血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平對乳腺癌化療療效的預(yù)測價值

魏 娜，倪 青，戴 民，王 舒，侯 凈，陳 歡 (貴州省人民醫(yī)院乳腺外科，貴州 貴陽 550002)

目前，乳腺癌已成為全球女性最常見的惡性腫瘤，臨床對于此病多采取手術(shù)、放療、化療和內(nèi)分泌等綜合治療，其中新輔助化療在乳腺癌的治療中有重要作用，如可使部分無法手術(shù)的患者得到手術(shù)的機(jī)會，降低腫瘤期別[1]。然而由于患者的個體差異，其對化療的敏感性也各不相同，若接受到無效或低效的新輔助化療，不但影響最終療效，也在無形中增加患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)與精神壓力[2]。因此，如何有效預(yù)測患者的化療敏感性，從而為患者選擇最佳化療方案具有重要意義。近年來，有研究提出，乳腺癌耐藥蛋白(breastcancer resistance protein，BCRP)在預(yù)測乳腺癌化療療效中具有重要價值[3]，然而究竟有何價值，本文展開詳細(xì)描述，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2017年1月～2018年6月我院收治的65例乳腺癌患者設(shè)置為乳腺癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：①均符合乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②對本次研究項目知情同意；③無其他重要臟器功能受損；④意識清醒。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期乳腺癌；②乳腺癌合并腦轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移；③患有其他腫瘤性疾病?；颊吣挲g25～38歲，平均(32.51±5.28)歲，右側(cè)乳癌36例，左側(cè)29例；文化水平：初中及以下15例，高中32例，大專及以上18例。另選取該時間段內(nèi)來我院體檢的60例健康人群設(shè)置為對照組，年齡18～37歲，平均(31.78±5.15)歲，文化水平：初中及以下10例，高中33例，大專及以上17例。所選對象均自愿參與，近3個月內(nèi)均未服用性激素類藥物，無心腦血管病變及肝功能不全，且無其他自身免疫性疾病。本次研究工作獲得了院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。兩組對象的一般資料對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法:乳腺癌組所有患者術(shù)前均行空心針穿刺活檢明確診斷并組織學(xué)標(biāo)本接受病理科的免疫組化染色，化療方案為EC-T：表阿霉素 90 mg/m2靜脈滴注、環(huán)磷酰胺600 mg/ m2靜脈滴注，序貫多西他賽100 mg/m2靜脈輸注。一個周期進(jìn)行21 d，共行8個周期，對化療后符合手術(shù)的患者按流程完成手術(shù)切除。

1.2.2儀器與方法:采用Invitrogen 公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑；Promega生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)和PCR擴(kuò)增試劑(引物序列：R：5′-GACTGGATGAGGTCGTCCGTTTCC- 3′；F：5′- CAGCCGTGGAACTCTT TGGGTAGAGAAG-3′)；PCR 儀購自Bio-rad 公司；小鼠抗BCRP單克隆抗體購自Abcam，UK；乳膠珠購自美國Life Technologies 公司。

1.2.3標(biāo)本采集:血漿微泡采集方法：收集兩組對象入院當(dāng)天晨血5ml，乳腺癌組需收集化療前和完成所有化療后兩次血。要求其隔夜空腹10 h以上，靜脈抽血，離心收集上清，將血清分裝到干凈的試管中，3 000 r/min(2 000 g)離心3 min，取上層清液5 ml，留血漿，按照血漿與磷酸鹽緩沖液(PBS)1∶2 的比例稀釋血漿樣本，在分析之前，用20 μl PBS 重懸后保存在-80 ℃冰箱待用，分析時將標(biāo)本于48 h內(nèi)室溫下復(fù)融，

1.2.4檢測方法:微泡標(biāo)本和組織標(biāo)本分別用Trizol 裂解液提取總RNA，采用MMLV試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄并得到cDNA 標(biāo)本，按照實(shí)時定量PCR 方法進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增曲線并對基因的mRNA相對含量進(jìn)行計算。

