4種常用水產(chǎn)藥物對(duì)西雜鱘幼魚的急性毒性試驗(yàn)

曾澤國 溫旭 方園 吳真 鐘穎良 劉斌 張家海 張建銘 曾慶祥

(1 江西省贛州市水產(chǎn)研究所,江西贛州 341100;2 浙江省德清縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，浙江湖州 313200)

西雜鱘是雌性史氏鱘(Acipenserschrenckii)和雄性西伯利亞鱘(Acipenserbaerii)的雜交子一代，具有抗逆性強(qiáng)、病害少、適溫性廣等優(yōu)良的生物學(xué)性狀和較高的營養(yǎng)價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是具有特色的名優(yōu)水產(chǎn)品，發(fā)展前景廣闊。近年來，西雜鱘在四川、湖北、云南、福建和江西等省份得到了廣泛推廣和養(yǎng)殖，逐漸成為漁業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的理想養(yǎng)殖品種。目前對(duì)西雜鱘的研究主要集中在苗種培育和人工養(yǎng)殖等方面[1-3]，尚未見有關(guān)水產(chǎn)藥物對(duì)西雜鱘幼魚急性毒性的報(bào)道。西雜鱘對(duì)水環(huán)境的變化反應(yīng)十分靈敏，當(dāng)水體中的污染物毒性達(dá)到一定程度時(shí)，魚體會(huì)產(chǎn)生一系列急性毒性反應(yīng)，如行為異常、生理功能紊亂、組織細(xì)胞病變等，甚至出現(xiàn)死亡。高錳酸鉀、溴氯海因、氯化鈉、聚維酮碘是4種常用的水產(chǎn)消毒藥物，研究西雜鱘幼魚對(duì)這些常用水產(chǎn)藥物的急性毒性反應(yīng)，確定每種藥物的半致死濃度(LC50)和安全濃度(SC)，可為西雜鱘的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)，有助于促進(jìn)西雜鱘養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用西雜鱘幼魚來自江西省贛州市龍南縣武當(dāng)鎮(zhèn)惠澤鱘魚養(yǎng)殖場(chǎng)。試驗(yàn)魚平均體長11.40 cm，平均體質(zhì)量10.10 g。篩選試驗(yàn)魚并用氯化鈉將其消毒(3%氯化鈉水溶液藥浴5～10 min)后，在水族箱中馴養(yǎng)7 d。試驗(yàn)用水與馴養(yǎng)用水相同，均為經(jīng)過濾沉淀的山泉水，水質(zhì)符合飲用水國家標(biāo)準(zhǔn)。馴養(yǎng)期間，每天保持12～16 h光照，每日定時(shí)定量投喂不含任何藥物的飼料，清除排泄物，每天換水1次，保持水質(zhì)清澈透明。馴養(yǎng)48 h后開始記錄試驗(yàn)魚的死亡率，若7 d內(nèi)死亡率大于10%，則舍棄整批試驗(yàn)魚；若死亡率在5%～10%，則繼續(xù)馴養(yǎng)7 d；若死亡率小于5%，則可用于試驗(yàn)。選擇身體健康，反應(yīng)靈敏，大小基本一致的幼魚，隨機(jī)分組后進(jìn)行試驗(yàn)。

每天測(cè)定水溫、pH和溶解氧。試驗(yàn)期間，水溫20～25 ℃，pH 6.0～8.5，溶解氧>5 mg/L。

高錳酸鉀、溴氯海因、氯化鈉、聚維酮碘試劑均為分析純，購于南昌毓頓科技有限公司。試驗(yàn)時(shí)用蒸餾水將各試驗(yàn)藥物稀釋配成一定質(zhì)量濃度的母液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 試驗(yàn)方法

室溫條件下，在規(guī)格48 cm×34 cm×25 cm(長×寬×高)的塑料方桶中進(jìn)行試驗(yàn)，并以自然狀態(tài)作為對(duì)照。試驗(yàn)前將方桶在日光下曝曬1周后，用3%的氯化鈉水溶液浸泡12 h以上，洗凈。試驗(yàn)期間，每12 h更換1次藥液，以保持藥液濃度。所有試驗(yàn)組24 h連續(xù)充氧，不投飼。

