高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

曾銀珠，楊鳳瓊

（廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東廣州 510663）

在高效液相色譜技術(shù)是色譜法的一個重要分支，其在實際應(yīng)用中以液體為流動相，其與單獨的任何一種色譜檢測技術(shù)相比，有著快速和準確的優(yōu)點。當前，高效液相色譜技術(shù)與質(zhì)譜分析方法也得到了高度融合，產(chǎn)生了高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，其在有機化學(xué)領(lǐng)域得到了重要應(yīng)用，進而為藥物分析工作提供了有力支持。

1 常見的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

1.1 四級桿質(zhì)譜

四級桿質(zhì)譜法主要使用四級桿質(zhì)量分析器進行，四級桿質(zhì)量分析器的內(nèi)部電路結(jié)構(gòu)相對較為簡單，只需要通過調(diào)節(jié)內(nèi)部電路的電場強度，就可以實現(xiàn)質(zhì)量掃描。如同時連用多臺四級桿質(zhì)量分析器，就可以實現(xiàn)多重質(zhì)譜分析的功能。當前，三重四級桿質(zhì)譜應(yīng)用相對較多。

1.2 飛行時間質(zhì)譜

飛行時間質(zhì)譜實際上是一種質(zhì)譜儀，其主要功能是鑒定離子成分，工作原理是通過測量離子飛過一定距離所消耗的時間得到質(zhì)荷比，而后通過分析該參數(shù)來確定待測物的離子成分。這種質(zhì)譜儀具有靈敏度高、精密度高分辨率高以及無質(zhì)量檢測上限等優(yōu)點，在定性分析領(lǐng)域和指紋圖譜領(lǐng)域均得到了越來越廣泛的應(yīng)用。

1.3 電噴霧質(zhì)譜

電噴霧質(zhì)譜屬于一種離子化技術(shù)手段，但與其他的離子化方式又有所不同。同時，如果這種方法在標準大氣壓狀態(tài)下使用，則又可稱之為大氣壓電離。目前，這種方法應(yīng)用較少，尚處于初期階段。有研究人員使用這種方法對山楂炭的甲醇提取物進行了分析，得到了山楂炭在不同溫度下處理后的特征指紋圖譜，進而全面分析了山楂炭的綜合特征圖譜，得到了山楂炭的穩(wěn)定性等一系列信息，進而為質(zhì)量標準控制提供了依據(jù)[1]。

2 在藥物分析和鑒定中的應(yīng)用

藥物結(jié)構(gòu)不止包括藥物中的有效成分，也包括藥物中雜質(zhì)成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)鑒定相對復(fù)雜，對技術(shù)水平有著很高的要求。為此，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)就得到了應(yīng)用，其應(yīng)用在藥物結(jié)構(gòu)鑒定中具有非常重要的現(xiàn)實意義。

2.1 在化學(xué)藥品分析中的應(yīng)用

為了防止內(nèi)源物質(zhì)對檢測結(jié)果進行干擾，有研究人員使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對大鼠血漿中的埃索美拉唑含量進行檢測。通過對大量檢測結(jié)果進行擬合分析，發(fā)現(xiàn)測定結(jié)果與變量之間存在線性關(guān)系，且擬合度良好，r2=0.999 7。從分析結(jié)果來看，大鼠血漿中埃索美拉唑的質(zhì)量濃度范圍在0.2～20 ng/mL，且無論質(zhì)量濃度如何，都具有較高的回收率，回收率超過90%[2]。

2.2 在藥物代謝動力學(xué)分析中的應(yīng)用

藥物代謝動力學(xué)分析是指對藥物在機體內(nèi)所發(fā)揮的作用進行定量分析。具體來看，當前，藥物代謝動力學(xué)分析的應(yīng)用范圍已經(jīng)拓展到了藥物體內(nèi)反應(yīng)過程方面，并對不同藥物成分之間的相互作用也進行了一定的研究[3]。如以苦參堿和氧化苦參堿為對象，研究了氧化苦參堿在大鼠體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物，健康大鼠腹腔肌注40 mg/ kg氧化苦參堿，收集0～24 h的尿樣，尿樣中的代謝物經(jīng)C18小柱進行富集與純化后，分析結(jié)果表示，在大鼠尿樣中有原藥及其6種Ⅰ相氧化及還原代謝產(chǎn)物,其中苦參堿為主要代謝產(chǎn)物，未檢出Ⅱ相代謝物。由此可見，對于一些較為復(fù)雜的中藥藥方或中成藥制劑而言，這種分析方法也有著重要作用，而為了更好地分析這些內(nèi)容，就必須使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行分析。

