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    我國豬圓環(huán)病毒病的疾病趨勢和應對措施

    2021-01-27 03:32:42
    養(yǎng)豬 2020年6期
    關(guān)鍵詞:肥育耳病圓環(huán)

    張 軍

    (法國詩華動物保健公司,北京 朝陽 100102)

    豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus, PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬,PCV無囊膜,是閉環(huán)單股DNA病毒,是世界上最小的動物病毒之一。自發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒以來,人們一直關(guān)注該病對豬群的感染,盡可能地降低其對豬群的危害。

    1 豬圓環(huán)病毒的類型

    迄今已發(fā)現(xiàn)4種豬圓環(huán)病毒,PCV1(圓環(huán)病毒1型)最早發(fā)現(xiàn)于1974年,對豬沒有致病性。關(guān)于PCV2(圓環(huán)病毒2型)的研究最多,也是對豬群健康有明確危害的疾病。2016年美國首次發(fā)現(xiàn)PCV3(圓環(huán)病毒3型)后,世界上包括日本、韓國、瑞典、俄羅斯、泰國、巴西、丹麥、意大利和西班牙等國均報道檢出了該病毒。我國從2017年至今,有關(guān)PCV3的檢測和研究十分熱門,各地區(qū)的陽性檢出率居高不下[1]。PCV3與前兩種類型病毒基因同源性僅有31%~48%,傳統(tǒng)的PCV2疫苗幾乎不能提供交叉保護。除了家豬以外,PCV3還能在野豬、狗、奶牛、老鼠上檢出陽性,具有跨物種傳播或感染的可能性。健康豬和有臨床癥狀的豬都能檢測到PCV3,目前實驗室還無法分離病毒并復制出臨床癥狀,有關(guān)該病毒的致病性還有爭議,雖然有人認為PCV3與母豬繁殖障礙、豬皮炎腎病綜合征(PDNS)和組織器官炎癥反應有關(guān)[2]。2019年4月,我國學者在湖南省幾頭嚴重臨床患病豬只(有呼吸道、腸道和皮炎腎病綜合征癥狀)中檢測到新的圓環(huán)病毒類型,暫時命名為豬圓環(huán)病毒4型(PCV4),與水貂圓環(huán)病毒基因組最接近(66.9%)[3],相關(guān)研究還處于起步階段。豬圓環(huán)病毒的發(fā)現(xiàn)歷史見圖1。

    2 PCV2的感染貫穿豬的一生

    豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)在環(huán)境中穩(wěn)定性強,目前我們采用的諸多殺滅非洲豬瘟病毒的方法不能將其滅活,病毒在56 ℃下持續(xù)存在1小時或75 ℃下存在15分鐘仍具有感染性[4]。PCV2的感染遍布全球養(yǎng)豬業(yè),目前幾乎不可能實現(xiàn)凈化。

    PCV2感染可導致母豬帶毒或公豬精液帶毒,從受精卵大約第4~5天透明帶破裂,病毒即可感染胚胎,直至懷孕30天,PCV2對胚胎的所有細胞都敏感,可造成胚胎死亡,如果殺死所有胚胎,母豬表現(xiàn)返情。由于PCV2傳播較慢,可能只是部分胚胎死亡,結(jié)果是母豬產(chǎn)仔數(shù)減少,這可以通過有效的PCV2種豬疫苗免疫得到明顯的改善。懷孕30~70天感染,PCV2對心細胞和肝細胞敏感,造成胎兒死亡而流產(chǎn),死亡胎兒心肌肥大和壞死。懷孕70~114天感染,巨噬細胞是敏感細胞,感染胎兒生長變慢,造成所產(chǎn)仔豬均勻度變差(體重低的0.8千克,體重高的2千克)。仔豬出生后早期階段(6周齡前)感染,PCV2主要感染巨噬細胞和樹突樣細胞,引起免疫抑制,繼而發(fā)生系統(tǒng)性疾病,即PCV-SD(舊稱斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征,PMWS)。如果感染發(fā)生在中大豬,PCV2主要感染組織器官的上皮細胞和實質(zhì)細胞,引起肥育期肺部疾?。≒CV-LD)和腸道疾?。≒CV-ED)[5]。損失最大的是亞臨床感染,肉眼看不到損失,但豬群生長緩慢,日增重降低,料重比升高,以及并發(fā)其他疾病,導致死亡率增加。后備母豬對PCV2亦為敏感,可造成配種失敗、產(chǎn)仔數(shù)減少和使用壽命縮短等(圖2)。

