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    早期2型糖尿病患者血清miR-125b表達(dá)與頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度的相關(guān)性*

    2021-01-23 07:27:00李江雁陳玉鳳吳蘇豫張瑩周艷紅
    廣東醫(yī)學(xué) 2021年1期
    關(guān)鍵詞:硬化試劑盒胰島素

    李江雁, 陳玉鳳, 吳蘇豫, 張瑩, 周艷紅

    新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科(河南新鄉(xiāng) 453000)

    2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)又稱成人發(fā)病型糖尿病,約占糖尿病患病人數(shù)的90%,其主要表現(xiàn)為胰島素功能受損,血糖升高[1]。近年來我國T2DM患病人數(shù)呈逐年上升趨勢(shì),其中以動(dòng)脈粥樣硬化為病理基礎(chǔ)的大血管病變是引起T2DM患者死亡的重要并發(fā)癥,嚴(yán)重威脅人們的身體健康[2]。研究表明,頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度(carotid intima-media thickness,CIMT)是評(píng)價(jià)早期動(dòng)脈粥樣硬化的重要指標(biāo),與T2DM患者動(dòng)脈損傷程度及范圍密切相關(guān)[3]。因此,對(duì)早期血管病變影響因素的篩查對(duì)于預(yù)測(cè)早期T2DM患者心血管事件的發(fā)生十分重要。miR-125b是miRNA的一種,越來越多的研究表明[4],miR-125b參與T2DM發(fā)病,可能是診斷T2DM的潛在新型生物標(biāo)志物。然而miR-125b在早期T2DM患者血清中的表達(dá)情況,及其與CIMT的關(guān)系仍不明確?;诖?,本研究通過檢測(cè)早期T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)水平,并探討其與頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度的相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2016年5月至2018年10月本院收治的230例早期T2DM患者為研究對(duì)象,男124例,女106例,年齡40~80歲,平均(50.81±15.18)歲,納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合早期T2DM疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];(2)經(jīng)空腹血糖水平、葡萄糖耐量試驗(yàn)確診;(3)年齡40~80歲;(4)患者自愿配合本次研究,并已簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)1型糖尿病患者;(2)嚴(yán)重心肝腎疾病患者;(3)有自身免疫疾病患者;(4)有糖尿病微血管并發(fā)癥患者;(5)有惡性腫瘤疾病患者。根據(jù)頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度將早期T2DM患者分為CIMT正常組(CIMT<0.9 mm)104例,男59例,女45例,年齡40~78歲,平均(50.06±10.22)歲,CIMT增厚組(CIMT≥0.9 mm)126例,男65例,女61例,年齡41~80歲,平均(51.43±12.08)歲。同期選擇78例來本院體檢的正常人作為對(duì)照組,男43例,女35例,年齡40~79歲,平均(50.24±12.37)歲,兩組性別、年齡等一般資料相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2 臨床資料收集 (1)對(duì)受試者均進(jìn)行性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、腰臀比(WHR)等一般資料的調(diào)查,收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、心率等生病體征檢測(cè)與登記。(2)于受試者清晨空腹時(shí),抽取靜脈血4 mL,分別完成空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FPG)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血清肌酐(Scr)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測(cè)。

    1.3 血清miR-125b水平檢測(cè) 采集血液標(biāo)本后,在離心機(jī)(3 000 r/min)上離心5 min,分離血清,按照miRNA提取試劑盒說明書,提取miRNA,按照TaqMan? MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的miRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,采用miScript SYBR Green PCR Kit檢測(cè)血清miR-125b相對(duì)表達(dá)水平,miRNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司,TaqMan? MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司,miScript SYBR Green PCR Kit購自北京冬璞泰和科技有限責(zé)任公司,具體步驟參見試劑盒說明書,反應(yīng)體系20 μL,反應(yīng)條件:95℃ 30 s;60℃ 30 s;75℃ 10 s,共35個(gè)循環(huán)。miR-125b及內(nèi)參U6的引物序列見表1。采用2-ΔΔCT法對(duì)miR-125b表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。

    表1 qRT-PCR引物序列

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料以“%”表示,兩組或多組間比較采用2檢驗(yàn),計(jì)量資料以表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較F檢驗(yàn),采用Pearson對(duì)早期T2DM患者CIMT與糖脂代謝指標(biāo)及miR-125b的相關(guān)性分析,采用多元線性回歸分析方法分析早期T2DM患者CIMT的影響因素,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 一般資料與生化指標(biāo)比較 3組受試者性別、年齡、SBP、SBP、心率、Scr、TC、TG、HDL-C與LDL-C相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對(duì)照組相比,CIMT正常組、CIMT增厚組T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著升高(P<0.05),其中CIMT增厚組T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著高于CIMT正常組(P<0.05)。見表1。