2.3 在中藥活性鑒定中的應(yīng)用

中藥活性鑒定過程中通常只使用較少的藥量，為此，必須使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器對其進行檢測，檢測過程中，主要檢測的內(nèi)容是樣品的保留時間、紫外吸收光譜和質(zhì)譜中的分子離子峰，以及具有特征性的碎片峰。在得到檢測結(jié)果后，只需要將其與標準化合物的數(shù)據(jù)進行對照，就可以準確鑒別出中藥內(nèi)活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。研究人員利用這種方法，對玫瑰花抗炎活性成分進行研究，確定了玫瑰花中含有的沒食子酸、4-O-沒食子?；鼘幩?、沒食子酸甲酯等數(shù)種有效活性成分在抗炎癥中可能起到重要作用，也為玫瑰花成分的進一步應(yīng)用提供了有效參考[4]。另有研究人員對中藥材五味子進行了體外抑菌方面的分析研究，根據(jù)質(zhì)譜分析，初步鑒定出其中的奎尼酸、蘋果酸及其異構(gòu)體、檸檬酸、咖啡酰奎尼酸、莽草酸等十余種化合物可能對抑菌有作用，并進一步對五味子的抑菌活性部位進行了測定，為開發(fā)天然無污染的抑菌藥品提供了研究思路[5]。

實際上，很多中藥材中，起到某種功能的有效成分往往并非單一組分，而是由多種化合物共同發(fā)揮作用。為此，必須明確這些化合物具體的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，從而對藥物有效成分的藥效學(xué)和藥動學(xué)進行進一步研究?；诖耍醒芯咳藛T從銀黃顆?；钚猿煞值姆治龉ぷ魅胧?，開展了相關(guān)研究，通過一系列定性和定量分析后發(fā)現(xiàn)，銀黃顆粒中含有14種可能有效的成分，這其中又有12種化合物的保留時間、相對分子質(zhì)量和質(zhì)譜信息已經(jīng)得到精準確定[6]。由此可見，這種分析方法對快速準確地分析藥物有效成分以及對藥品質(zhì)量的評價和控制都有著重要的作用。

2.4 在復(fù)雜成分篩選中的應(yīng)用

目前，仍有一些成分較為復(fù)雜的藥物，其具體的成分組成、藥效機制、活性成分和代謝途徑仍未得到精準確定，使得這些藥物的推廣應(yīng)用受到很大阻礙。為此，必須采用一種科學(xué)合理的分析方法來對這種藥物進行一系列分析。在這種情況下，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)就得到了有效應(yīng)用[7]。近年來，國內(nèi)外很多研究人員應(yīng)用此項技術(shù)對一些較為復(fù)雜的藥物進行了分析，如一些研究人員應(yīng)用此項技術(shù)對龍膽科和豆科的多種植物進行了成分分析，發(fā)現(xiàn)在使用這種方法的前提下，即使是樣品的含量很低，也能快速準確地分析出這些植物中具有生物活性的化合物，是液質(zhì)結(jié)合核磁的作用[8]。在得出這一研究結(jié)論后，又有研究人員在此基礎(chǔ)上對中藥中的皂苷類成分進行了分析，結(jié)合同類已知結(jié)構(gòu)化合物的裂解規(guī)律，給出大量結(jié)構(gòu)信息，或結(jié)合其它檢測方法，即可對未知成分結(jié)構(gòu)進行直接分析，如采用HPLC-MS聯(lián)用儀，鑒定中藥中的皂苷類有效成分，分離鑒定出保肝活性的茵陳色原酮有，不僅得到了大量的同分異構(gòu)體，還得到了一系列新的化合物[9]。

