乳腺癌MRI診斷與Ki-67、P53表達(dá)的相關(guān)性

徐麗娜，唐竹曉，詹瑩瑩，李雙標(biāo)，戴士林，馬紅玉

河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 a. 影像科；b. 病理科，河北 滄州 061001

引言

乳腺癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年升高且有年輕化的趨勢(shì)，因此早期準(zhǔn)確診斷乳腺癌有助于疾病的分期和評(píng)估，及時(shí)對(duì)患者給予適當(dāng)治療至關(guān)重要[1]。目前，乳腺影像檢查方法包括乳腺X射線鉬靶攝影，超聲檢查和磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging，MRI），其中MRI是評(píng)價(jià)乳腺病變最有效的方法，對(duì)乳腺癌腫瘤大小，范圍的評(píng)價(jià)也具由較高的準(zhǔn)確率，但仍存在漏檢誤檢的情況[2-3]。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)乳腺癌的發(fā)生與多種基因蛋白的異常表達(dá)有關(guān)，其中Ki-67和P53是和乳腺癌密切相關(guān)的兩種蛋白。Ki-67是一種核增殖蛋白，其表達(dá)的高低反映腫瘤細(xì)胞的增殖情況，與乳腺癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性[4]。P53是機(jī)體中一種抑癌基因，分為野生型和突變型，野生型具有DNA修復(fù)能力可抑制細(xì)胞增殖[5]；而突變型失去正常抑癌作用，促進(jìn)細(xì)胞增殖進(jìn)而誘發(fā)腫瘤[6]。研究發(fā)現(xiàn)，P53在正常乳腺組織中無表達(dá)，而在乳腺癌組織中過度表達(dá)，因此其對(duì)乳腺癌的分期分級(jí)具有重要意義[7]。目前影像學(xué)診斷與分子生物學(xué)診斷聯(lián)合應(yīng)用的研究較少，因此本研究探討了MRI聯(lián)合Ki-67、P53測(cè)定對(duì)于乳腺癌診斷的敏感性和特異性，并分析MRI評(píng)分與Ki-67、P53表達(dá)情況的相關(guān)性，旨在為乳腺癌的臨床診斷治療提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2019年3月來我院就診的120例疑似乳腺癌患者納入本研究，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成兩組，分別為對(duì)照組60例，觀察組60例，年齡32～79歲，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過，患者均同意參與本研究，并簽署知情同意書。兩組患者一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（表 1）。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：① 所有患者均為女性；② 患者檢查時(shí)間均為手術(shù)前，且在月經(jīng)后1～2周內(nèi)進(jìn)行，檢查前未采取輔助化療及放療手段治療；③ 患者均經(jīng)手術(shù)或穿刺活檢病理進(jìn)行確證；④ 患者均經(jīng)初步判斷為乳腺疾病。

（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并其他腫瘤史者；② 合并有精神疾病患者；③ 有認(rèn)知障礙患者；④ 有乳腺切除手術(shù)史者。

1.3 方法

1.3.1 MRI 掃描技術(shù)及觀察指標(biāo)

對(duì)照組患者進(jìn)行MRI檢查，采用德國(guó)Siemens3.0T VERIO超導(dǎo)MRI掃描儀，患者俯臥位，雙乳自然懸垂于乳腺專用相控陣表面線圈，分別使用常規(guī)平掃、動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描。掃描序列如下：快速反轉(zhuǎn)恢復(fù)磁化準(zhǔn)備自旋回波抑脂T2WI序列、快速小角度激發(fā)三維成像（FLASH-3D）T1WI序列、動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描，動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描采用FLASH-3D脂肪抑制T1WI序列，掃描6個(gè)時(shí)像，第1時(shí)像掃描后20 ms采用高壓注射器經(jīng)肘靜脈注入對(duì)比劑釓噴酸葡胺注射液（Gd-DTPA），劑量0.1 mmol/kg，注射速度2.0 mL/s，并用20 mL 0.9%氯化鈉沖洗導(dǎo)管內(nèi)對(duì)比劑，行增強(qiáng)掃描。記錄腫瘤的MRI表現(xiàn)，比如邊緣輪廓、強(qiáng)化特點(diǎn)以及腫瘤邊界和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

