巨噬細胞分泌，可趨化中性粒細胞。毛細支氣管炎的發(fā)生與嗜酸性粒細胞浸潤為主的多種炎性遞質(zhì)的參與有關，包括IL-8的產(chǎn)生和分泌，這是IL-8基因多態(tài)性影響疾病進展和治療效果的理論基礎[17-18]。研究顯示，在IL-8基因啟動子及編碼區(qū)存在多個單核苷酸多態(tài)性位點，影響某些疾病的發(fā)病過程和進展，受到臨床關注[19]。研究發(fā)現(xiàn)，人IL-8基因位于染色體4q12-q21，IL-8基因啟動子-251位點的基因多態(tài)性可通過對炎癥因子的合成過程中轉錄等環(huán)節(jié)的調(diào)控影響支氣管炎相關炎性因子合成和表達，從而影響疾病進展和療效[20]。

本研究對136例患兒IL-8-251位點的基因多態(tài)性進行檢測，與健康對照組相比，支氣管炎患兒的基因型頻率中AA基因型的占比和A等位基因頻率分別達和23.53%和52.94%，高于對照組7.35%和33.82%，表明IL-8-251位點的基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒誘發(fā)的毛細支氣管炎的發(fā)生有關，考慮與基因多態(tài)性會影響遺傳易感性有關，AA基因型兒童的遺傳易感性更高，因此發(fā)病風險更高。此外，不同基因型患兒的療效也有較大差異，具體表現(xiàn)為AA基因型患兒的總有效率最低，咳嗽、喘息、哮鳴音等癥狀的消失時間、體溫恢復正常時間及住院時間相對延長，同時治療后的血清ECP、IL-4、IFN-γ的變化幅度也更小。ECP、IL-4和IFN-γ均為炎癥相關介質(zhì)，與呼吸道炎癥，喘息、氣促等相關。血清ECP是具有細胞毒性的炎性介質(zhì)，可誘發(fā)或加重喘息、氣促等;IL-4具有活化B細胞，趨化、募集、浸潤嗜酸性粒細胞等作用;IFN-γ是Ⅱ型干擾素，主要由Th1細胞產(chǎn)生，具有病毒清除作用[21-22]。研究顯示，啟動子區(qū)-251位點由T基因突變?yōu)锳基因后會造成內(nèi)含子區(qū)域的改變，從而影響真核基因剪接信號，使內(nèi)含子以隱外顯子方式在真核RNA中存在，最終編碼的蛋白質(zhì)活性降低或失活，治療后相關炎性因子如ECP、IL-4、IFN-γ分泌的調(diào)控作用也受到影響，其中TT基因型患兒由于編碼的蛋白質(zhì)活性相對AT、AA基因型患兒更高[23]，因此，對ECP、IL-4分泌的抑制作用、IFN-γ分泌的促進作用更強，疾病獲得更明顯緩解，總有效率更高。

136例患兒不良反應總發(fā)生率為13.97%(19/136)，不同基因型患兒不良反應總發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學意義，說明IL-8-251位點的基因多態(tài)性會影響重組干擾素α-2b霧化治療的效果，但不會影響藥物不良反應。本研究不足之處：IL-8基因存在較多的位點，除-251位點外，還有781位點等，但本研究僅分析了-251位點的基因型多態(tài)性對疾病治療效果的影響，未能全面分析-781等其他位點基因多態(tài)性的影響，有待后續(xù)補充。

綜上所述，重組干擾素α-2b霧化治療毛細支氣管炎可有效抑制炎癥介質(zhì)分泌，且安全性高?；純褐委熜Ч麜艿絀L-8基因多態(tài)性影響，攜帶A基因?qū)χ委熜Ч胁焕绊憽?/p>