    3 我國豬場當前PCV2的感染特點

    如上所述,豬圓環(huán)病毒2型可以感染豬的一生,不同生產(chǎn)階段的豬感染后臨床表現(xiàn)不同,人們將與PCV2相關(guān)的系列疾病稱為“豬圓環(huán)病毒病”(PCVD)或“豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病”(PCVAD)[6]。我國豬場普遍存在PCV2的感染,具有以下特點。

    3.1 PMWS比例在下降

    由于國內(nèi)PCV2疫苗的廣泛應用,現(xiàn)在豬場較少見到典型的多系統(tǒng)衰竭綜合征的豬群,除非豬場處于藍耳病活躍感染期,或因防控非洲豬瘟壓力而停止免疫PCV2疫苗。需要注意的是,PMWS不僅發(fā)生于斷奶階段,4~16周齡的豬群都可能發(fā)生。

    3.2 肥育期的感染比例在上升

    國內(nèi)豬場PCV2疫苗往往在斷奶前后免疫1~2次,由于很多疫苗的保護持久性不夠,加上肥育豬飼養(yǎng)期延長,PCV2在肥育豬的感染十分普遍,存在上升趨勢。PCV2感染導致肥育豬發(fā)生肺部疾?。≒CV2-LD),是呼吸道病綜合征的最重要病因之一,盲目添加抗生素控制往往效果不理想。PCV2還會導致肥育豬的腸道上皮細胞損傷,造成腸道疾?。≒CV2-ED),病豬拉灰色、黃色或褐色稀糞便,繼發(fā)回腸炎、魏氏梭菌病等腸道疾病,加重腸道的感染,這在我國豬場十分普遍。此外,PCV2的亞臨床感染可導致肥育期巨大的經(jīng)濟損失。肥育期的PCV2感染被我國大部分豬場忽視了,最主要的原因是疾病的鑒別診斷問題,人們不知道自己豬場肥育豬發(fā)病的源頭其實是PCV2。

    3.3 母豬繁殖障礙問題被低估

    PCV2感染母豬可發(fā)生繁殖障礙(PCV2-RD),出現(xiàn)返情、流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和弱仔等,但由于其他垂直傳播感染的疾病也會導致類似癥狀,加上3胎以上的經(jīng)產(chǎn)母豬PCV2抗體陽性率普遍很高,人們往往低估了PCV2感染造成的母豬繁殖障礙。我們可以從4個方面評估母豬的感染壓力:死胎出現(xiàn)心肌肥大或心肌炎,qPCR檢測出高病毒拷貝數(shù)(>105);出生當天同窩仔豬體重均勻度差別較大;5周齡(包括產(chǎn)房)前的仔豬出現(xiàn)超早期PMWS的感染癥狀;以現(xiàn)有的種豬繁殖潛力,配種、飼養(yǎng)和管理等手段都改善后,產(chǎn)仔數(shù)仍不滿意。雖然有一些專業(yè)人員提醒豬場關(guān)注母豬的PCV2疫苗免疫,但由于很多疫苗的研發(fā)設計和免疫方案是針對仔豬的,同樣的疫苗免疫在母豬上,對繁殖成績幾乎沒有改變,這進一步加劇了管理決策層的低估程度。

    3.4 后備母豬無效免疫

    國內(nèi)后備母豬的配種時間大約在210~300日齡,仔豬階段免疫的PCV2疫苗至此保護力大多非常低了,后備母豬的繁殖系統(tǒng)極易受到圓環(huán)病毒的侵害,這與同為單鏈DNA的細小病毒感染是類似的。豬場將用于仔豬的疫苗在后備母豬配種前“加強”免疫1次,希望能給第1次懷孕的母豬帶來足夠的保護,但結(jié)果卻事與愿違。母豬免疫的主要目的是保護繁殖系統(tǒng),這是有別于仔豬免疫的。目的不同,所要求的疫苗種類、劑量和免疫方案也是不同的。爭辯是無意義的,簡單的試驗對比就能分辨出有效免疫與無效免疫的差別?,F(xiàn)在普遍認為,后備母豬的第1次繁殖表現(xiàn),往往代表了其終身的潛力,后備母豬PCV2的無效免疫降低了眾多優(yōu)秀品種的繁殖預期。