表2 MRI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.2 Ki-67和P53測(cè)定

觀察組患者在對(duì)照組基礎(chǔ)上采用免疫組化方法檢測(cè)組織中Ki-67和P53的表達(dá)。手術(shù)前結(jié)合MRI掃描技術(shù)確定病灶部位，穿刺，于病灶部位取樣，將樣本用10%甲醛固定24 h，然后經(jīng)脫水和透明化處理后使用石蠟包埋制成切片并使用蘇木精-伊紅（Hematoxylin-Essence，HE）進(jìn)行染色。將上述切片經(jīng)過脫蠟處理后對(duì)組織抗原進(jìn)行修復(fù)，室溫下使用3%過氧化氫孵育10 min阻斷過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗后用PBS沖洗3次。使用山羊血清進(jìn)行封閉，并添加Ki-67和P53一抗，37℃條件下孵育2 h，然后用PBS沖洗3次。添加DAB進(jìn)行顯色，然后使用蘇木精進(jìn)行復(fù)染。最后用梯度酒精進(jìn)行洗脫，使用中性樹脂進(jìn)行封片，陰性對(duì)照使用PBS作為一抗，采用已知陽性標(biāo)本作為陽性對(duì)照。其中Ki-67和P53陽性細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，在隨意10個(gè)高倍鏡下，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出占腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分比，判定表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)觀察組患者的MRI評(píng)分與Ki-67、P53的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢查方案對(duì)乳腺癌檢測(cè)的準(zhǔn)確度

經(jīng)過病理證實(shí)，120例患者中共有乳腺癌確診患者96例，其中對(duì)照組檢出乳腺癌患者59例，實(shí)際患病人數(shù)為49例，檢查準(zhǔn)確率為85.96%，觀察組檢出乳腺癌患者49例，實(shí)際患病人數(shù)為47例，檢查準(zhǔn)確率為90.38%。兩組患者差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3）。典型MRI圖像，見圖1。

表3 兩組患者檢查準(zhǔn)確度比較

圖1 乳腺癌MRI動(dòng)態(tài)增強(qiáng)圖像及病理圖像

2.2 不同檢查方法對(duì)乳腺癌檢測(cè)的敏感性及特異性

分析結(jié)果顯示對(duì)照組診斷敏感性為80.00%，特異性為71.67%，觀察組患者診斷敏感性為93.33%，特異性為86.67%，兩組患者差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）（表4）。

表4 不同檢測(cè)方法敏感性和特異性比較

2.3 MRI評(píng)分與Ki、P53的相關(guān)性

經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的MRI評(píng)分與Ki-67、P53均表現(xiàn)出正相關(guān)性如表5所示。

表5 MRI評(píng)分與K-67i、P53的相關(guān)性

3 討論

乳腺癌是一種女性常見的惡性腫瘤，隨著人們生活水平的提高和對(duì)健康重視程度的增強(qiáng)，乳腺癌的診斷率也呈現(xiàn)逐年增高的趨勢(shì)[8-9]。乳腺癌的發(fā)生不僅嚴(yán)重危害患者的身體健康，同時(shí)也會(huì)給患者造成巨大的精神壓力，因此其早期診斷對(duì)于乳腺癌的治療和預(yù)防具有重要意義[10-11]。目前乳腺癌的診斷方法主要有鉬靶、超聲以及MRI[12]，陽君等[13]研究表明，MRI檢查較單一鉬靶攝影及超聲檢查具有較高的診斷效能。隨著對(duì)疾病的認(rèn)知程度加深，不斷有新的檢測(cè)指標(biāo)被發(fā)掘。國(guó)內(nèi)外大量研究結(jié)果表明，乳腺癌患者體內(nèi)Ki-67和P53水平變化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有較大關(guān)聯(lián)[14-15]。因此本研究針對(duì)MRI聯(lián)合Ki-67和P53測(cè)定對(duì)于乳腺癌診斷的敏感性和特異性進(jìn)行了探討。