1.3觀察指標(biāo)：依據(jù)術(shù)后病理Miller-Payene分級系統(tǒng)評價新輔助化療效果[5]，并將結(jié)果分為5個等級：1級：侵襲性癌細(xì)胞沒有變化，或者只有個別癌細(xì)胞發(fā)生變化，癌細(xì)胞數(shù)量總體上沒有減少；2級：侵襲性癌細(xì)胞略有減少，但總數(shù)仍然很高，癌細(xì)胞減少不超過30%；3級：浸潤性癌細(xì)胞減少介于30%～90%；4級：侵襲性癌細(xì)胞減少90%以上，僅留下分散的小團(tuán)癌細(xì)胞或個體癌細(xì)胞；5級：在原始腫瘤床中沒有侵襲性癌細(xì)胞，但可能存在原位導(dǎo)管癌。

2 結(jié)果

2.1兩組血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量比較：乳腺癌組患者血漿微泡中BCRP mRNA 水平為(184.56±34.52)，而對照組為(62.35±16.62)，乳腺癌組明顯更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=10.345，P<0.05)。見圖1。

★★P<0.001

2.2化療前后患者血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量與化療療效的關(guān)系：所有乳腺癌患者均順利完成全部化療，化療后根據(jù)Miller-Payne分級標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計所有患者的病理反應(yīng)性：1級11例，2級15例，3級17例，4級14例，5級8例?；熐盎煼磻?yīng)為1級～3級組與4級～5級組患者的血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；化療后，化療反應(yīng)為1級～3級組血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量明顯高于4級～5級組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 化療前后患者血漿微泡中BCRP mRNA 相對含量與化療療效的對比

3 討論

與以往傳統(tǒng)的化療方式不同，新輔助化療是建立在手術(shù)基礎(chǔ)上所采用的術(shù)前全身性化療，旨在縮小腫瘤體積，降低腫瘤期別，為手術(shù)切除提供機(jī)會[6]。由于乳腺癌早期缺乏特異性癥狀，大部分患者就診時已處于中晚期，耽誤最佳手術(shù)治療時機(jī)，因此，新輔助化療則成為乳腺癌最主要的治療方式，但化療效果并不統(tǒng)一，期間仍有部分患者出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展，且一部分患者的新輔助化療難以達(dá)到完全病理緩解(PCR)，延誤治療，造成出乎意料的麻煩[7]。鑒于此，越來越多的人致力于尋找一種經(jīng)濟(jì)可靠、可操作性強(qiáng)的新輔助化療療效的預(yù)測指標(biāo)對新輔助化療人群進(jìn)行篩選，從而提高化療有效率。

血漿微泡中BCRP是ATP結(jié)合膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的主要成員之一，相關(guān)試驗表明BCRP可對多種化療藥物產(chǎn)生耐藥性，其中包括拓?fù)涮婵?、伊立替康以及米托蒽醌等。本文通過分析血漿微泡中BCRP在乳腺癌與正常人群中的表達(dá)水平，分析其對乳腺癌化療療效的預(yù)測價值。結(jié)果顯示，乳腺癌組患者血漿微泡中BCRP mRNA含量高于對照組，由此可見，血漿微泡中BCRP可能參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，與之關(guān)系密切。為進(jìn)一步明確血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白與化療效果的關(guān)系，依據(jù)術(shù)后病理Miller-Payene分級系統(tǒng)，觀察不同級別病理反應(yīng)患者血漿微泡中BCRP mRNA 含量。結(jié)果顯示，新輔助化療后完全病理緩解的患者顯著延長了無進(jìn)展生存期，在化療后4級～5級病理緩解的患者中血漿微泡中BCRP水平大大降低。提示血漿微泡中BCRP mRNA的含量可能與新輔助化療的療效有關(guān)。監(jiān)測血漿微泡中BCRP mRNA水平對新輔助化療對乳腺癌的療效具有預(yù)測作用。這與既往的一些研究[8]結(jié)果基本一致。

綜上所述，檢測患者體內(nèi)血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA 水平，將有助于乳腺癌的診斷以及化療療效的判斷，該指標(biāo)水平越高，則提示化療效果越差，預(yù)后不佳，其有望成為乳腺癌化療療效的預(yù)測指標(biāo)之一。