    3.5 豬皮炎腎病綜合征高發(fā)

    豬皮炎腎病綜合征(PDNS)是圓環(huán)病毒相關(guān)疾?。≒CVAD)的一種,但并非所有PDNS都是PCV2引起的,藍耳病、霉菌毒素、巴氏桿菌感染等都可能是其病因。PDNS病豬有全身性脈管炎和腎小球腎炎,多認為是Ⅲ型免疫超敏性反應,中大豬高發(fā)[6-8]。近年來為了追求高效養(yǎng)殖,我國很多豬場忽視了養(yǎng)殖環(huán)境和動物福利的因素,豬皮炎腎病綜合征呈現(xiàn)高發(fā)態(tài)勢,由于皮膚特別是后肢和會陰部出現(xiàn)不規(guī)則的紅紫斑和丘疹,臨床上很容易被發(fā)現(xiàn),有人會條件反射地“診斷”為PCV2感染,這是不科學的。通過更換疫苗的方式往往不能立即奏效,改善飼料質(zhì)量、加強通風、添加清熱解毒的中藥等方式更為有效。有時候什么也不做,高溫高濕的季節(jié)一過,感染豬的比例也會大幅下降。毫無疑問,高效的PCV2疫苗免疫或多或少能夠降低PDNS的發(fā)病率,畢竟PCV2是其病因之一。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)皮炎腎病綜合征發(fā)病豬PCV3檢出率較高,相關(guān)研究還在開展之中。

    3.6 仔豬先天性震顫呈散發(fā)狀態(tài)

    仔豬先天性顫抖(Congenital tremor, CT),又稱“抖抖病”,現(xiàn)有國際上一般不將其視為圓環(huán)病毒相關(guān)疾病,但國內(nèi)很多書刊資料和專家講到PCV2時仍會提及CT?,F(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)CT有6種類型,B型沒有組織學損傷,人們對其所知甚少;AⅠ型是由經(jīng)典豬瘟引起;AⅢ和AⅣ型是染色體隱性遺傳所致;AⅤ由敵百蟲等化學物質(zhì)導致;AⅡ以前被認為與PCV2相關(guān),現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)其病原是豬非典型性瘟病毒(Atypical porcine pestivirus, APPV),臨床上可以在新生仔豬上用APPV感染復制出癥狀[9]。APPV可以垂直傳播,造成胎兒中樞神經(jīng)損傷,新生仔豬脊髓髓鞘形成減少,四肢、頭部和全身出現(xiàn)震顫。我國仔豬先天性震顫呈散發(fā)態(tài)勢,個別豬場發(fā)病率較高,發(fā)病仔豬吃不到奶水導致餓死,存在一定的危害。

    3.7 PCV2d成為主流感染基因型

    目前已知PCV2有6個基因型,無論國外還是國內(nèi)PCV2d都已成為最流行的感染基因型。從PCV2a到PCV2b,再到PCV2d,基因型的逐漸分化有多種原因,包括疫苗接種壓力和自然選擇。PCV2d的出現(xiàn)與疫苗的廣泛使用有關(guān)。國內(nèi)使用的PCV2疫苗有PCV2a和PCV2b兩種基因型。進口疫苗都是基于PCV2a研制的,已被證明對PCV2d有較好的保護。有人擔心國產(chǎn)疫苗對于PCV2d保護率不夠,建議免疫兩次以上來降低風險。PCV2核酸進化率為1.2×10-3位點/年,具有與單鏈RNA病毒類似的變異復雜性,全病毒疫苗的交叉保護更具優(yōu)勢[10-12]。