先通過靜水停食法預(yù)備試驗(yàn)[4-9]初步確定試驗(yàn)藥物濃度的大致范圍，采用等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置5個(gè)濃度試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組，每組放試驗(yàn)魚10尾，并設(shè)1個(gè)重復(fù)。在試驗(yàn)過程中，連續(xù)觀察受試魚的行為、中毒癥狀、死亡效應(yīng)。如5 min內(nèi)多次刺激無反應(yīng)即可判斷試驗(yàn)魚死亡。將死亡魚及時(shí)撈出，并記錄死亡時(shí)間。記錄各試驗(yàn)組24、48、72、96 h時(shí)魚的存活情況。

表1 聚維酮碘對(duì)西雜鱘幼魚的毒性急性試驗(yàn)結(jié)果

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，使用改進(jìn)寇氏法[6,9]計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC50)。

LC50=Log-1[Xi-i(∑p-0.5)]

(1)

式(1)中，Xi為最高劑量組對(duì)數(shù)值，i為組距(相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)值之差)，∑p為死亡率總和。

安全濃度(SC)是長期、連續(xù)接觸仍對(duì)生物的生存、生長、繁殖無不良影響的濃度。安全濃度的計(jì)算公式[9-10]如下。

SC=48 h LC50×0.3/(24 h LC50/48 h LC50)2

(2)

2 結(jié)果

2.1 西雜鱘幼魚對(duì)4種藥物的中毒反應(yīng)

當(dāng)高錳酸鉀、溴氯海因、氯化鈉、聚維酮碘達(dá)到一定濃度時(shí)，西雜鱘幼魚均有相似的中毒反應(yīng)，表現(xiàn)為游動(dòng)緩慢、翻肚、沖撞，逐漸失去行動(dòng)能力直至死亡。死亡后的魚體通常表現(xiàn)為尾部卷曲、鰓部出血、吻部及腹部充血、體表黏液增多并伴有體色改變或染有藥液顏色。聚維酮碘中毒的魚體腹部染有黃色，溴氯海因、氯化鈉中毒的魚體發(fā)白，高錳酸鉀中毒的魚體腹部染有紫色。

2.2 聚維酮碘的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，采用等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置6.50、7.15、7.87、8.65、9.50 mg/L共5個(gè)質(zhì)量濃度梯度組。試驗(yàn)結(jié)果見表1。當(dāng)聚維酮碘質(zhì)量濃度為9.50 mg/L時(shí)，1 h內(nèi)試驗(yàn)魚即開始出現(xiàn)死亡，24 h死亡率達(dá)86.70%，48 h幼魚全部死亡。當(dāng)聚維酮碘質(zhì)量濃度為8.65 mg/L時(shí)，6 h出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)30.00%，96 h死亡率達(dá)83.30%。當(dāng)聚維酮碘質(zhì)量濃度為7.87 mg/L時(shí)，10 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率為3.30%，96 h死亡率為20.00%。當(dāng)聚維酮碘質(zhì)量濃度為7.15 mg/L時(shí)，24 h內(nèi)未出現(xiàn)幼魚死亡，28 h開始出現(xiàn)死亡，48 h內(nèi)死亡率為3.30%，96 h死亡率為10.00%。當(dāng)聚維酮碘質(zhì)量濃度為6.50 mg/L時(shí)，96 h試驗(yàn)幼魚未出現(xiàn)死亡。隨著作用時(shí)間的延長，聚維酮碘對(duì)試驗(yàn)魚的半致死質(zhì)量濃度(LC50)逐漸降低，24、48、72、96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為8.81、8.50、8.34、8.17 mg/L，安全質(zhì)量濃度(SC)為2.37 mg/L。