    2.2 受試者血清miR-125b表達(dá)比較 與對(duì)照組相比,CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),且CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)水平顯著高于CIMT正常組(P<0.05)。見表2。

    表1 兩組患者一般情況比較

    表2 受試者血清miR-125b表達(dá)比較

    2.3 CIMT與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示,CIMT與WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相關(guān)(P<0.05),與BMI、FINS等其他指標(biāo)無顯著相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

    表3 CIMT與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

    2.4 多元線性回歸分析影響CIMT的相關(guān)因素 以CIMT為因變量,以BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b為自變量,進(jìn)行多元線性回歸分析,結(jié)果顯示,WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT影響因素。見表4。

    表4 CIMT影響因素的多元線性回歸分析

    3 討論

    糖尿病是一種涉及基因之間復(fù)雜的相互作用的多因素內(nèi)分泌代謝疾病。據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,2011年全球糖尿病患病人數(shù)已超過3.7億,預(yù)計(jì)2030年,糖尿病患者將發(fā)展至5.5億[6]。T2DM是一種常見的糖尿病類型,約占糖尿病患者總?cè)藬?shù)的90%,由于肥胖、活動(dòng)少和應(yīng)激等誘因的影響,導(dǎo)致患者胰島素分泌能力及自身對(duì)胰島素的敏感性降低,引發(fā)疾病[7]。調(diào)查顯示,受人們飲食結(jié)構(gòu)及生活習(xí)慣的改變的影響,我國T2DM發(fā)病率及病死率有呈不斷上升的趨勢(shì)。其中大血管病變是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因,而動(dòng)脈粥樣硬化是大血管病變的基礎(chǔ)[8]。因此及早發(fā)現(xiàn)T2DM患者的動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的危險(xiǎn)因素,對(duì)于診斷及控制糖尿病患者大血管病變的發(fā)展十分重要。CIMT是動(dòng)脈粥樣硬化的早期標(biāo)志物,與心血管事件的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著升高,其中CIMT增厚組T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著高于CIMT正常組,提示BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C在早期T2DM患者血清中表達(dá)上調(diào),可能影響T2DM患者CIMT,可能為早期T2DM患者動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素,但仍需進(jìn)一步篩查。

    微小RNA(microRNA,miRNA)是一類單鏈非編碼RNA分子,平均長(zhǎng)約22 nt,通過與3′非翻譯區(qū)(3′-UTR)結(jié)合調(diào)節(jié)mRNA表達(dá),每種miRNA都能夠靶向多種mRNA[9]。已有多項(xiàng)研究表明miRNA可參與T2DM疾病的發(fā)展[10]。王昱等[11]研究表明,miRNA-296、miRNA-9在T2DM患者血漿中均表達(dá)下調(diào),且與胰島素水平呈負(fù)相關(guān)。有研究表明,miR-125能夠參與調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)通路,其表達(dá)水平增加可能與T2DM患者胰島素抵抗有關(guān)。Shen等[4]研究表明miR-125b在T2DM患者外周血單核細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),可能參與了T2DM的發(fā)病機(jī)制。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)水平顯著升高,且CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)水平顯著高于CIMT正常組,提示miR-125b與CIMT增厚有關(guān),可能參與早期T2DM患者動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,可能是診斷T2DM的潛在新型生物標(biāo)志物。

    T2DM患者動(dòng)脈粥樣硬化是多種因素作用的結(jié)果,其中血糖及HOMA-IR升高是其發(fā)生的高危因素。血管內(nèi)皮障礙及糖代謝、脂代謝異常是其發(fā)病的重要原因[12]。周夢(mèng)云等[13]研究表明,CIMT與患者年齡及SBP呈正相關(guān)。陳超等[14]研究表明,CIMT與糖尿病病程、FPG及HOMA-IR呈正相關(guān),多元線性回歸顯示,F(xiàn)PG是CIMT的影響因素。孫振杰等[15]研究表明,CIMT與糖尿病病程、SBP、HbA1C、WHR呈正相關(guān),其中糖尿病病程、HbA1C是CIMT的影響因素。本研究結(jié)果顯示,CIMT與WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相關(guān),多元線性回歸分析結(jié)果顯示,WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT的影響因素。提示miR-125b可能參與T2DM疾病的發(fā)展,可能在一定程度上影響T2DM患者頸動(dòng)脈粥樣硬化的程度。

    綜上所述,早期T2DM患者血清中miR-125b表達(dá)上調(diào),且其表達(dá)水平與患者CIMT正相關(guān),是影響T2DM患者CIMT的因素,可能參與早期T2DM患者動(dòng)脈粥樣硬化過程。然而本研究?jī)H探究了早期T2DM患者血清中miR-125b的表達(dá)情況,具體作用機(jī)制還不清楚,仍需進(jìn)一步深入研究。

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