本研究結(jié)果表明，單獨(dú)使用MRI診斷，檢測(cè)準(zhǔn)確率為85.96%，聯(lián)合使用MRI和Ki-67和P53測(cè)定檢查準(zhǔn)確率為90.38%，兩組之間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)診斷的敏感性和特異性也有所提高。可能原因?yàn)槿橄侔┑陌l(fā)生是多基因突變的結(jié)果，其乳腺組織癌變的過程中，涉及多種基因表達(dá)的改變，因此結(jié)合影像學(xué)和免疫組織學(xué)檢查結(jié)果更可靠。P53基因是目前人類研究最多的腫瘤相關(guān)的抑癌基因之一，其突變與多種癌組織的發(fā)生密切相關(guān)。在正常細(xì)胞中P53基因通過下游P21、Bcl2等信號(hào)通路介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，防止細(xì)胞過度增殖。正常P53基因可通過基因突變，缺失或甲基化的方式變成突變型，突變后的P53基因失去了抑制細(xì)胞增長(zhǎng)和促進(jìn)凋亡的功能，并且能誘導(dǎo)某些基因的異常表達(dá)，從而引起細(xì)胞的癌變，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。通過分子生物學(xué)方法在腫瘤組織中檢測(cè)到的P53基因均為突變型，Synnott等[16]人以突變型P53作為三陰性乳腺癌的治療靶點(diǎn)開發(fā)了藥物PK11007，初步研究結(jié)果表明該藥物對(duì)乳腺癌患者具有較好的治療效果，值得進(jìn)一步開發(fā)。敖睿等[17]研究了三陰性乳腺癌P53突變熱點(diǎn)及與預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果表明P53熱點(diǎn)突變?cè)谌幮匀橄侔┗颊咧邪l(fā)生率不高，均出現(xiàn)在有P53陽性蛋白表達(dá)的患者中，而出現(xiàn)P53熱點(diǎn)突變的患者預(yù)后較好。同時(shí)也有研究表明，P53的表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，是患者預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素之一[18]，說明在手術(shù)前對(duì)患者進(jìn)行P53測(cè)定有助于患者進(jìn)一步的治療和預(yù)后。

Ki-67是存在于細(xì)胞核內(nèi)的一種非組蛋白性核蛋白，與細(xì)胞周期密切相關(guān)，在G0期不表達(dá)，G1后期出現(xiàn)，S期和G2后期表達(dá)增多，在M期達(dá)到高峰，而在有絲分裂結(jié)果后降解消失，因此其可準(zhǔn)確反映細(xì)胞增生活性。在正常細(xì)胞中Ki-67表達(dá)水平很低，而在乳腺癌患者體內(nèi)隨著病情的發(fā)展逐漸上升。有研究結(jié)果表明，Ki-67高表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高病理分期、大腫瘤直徑、高組織學(xué)分級(jí)等具有一致性，可作為鑒別乳腺良惡性腫瘤的一個(gè)輔助指標(biāo)或判斷腫瘤侵襲能力、惡性程度的一種標(biāo)志物[19]。雖然Ki-67抗原的免疫組織化學(xué)檢測(cè)已用于評(píng)估癌癥增殖多年，但是Penault-Llorca等[20]表示不推薦該標(biāo)記用于乳腺癌的臨床管理中的常規(guī)用途，因?yàn)槟壳叭匀狈i-67評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)化程序以及關(guān)于Ki-67測(cè)定的解釋以及標(biāo)記物臨床效用的仍存在爭(zhēng)議問題。但是，不可否認(rèn)Ki-67是一個(gè)具有諸多臨床價(jià)值的生物分子，有望成為乳腺癌的下一個(gè)重要標(biāo)志物，為臨床療效及預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。

通過相關(guān)性分析也發(fā)現(xiàn)，MRI評(píng)分與Ki-67、P53的表達(dá)呈正相關(guān)性（P＜0.05），也提示MRI聯(lián)合Ki-67、P53測(cè)定用于乳腺癌患者診斷，可提高診斷的敏感性和特異性，有助于患者進(jìn)一步的治療及預(yù)后，值得進(jìn)一步推廣。