2.5 在藥物雜質(zhì)分析中的應(yīng)用

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的靈敏度較高，還具有選擇性分析的功能，對藥物合成過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物和中間體等物質(zhì)都能夠?qū)崟r檢測和精準分析。這項技術(shù)目前已經(jīng)在藥物雜質(zhì)分析中得到廣泛應(yīng)用，也是相關(guān)工作人員的首要選擇。有研究人員根據(jù)這種方法對頭孢拉定中的未知雜質(zhì)進行了分析，推斷出這種雜質(zhì)是雙氫頭孢拉定，并進一步推斷出該雜質(zhì)大概率來自藥物中間體雙氫苯甘氨酸中的雜質(zhì)四氫苯甘氨酸引發(fā)的副反應(yīng)所致[10]。由此可見，這種方法能夠準確鑒定藥品中的雜質(zhì)成分，并能夠分析出產(chǎn)生雜質(zhì)的原因，為今后藥品生產(chǎn)過程中的工藝優(yōu)化和除雜提供了有效依據(jù)[11]。

3 藥物在體內(nèi)代謝研究中的應(yīng)用

在藥學(xué)領(lǐng)域，藥物的體內(nèi)代謝研究一直以來都是研究重點，發(fā)展速度也相對較快。在這方面的研究中，主要是通過對人或動物體內(nèi)體液或各組織器官中藥物及其代謝產(chǎn)物的濃度進行分析，了解藥物在體內(nèi)隨服藥時間或注射時間的變化而發(fā)生的變化。通過這些分析，可以計算出藥物代謝動力學(xué)的相關(guān)參數(shù)，并獲取藥物轉(zhuǎn)變和代謝的具體方式。這對于藥物的進一步研發(fā)升級和藥物在臨床上的具體應(yīng)用等方面都有著重要的現(xiàn)實意義。

研究人員通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，以大鼠為實驗對象，對止咳寶片的代謝產(chǎn)物進行了分析鑒定。鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，止咳寶片中的阿片類生物堿、甘草苷和甘草酸等成分通過葡萄糖醛酸化、硫酸化、脫甲基化和水解等多種方式，生成了超過30種的代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物在大鼠的血漿、尿液和糞便中均被檢出[12]。在此基礎(chǔ)上，又有研究人員從代謝組學(xué)研究的角度，使用某種降糖藥物對已經(jīng)患2型糖尿病血管病變的大鼠進行了研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該種降糖藥物能夠有效保護大鼠血管內(nèi)皮細胞，防止2型糖尿病引發(fā)血管進一步病變。從原理上來看，這種藥物的作用機制可能源于對氨基酸代謝、膽汁酸和脂代謝方面的調(diào)整，以及對氧化應(yīng)激狀態(tài)的一些調(diào)整[13]。

4 在生物大分子研究中的應(yīng)用

隨著科技的進一步發(fā)展，研究人員對藥物的研發(fā)已經(jīng)不局限于化學(xué)藥品和天然植物成分的提取，開始傾向于對生物制劑方面的研究。生物制劑又被稱為生物大分子藥物，主要包括多肽、蛋白質(zhì)、抗體、多糖和核酸等類型，有著藥效好和毒副作用低的優(yōu)點。目前，生物制劑已經(jīng)在疾病治療中得到廣泛應(yīng)用，特別是對于腫瘤和心腦血管系統(tǒng)疾病等一些重大疾病方面，其應(yīng)用更為廣泛和深入[14]。

生物大分子藥物目前也存在著一些制約其有效應(yīng)用的因素，主要包括以下3個方面：（1）生物大分子藥物的分子量大，難以透過細胞膜，使得這些藥物對一部分疾病的治療作用非常有限；（2）生物大分子藥物的結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，且合成過程中副產(chǎn)物較多，使得其分離純化難度極高，很難得到高純的成品，這也使得這些藥物的成本居高不下，限制了其應(yīng)用范圍；（3）生物大分子藥物對光照、溫度和酸堿度等環(huán)境因素要求過高，任何環(huán)境因素的變化都容易導(dǎo)致生物大分子藥物的性狀發(fā)生改變，使得這些藥物失去作用。以上這些因素，都對生物大分子藥物的進一步推廣應(yīng)用造成了很大限制，因此，仍需要對其進行進一步的分析和研究。

5 結(jié)語

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有高靈敏度、高效率和高精確度等諸多優(yōu)點，是促進現(xiàn)代藥物研究與發(fā)展的有力支撐。為此，相關(guān)研究人員也要用好這一先進的技術(shù)，要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，不斷研究創(chuàng)新，積極擴大這項技術(shù)的研究領(lǐng)域和適用范圍。