    4 PCV2的鑒別診斷

    典型的臨床癥狀和解剖病變引導我們關(guān)注或懷疑PCV2的感染,但還不足以達到診斷的標準。生長緩慢、消瘦、腹股溝淋巴結(jié)腫大等是PMWS的典型癥狀,但其他疾病也會導致類似問題。后肢及會陰部等壞死性或出血性病變、腎臟白斑、腎皮質(zhì)出血、全身性脈管炎、壞死性或纖維素性腎小球腎炎是PDNS的典型癥狀,但PCV2并非其唯一病因。懷孕后期流產(chǎn)和死胎、死亡胎兒心肌肥大、纖維組織增生或壞死性心肌炎是PCV2導致的繁殖障礙表現(xiàn),但從這些表現(xiàn)也不能準確診斷出是PCV2的問題。肥育期感染導致的肺部疾病、腸道疾病和亞臨床感染就更加難以從臨床表現(xiàn)來判斷了。

    PCV2廣泛感染,血清學抗體難以作為診斷標準??贵w的動態(tài)變化可作為免疫監(jiān)測的參考,疫苗免疫后抗體水平一般先升高后下降,如果在下降的趨勢中突然再次上升,往往預示著野毒的感染。母源抗體對免疫的干擾作用可以通過抗體水平測定來完成。由于各種ELISA試劑盒的敏感性、特異性和符合率差異很大[13],抗體水平動態(tài)監(jiān)測可以使用法國Synbiotics和我國哈爾濱獸醫(yī)研究所的阻斷ELISA試劑盒,母源抗體監(jiān)測可以采用西班牙Ingenasa試劑盒。

    普通PCR無法作為診斷手段,因為PCV2廣泛分布,健康豬群往往也能夠檢測到陽性結(jié)果。熒光定量PCR(qPCR)可以測定血液或組織中的病毒載量,不僅能檢測出病毒的有無,還能反映出病變的程度。qPCR作為PCV2的診斷工具需要一定的群體數(shù)量,個體診斷最好采用更為精準的免疫組化(IHC)和原位雜交技術(shù)(ISH)。方法越精準,成本和代價越高。

    5 PCV2的疫苗免疫

    PCV2疫苗的上市曾被認為是動物疫苗技術(shù)最成功的典范,當人們還在爭議PMWS的致病原因和感染機理時,接種PCV2疫苗的豬群“立竿見影”地擺脫了PMWS的困擾?,F(xiàn)在歐洲與美國養(yǎng)豬場PCV2的疫苗免疫率達到90%以上,我國規(guī)?;i場的免疫率也非常高。事實證明,即便是最好的PCV2疫苗也不是完美的。疫苗接種后可以降低病毒血癥、減少排毒,將病毒對生產(chǎn)成績的危害降低至可控范圍內(nèi),但并不能完全阻止排毒和傳播。疫苗接種后R0(Basic Rproductive Number,基本傳染數(shù))從5.2降到1.5,仍然在大于1,單靠PCV2疫苗難以做到疾病的凈化[14]。

    5.1 疫苗種類

    已經(jīng)上市的PCV2疫苗有3種:全病毒滅活疫苗、亞單位疫苗和嵌合疫苗,目前3種疫苗在我國都有商品化產(chǎn)品。世界上首個上市的PCV2疫苗即Circovac?是全病毒滅活疫苗,內(nèi)含全基因組基因編碼的所有組分,包括非結(jié)構(gòu)復制酶蛋白(Rep)和核衣殼蛋白(Cap),Rep蛋白產(chǎn)生的細胞免疫應答對于防控PCVAD也很重要。亞單位疫苗是通過桿狀病毒或大腸桿菌表達Cap蛋白,體外折疊組裝形成空間構(gòu)象,即病毒樣顆粒(Virus-like particles, VLP)。由于全病毒疫苗病毒培養(yǎng)較為困難,生產(chǎn)成本高,國內(nèi)有些廠商在全病毒疫苗中添加生產(chǎn)更為容易的Cap蛋白,但目前已被我國明文禁止。嵌合疫苗是將PCV1的ORF2用PCV2的ORF2基因進行替換后構(gòu)建重組病毒滅活疫苗。