2.3 溴氯海因的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，采用等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置了0.70、0.79、0.90、1.02、1.15 mg/L共5個(gè)質(zhì)量濃度梯度組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)溴氯海因質(zhì)量濃度為1.15 mg/L時(shí)，第2 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)83.30%，48 h試驗(yàn)幼魚全部死亡。當(dāng)溴氯海因質(zhì)量濃度為1.02 mg/L時(shí)，5 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)53.30%，96 h死亡率達(dá)83.30%。當(dāng)溴氯海因質(zhì)量濃度為0.90 mg/L時(shí)，6 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率為30.00%，96 h死亡率為40.00%。當(dāng)溴氯海因質(zhì)量濃度為0.79 mg/L時(shí)，11 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率為3.30%，96 h死亡率為13.30%。當(dāng)溴氯海因質(zhì)量濃度為0.70 mg/L時(shí)，96 h內(nèi)試驗(yàn)幼魚未出現(xiàn)死亡。隨著作用時(shí)間的延長，溴氯海因?qū)τ佐~的半致死質(zhì)量濃度(LC50)逐漸降低，24、48、72、96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為0.98、0.95、0.94、0.91 mg/L，安全質(zhì)量濃度(SC)為0.27 mg/L(見表2)。

表2 溴氯海因?qū)ξ麟s鱘幼魚的毒性急性試驗(yàn)結(jié)果

表3 氯化鈉對(duì)西雜鱘幼魚的毒性急性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 氯化鈉的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，采用等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置了11 800.00、12 684.00、13 407.00、14 171.00、14 900.00 mg/L共5個(gè)質(zhì)量濃度梯度組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)氯化鈉質(zhì)量濃度為14 900.00 mg/L時(shí)，1 h即出現(xiàn)幼魚死亡，48 h試驗(yàn)幼魚全部死亡，死亡率達(dá)100%。當(dāng)氯化鈉質(zhì)量濃度為14 171.00 mg/L時(shí)，4 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)40.00%，96 h死亡率達(dá)93.30%。當(dāng)氯化鈉質(zhì)量濃度為13 407.00 mg/L時(shí)，7 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)33.30%，96 h死亡率達(dá)56.70%。當(dāng)氯化鈉質(zhì)量濃度為12 684.00 mg/L時(shí)，18 h時(shí)出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率為6.70%，96 h死亡率達(dá)40.00%。當(dāng)氯化鈉質(zhì)量濃度為118 000 mg/L時(shí)，96 h內(nèi)未出現(xiàn)幼魚死亡。隨著作用時(shí)間的延長，氯化鈉對(duì)西雜鱘幼魚的半致死質(zhì)量濃度(LC50)逐漸降低，24、48、72、96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為13 954.78、13 545.83、13 292.42、13 139.48 mg/L，安全質(zhì)量濃度(SC)為3 829.06 mg/L(見表3)。

2.5 高錳酸鉀的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，采用等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置了2.10、2.34、2.61、2.90、3.20 mg/L共5個(gè)質(zhì)量濃度梯度組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為3.20 mg/L時(shí)，1 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率達(dá)86.70%，48 h內(nèi)試驗(yàn)幼魚全部死亡。當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為2.90 mg/L時(shí)，5 h開始出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率36.70%，96 h死亡率達(dá)66.70%。當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為2.61 mg/L時(shí)，17 h出現(xiàn)幼魚死亡，24 h死亡率為10.00%，96 h幼魚死亡率為16.70%。當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為2.34 mg/L時(shí)，48 h內(nèi)未出現(xiàn)幼魚死亡，96 h死亡率為3.30%。當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為2.10 mg/L時(shí)，96 h內(nèi)未出現(xiàn)幼魚死亡。隨著作用時(shí)間的延長，高錳酸鉀對(duì)西雜鱘幼魚的半致死濃度(LC50)逐漸降低，24、48、72、96 h的半致死質(zhì)量濃度分別為2.94、2.89、2.82、2.77 mg/L，安全質(zhì)量濃度(SC)為0.84 mg/L(見表4)。

表4 高錳酸鉀對(duì)西雜鱘幼魚的毒性急性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 聚維酮碘的藥效及使用

