FISH和IHC法檢測(cè)乳腺癌HER2基因一致性及其臨床意義

孟亞飛，朱林琳，梁國(guó)棟，遲麗麗，高紫薇，王楊楊，高莉麗，包海龍

（內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院 病理科，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾）

0 引言

HER2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2）又稱為c-erbB-2基因，在促癌因素作用下參與正常細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育，會(huì)導(dǎo)致其突變、擴(kuò)增形成惡性腫瘤[1]。HER2基因是乳腺癌患者進(jìn)行靶向治療的重要靶點(diǎn)，對(duì)HER2基因擴(kuò)增進(jìn)行研究能夠指導(dǎo)乳腺癌治療方案制定和預(yù)后評(píng)估，能夠快速準(zhǔn)確選擇靶向治療藥物，提高治療效果[2]。乳腺癌患者HER2基因擴(kuò)增和蛋白過(guò)表達(dá)是患者預(yù)后較差、生存期較短的重要標(biāo)記，分別采用IHC（Iimmunohistoclemistry）、FISH（Fluorescence in Situ Hybridization）法對(duì)患者HER2進(jìn)行蛋白表達(dá)、基因檢測(cè)能夠?yàn)榕R床診斷、治療提供準(zhǔn)確指導(dǎo)[3]。本文選取2年間收集的50例患者資料，比較兩種檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值和一致性，具體如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2018年5月至2020年5月，收集的乳腺癌患者組織標(biāo)本和資料，患者均未行術(shù)前新輔助化療，共50例。患者均為女性，年齡36～75歲，平均（49.63±5.62）歲，中位數(shù)51歲。乳腺癌類型：浸潤(rùn)性小葉癌3例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌42，導(dǎo)管原位癌5例。組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)23例，Ⅲ級(jí)21例。

1.2 IHC方法

采用IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)，使用即用型非生物素免疫組化試劑盒、鼠抗人單克隆抗體，按照使用說(shuō)明嚴(yán)格操作[4]。將乳腺癌組織蠟塊制成4 μm切片，將載玻片經(jīng)多聚賴氨酸處理，溫水裱片，將切片脫蠟，微波抗原修復(fù)。采用PBS洗片并置入濃度3%甲醇H2O2中，加入一抗，放置冰箱。PBS充分洗片，將即用型試劑滴加入切片，放置室溫孵育20 min，采用DAB顯色，在顯微鏡下觀察信號(hào)，蘇木素復(fù)染、封固，PBS作為陰性對(duì)照。

1.3 FISH方法

組織經(jīng)10%福爾馬林固定，組織進(jìn)行4 μm厚度切片處理，切片在室溫下脫蠟水化，100℃沸水煮30 min，采用蛋白酶K消化5 min，采用60℃烘烤5 min，將10 μL探針和雜交緩沖液混合并在85℃水浴箱中變性5 min，脫水后加探針混合物于玻片，置于42℃雜交盒中12 h，取出玻片自然干燥，采用DAPI染色，15 min左右后放置熒光顯微鏡下觀察[5]。

1.4 結(jié)果判斷

1.4.1 IHC結(jié)果

根據(jù)美國(guó)臨床腫瘤協(xié)會(huì)制定的HER2檢測(cè)評(píng)分指南[6]，腫瘤細(xì)胞無(wú)著色為陰性（0），腫瘤細(xì)胞呈弱性并且胞膜著色不完整，或胞膜染色＜10%（1+），腫瘤細(xì)胞染色≥10%并且完整，或≤30%呈強(qiáng)性為陽(yáng)性（2+），腫瘤細(xì)胞膜染色＞30%并且完整呈強(qiáng)性為強(qiáng)陽(yáng)性（3+）。