    5.2 佐劑類型

    目前國內(nèi)上市的PCV2疫苗佐劑包括水包油佐劑、水包油包水佐劑和水佐劑。水佐劑應激小,免疫應答快,但免疫持續(xù)期稍短。水包油佐劑應激適中,免疫應答稍慢,但免疫持續(xù)期久,對于肥育期的感染保護更好。

    5.3 免疫目的

    PCV2疫苗免疫母豬的目的是保護母豬的繁殖系統(tǒng)并提供高初乳水平保護產(chǎn)房仔豬和斷奶前期仔豬。免疫仔豬的目的是降低病毒載量、減少排毒,盡可能地降低PCV2對仔豬的生產(chǎn)表現(xiàn)。目的不同,對疫苗種類的要求和免疫方案都會有所不同。

    5.4 免疫次數(shù)

    免疫次數(shù)取決于疫苗的研發(fā)設計、生產(chǎn)工藝和疾病的感染壓力,與其聽從廣告宣傳,不如閱讀產(chǎn)品標簽。產(chǎn)品標簽上標注的免疫次數(shù)代表當初疫苗研發(fā)和上市審批的標準,這是公正客觀的。

    5.5 功效評估

    生產(chǎn)數(shù)據(jù)和實驗室檢測相結(jié)合的評估方式能較好地反映出疫苗的功效。仔豬免疫可以統(tǒng)計死亡率、日增重、料重比等生產(chǎn)數(shù)據(jù)結(jié)合抗體應答水平、病毒血癥水平等實驗室檢測手段來評估,中和抗體和細胞免疫雖然也很重要,但一般實驗室水平難以達到要求。母豬免疫可以統(tǒng)計總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)、初生重、斷奶仔豬數(shù)、母豬斷奶至配種的天數(shù)、返情率等繁殖成績和抗體應答水平來評估。

    5.6 免疫失敗的原因

    毫無疑問,國內(nèi)豬場存在大量的PCV2免疫失敗現(xiàn)象,由于PCV2感染較為緩慢,臨床癥狀不突出,亞臨床癥狀更多,很多的失敗免疫被忽視了。免疫失敗的原因有:疫苗選擇錯誤,用于仔豬的疫苗免疫在母豬往往是失敗的,有研究表明亞單位疫苗免疫的母豬不能阻止垂直傳播[15];人為因素,儲藏和運輸沒有做到全程2~8 ℃,沒有注射入深部肌肉,擅自降低劑量,使用標簽標注劑量的一半等;免疫時間錯誤:免疫太早,不光是仔豬免疫應答不充分,更重要是母源抗體干擾。免疫太晚,病毒已經(jīng)發(fā)生了感染,免疫預防的效果無法達到。可以通過抗體水平監(jiān)測找到適合于自己豬場的最佳免疫窗口期。豬的健康,無論是母豬還是仔豬,場內(nèi)藍耳病過于活躍,PRRS病毒血癥期的大部分疫苗免疫都是失敗的。

    6 應付措施

    6.1 5周齡之前出現(xiàn)PMWS感染癥狀

    這是很罕見的,往往是非洲豬瘟復產(chǎn)場,場內(nèi)大部分都是新母豬,母源抗體保護不足導致超早期感染。這種情況下,仔豬提前免疫已經(jīng)來不及,需要在母豬產(chǎn)前3周免疫兩次種豬用的PCV2疫苗來解決。

    6.2 肥育期感染

    首先檢查當前所用疫苗,如果是兩針型疫苗只免疫了1次,需要再加強免疫1次。如果免疫次數(shù)已經(jīng)參考標簽說明正確執(zhí)行了,仍存在肥育期的感染,需要在原來免疫的基礎(chǔ)上,在肥育期PCVAD出現(xiàn)的前1個月再免疫1次疫苗。這樣有些豬場會出現(xiàn)商品豬免疫3次PCV2疫苗的現(xiàn)象。事實證明,這樣做是值得的,這種情況往往在水佐劑疫苗上比較常見。