聚維酮碘是碘伏消毒劑，被廣泛用于魚體皮膚消毒，是較為有效的廣譜消毒殺菌劑[11]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，聚維酮碘對(duì)西雜鱘幼魚的安全質(zhì)量濃度為2.37 mg/L，稍高于同類的雜交鱘(1.89 mg/L)[6]，說明西雜鱘對(duì)聚維酮碘的耐受性較雜交鱘強(qiáng)。與許多常見養(yǎng)殖魚類相比，西雜鱘幼魚對(duì)聚維酮碘的耐受性更強(qiáng)一些，其安全質(zhì)量濃度是泥鰍(0.27 mg/L)[12]的近10倍，是黃顙魚(0.062 9 mg/L)[13]的37倍，略高于黃尾鲴(2.06 mg/L)[14]。這可能是由于西雜鱘皮膚裸露、無鱗片且分泌有大量黏液，這些黏液對(duì)魚體有良好的保護(hù)作用。試驗(yàn)表明，聚維酮碘對(duì)西雜鱘幼魚的安全濃度高于生產(chǎn)中常用劑量，因此可作為生產(chǎn)中首選的消毒殺菌藥物。

3.2 溴氯海因的藥效及使用

溴氯海因是1種氧化性殺菌劑，通過氧化生物體內(nèi)的磷酸脫氫酶滅殺微生物，在漁業(yè)生產(chǎn)中的常用劑量為0.3～0.4 mg/L[5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，溴氯海因?qū)ξ麟s鱘幼魚的安全質(zhì)量濃度為0.27 mg/L，略低于漁業(yè)生產(chǎn)中常用的劑量。有研究表明，溴氯海因?qū)S顙魚的安全質(zhì)量濃度為0.86 mg/L[15]，對(duì)福瑞鯉的安全質(zhì)量濃度為11.70 mg/L[16]，對(duì)草魚的安全質(zhì)量濃度是4.68 mg/L[17]，對(duì)白斑狗魚的安全質(zhì)量濃度是1.10 mg/L[5]，均高于對(duì)西雜鱘的安全濃度，可見西雜鱘對(duì)溴氯海因的敏感性高于許多常見魚類。因此，不建議在養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用溴氯海因。

3.3 氯化鈉的藥效及使用

NaCl是淡水養(yǎng)殖中常見的消毒藥物，可防治細(xì)菌性、真菌和寄生蟲等魚類病害[10]。NaCl是通過改變病原體滲透發(fā)揮功效的，但當(dāng)NaCl濃度過高時(shí)，會(huì)引起魚體脫水、體表黏液減少，從而降低魚體活力[10]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，NaCl對(duì)西雜鱘幼魚的安全質(zhì)量濃度為3 829.06 mg/L，是梭鱸魚(980.02 mg/L)[18]的約3.9倍，是金魚(704.20 mg/L)[19]的約5.4倍。這說明西雜鱘對(duì)鹽度的耐受性較許多養(yǎng)殖魚類更強(qiáng)。因此，氯化鈉在生產(chǎn)過程中可放心使用，但應(yīng)當(dāng)適當(dāng)控制用量和時(shí)間。

3.4 高錳酸鉀的藥效及使用

KMnO4在水產(chǎn)養(yǎng)殖中一般用于防治細(xì)菌性疾病和吸蟲類的寄生蟲[13,20]，在西雜鱘養(yǎng)殖過程中使用較多，常用于治療爛尾病等。但當(dāng)養(yǎng)殖水體呈現(xiàn)堿性或弱酸性時(shí)，KMnO4會(huì)產(chǎn)生MnO2，引起養(yǎng)殖魚體的病理變化，進(jìn)而影響?zhàn)B殖生產(chǎn)[21]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，KMnO4對(duì)西雜鱘幼魚的安全質(zhì)量濃度為0.84 mg/L，遠(yuǎn)高于同類品種雜交鱘(0.1 mg/L)[6]，說明西雜鱘對(duì)KMnO4的抗逆性比雜交鱘強(qiáng)。另外，KMnO4對(duì)西雜鱘的安全質(zhì)量濃度相對(duì)于花鰻鱺(0.74 mg/L)[10]、泥鰍(0.75 mg/L)[22]、鰱(0.42 mg/L)[23]等許多魚類要高。但KMnO4屬強(qiáng)氧化性藥物，對(duì)于魚體的抗氧化系統(tǒng)和肝臟組織會(huì)有一定的損傷。因此建議，在使用高錳酸鉀后，應(yīng)適當(dāng)投喂添加抗氧化劑和保肝藥物的餌料，以利于鱘魚恢復(fù)。