1.4.2 FISH結(jié)果

在100倍物鏡下，采用特異濾光片隨機(jī)計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞。單個(gè)間期細(xì)胞核中綠色和紅色信號(hào)各2個(gè)視為正常細(xì)胞，紅色信號(hào)總數(shù)/綠色信號(hào)總數(shù)＜1.8為陰性（無(wú)基因擴(kuò)增），單個(gè)間期細(xì)胞核中紅色信號(hào)超過(guò)2個(gè)視為HER2基因擴(kuò)增[7]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，以χ2檢驗(yàn)，若P＜0.05存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用kappa值（k）評(píng)價(jià)FISH法與IHC法的一致性，若P＜0.05一致性較高。

2 結(jié)果

2.1 病理特征與HER2基因擴(kuò)增的關(guān)系

FISH檢測(cè)基因擴(kuò)增陽(yáng)性率為42.00%（21/50），HER2基因擴(kuò)增與患者組織性分級(jí)密切相關(guān)，組織學(xué)分級(jí)越高HER2基因擴(kuò)增陽(yáng)性率越高，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HER2基因擴(kuò)增與患者年齡、腫瘤大小、位置等其他病理特征無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1。

表1 病理特征與HER2基因擴(kuò)增的關(guān)系[n(%)]

2.2 IHC法與FISH法檢測(cè)一致性對(duì)比

采用IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)，陽(yáng)性例數(shù)24（48.00%），陽(yáng)性例數(shù)中2+患者14例，其中基因擴(kuò)增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因擴(kuò)增9例，符合率90.00%。兩種檢測(cè)方式結(jié)果具有較高的一致性，見(jiàn)表2。

表2 IHC法與FISH法檢測(cè)一致性對(duì)比[n(%)]

3 討論

HER2基因表達(dá)在多種類型癌癥中出現(xiàn)，例如胃癌、子宮癌、前列腺癌等，其中以乳腺癌為最典型[8]。對(duì)乳腺癌患者的HER2基因表達(dá)進(jìn)行研究，可以對(duì)患者腫瘤惡性程度、靶向治療、淋巴轉(zhuǎn)移以及預(yù)后起到積極作用，直接影響著患者的診療效果和生存期[9]。有國(guó)外研究顯示，在采用曲妥珠單抗治療乳腺癌患者時(shí)，HER2低表達(dá)患者的療效不確切，而療效與表達(dá)水平呈正比，HER2表達(dá)越高療效越佳。目前根據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥指南標(biāo)準(zhǔn)，IHC是乳腺癌HER2表達(dá)的首選檢測(cè)方式，而FISH法檢查過(guò)程人為干擾因素較少，客觀標(biāo)準(zhǔn)率較高，則作為HER2檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，大多學(xué)者認(rèn)為應(yīng)該在IHC法檢測(cè)基礎(chǔ)上進(jìn)行FISH復(fù)查[10]。IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)呈2+、3+的樣本，可能會(huì)出現(xiàn)基因擴(kuò)增陰性，研究認(rèn)為這與17號(hào)染色體多倍體相關(guān)，出現(xiàn)假陽(yáng)性?；诖耍狙芯窟x取50例乳腺癌患者分別進(jìn)行IHC法和FISH法檢測(cè)，對(duì)比其一致性。

研究顯示，F(xiàn)ISH檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增例數(shù)21例，占比42.00%，HER2基因擴(kuò)增陽(yáng)性與患者組織性分級(jí)相關(guān)，組織學(xué)分級(jí)越高HER2基因擴(kuò)增陽(yáng)性率越高，P＜0.05；HER2基因擴(kuò)增與患者年齡、腫瘤大小、位置等因素?zé)o關(guān)。采用IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)，陽(yáng)性（2+、3+）例數(shù)24例，2+患者14例，基因擴(kuò)增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因擴(kuò)增9例，符合率90.00%，一致性較高。綜上，采用IHC和FISH均能夠作為乳腺癌的診斷檢測(cè)手段，具有較高的臨床價(jià)值，并且兩種方式各具特點(diǎn)一致性高。在對(duì)IHC表達(dá)為1+或2+樣本進(jìn)行診斷時(shí)，可采取FISH法復(fù)查，提高判斷的準(zhǔn)確性。