    6.3 母豬繁殖障礙問題

    PCV2疫苗要像細小病毒一樣在后備母豬配種前免疫兩次。公豬每年需要免疫2~3次,經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫可以根據(jù)上述方法評估感染壓力后決定是否免疫,如果免疫可以跟胎免疫或每年普免3次。免疫要選擇對種豬有效的疫苗。

    6.4 皮炎腎病綜合征問題

    首先檢查豬舍環(huán)境,改善通風、濕度、密度等因素,這是最要緊的。然后檢查是否存在上述的PCV2疫苗免疫失敗問題。此外,因為藍耳病、霉菌毒素和一些細菌感染也會導致PDNS的出現(xiàn),這些因素也要排查解決。PDNS發(fā)病豬群可以用清熱解毒的中藥和抗炎藥物(如卡巴匹林鈣、地塞米松等)有效緩解癥狀。夏季蚊蟲叮咬導致的皮膚性問題不屬于皮炎腎病綜合征,但只要找到問題的源頭,也能很容易地解決。

    6.5 PCV3高陽性問題

    現(xiàn)在國內(nèi)很多豬場反應,自己場內(nèi)的豬群呈PCV3陽性,特別是臨床不太穩(wěn)定的豬場,擔憂PCV3是其主要的病因,四處打聽是否有PCV3疫苗供應。PCV3是否有致病性還屬未知,即使致病也沒有必要恐慌。至少從目前來看,嚴重發(fā)病的豬群都能在PCV3之外找到致病原,現(xiàn)在懷疑PCV3與母豬繁殖障礙、皮炎腎病綜合征、器官炎性反應有關(guān),與藍耳病、PCV2、經(jīng)典豬瘟混合感染比較普遍。有關(guān)PCV3病毒分離和致病性還處于實驗室研究階段,我們生產(chǎn)上先做好PCV2的防控,先把已知的和容易做好的事項盡可能地完善。

    6.6 做好生產(chǎn)管理工作

    PCV2疫苗上市前,豬場遵照“Madec 20法則”能夠大幅降低PMWS的發(fā)病率,但操作起來較為繁瑣,其流程不比今天非洲豬瘟防控措施簡單?!癕adec 20法則”包括全進全出、實體隔斷、減少寄養(yǎng)、改善豬舍環(huán)境、杜絕混群、及時移除病豬和嚴格控制飼養(yǎng)面積等,這些措施在今天也不過時,仍值得借鑒。

    6.7 藍耳病防控

    國內(nèi)大部分豬場無法實現(xiàn)藍耳病的凈化或無法維持藍耳病的長期陰性,保持存欄豬群廣泛“弱陽性”感染的動態(tài)平衡是比較現(xiàn)實的策略和目標。這其中后備母豬的入群馴化非常關(guān)鍵,即使是自己場內(nèi)挑選的后備母豬也要在入群前做好馴化工作,通過實驗室檢測的方法確保馴化的生物工具(如經(jīng)產(chǎn)母豬胎衣、保育豬糞便病料等)是非洲豬瘟陰性的,使用藍耳病弱毒疫苗是較安全的選擇之一。堅持監(jiān)測豬群藍耳病的感染動態(tài),及時通過閉群、藥物保健等方式進行干預,確保藍耳病的長期穩(wěn)定。藍耳病穩(wěn)定了,PCV2的防控將變得更加容易,選擇合適的疫苗和制定實用的免疫計劃,在一線生產(chǎn)中全面落地執(zhí)行即可。

    7 總結(jié)

    豬圓環(huán)病毒包括PCV1、PCV2、PCV3和PCV4,在我們豬場都已檢出。其中對豬群健康危害最嚴重也是最確切的是PCV2。PCV2導致的豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病包括仔豬系統(tǒng)性疾病(原PMWS)、肥育期腸道和肺部疾病、亞臨床感染、皮炎腎病綜合征和母豬繁殖障礙。PCV2診斷需要結(jié)合臨床和實驗室檢測結(jié)果綜合評估,診斷越精準,成本和代價越高。疫苗是控制PCVAD的主要手段,豬場根據(jù)自身感染壓力選擇有效疫苗并制定適宜的免疫方案,一線生產(chǎn)中盡量避免疫苗的免疫失敗。

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