山茶籽與葛根素對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用比較

方曉燕 李海 顧建忠 邱迎均 韋福相 陳建海 黎飚

(右江民族醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室,廣西 百色 533000)

老年女性卵巢退化萎縮，體積變小，卵泡數(shù)量減少，分泌雌激素逐步減少。雌激素是維持女性骨代謝平衡的重要物質(zhì)，表現(xiàn)在維持破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞功能的平衡，即破骨細(xì)胞破骨功能和成骨細(xì)胞成骨功能的相對(duì)平衡，成骨與骨質(zhì)流失量相當(dāng)。雌激素減少，破骨細(xì)胞的溶骨量大于成骨細(xì)胞的合成骨量時(shí)，骨質(zhì)減少，骨質(zhì)變得疏松，骨密度下降〔1～3〕。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室和臨床實(shí)踐證明雌激素防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMOP)也稱為Ⅰ型女性骨質(zhì)疏松具有明顯效果，但雌激素療法毒副作用日益明顯〔4～6〕，人們把研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到無(wú)毒副作用的植物所含雌激素，葛根素和山茶籽內(nèi)含較多雌激素樣作用成分，有必要研究葛根素和山茶籽的抗骨質(zhì)疏松作用，并比較它們作用。

1 材料和方法

1.1材料和儀器 選用32只5月齡雌性SPF級(jí)大鼠，葛根注射液(天臺(tái)藥廠100 mg/支，批號(hào)：0175053)，雌二醇 (100 μg/支，仙居制藥廠,批號(hào)：0188072)，骨密度用XR-600雙能X骨密儀檢測(cè)。堿性磷酸酶用建成公司的試劑盒測(cè)定。

1.2動(dòng)物飼養(yǎng) 大鼠分籠同條件飼養(yǎng),按大鼠顆粒飼料標(biāo)準(zhǔn),自動(dòng)飲水機(jī)供水?？販?22±5)℃，控濕50%～78%，照射亮度控制在150～190 Lx。

1.3摘卵巢造模 大鼠腹腔麻醉(用10 g/L戊巴比妥鈉按3.0 mg/kg給藥)，無(wú)菌背部雙側(cè)入口，摘雙側(cè)卵巢，縫合再消毒。切下組織切片鏡檢確定為卵巢組織。術(shù)后用青霉素注射涂擦傷口3 d，預(yù)防感染。

1.4動(dòng)物分組 大鼠隨機(jī)分成4組，每組8只。假手術(shù)(Sham)組：手術(shù)過(guò)程、處理方法與摘卵巢造模組相同，但暴露卵巢后不摘除卵巢，只切除卵巢外側(cè)的一點(diǎn)脂肪塊。術(shù)后預(yù)防感染方法與摘卵巢造模組相同。山茶籽治療(Ts)組：摘卵巢造模后，山茶籽醇提物灌胃，10 ml/kg,1次/d (5 g/g生藥)。葛根素治療(Pr)組：摘卵巢造模后，皮下注射葛根素，50 mg/kg，1次/d。Sham組、摘卵巢造模(OVX)組灌胃生理鹽水。

1.5實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)和方法 (1)股骨頭骨組織顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)。(2)血堿性磷酸酶。(3)股骨骨密度。各組4 w、12 w麻醉采血后處死取其兩側(cè)股骨。血液經(jīng)離心得血清，-18℃凍存待測(cè)堿性磷酸酶。堿性磷酸酶以比色測(cè)定，操作按說(shuō)明。左股骨固定、脫水、鈣再包埋切片，染色后觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)。右股骨,剝離干凈周圍組織后置干燥箱,待干燥后，用骨密度XR-600測(cè)量?jī)x測(cè)量，1.5 cm寬度，4.3 cm長(zhǎng)度,速度4.0 s/m 。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組股骨切片鏡下組織結(jié)構(gòu) Sham組周圍骨皮質(zhì)較厚且均勻，骨陷窩較充實(shí)，細(xì)胞飽滿整齊,小粱粗細(xì)均勻,密集；OVX組骨皮質(zhì)較薄，小梁間隙明顯增寬、小梁細(xì)而斷裂，深處髓腔增大；Pr和Ts組骨皮質(zhì)明顯增厚，小梁均勻密集，變粗，與OVX組比較骨質(zhì)疏松明顯改善。見(jiàn)圖1。

圖1 各組12 w股骨切片光鏡結(jié)構(gòu)組織(HE，×200)

2.2各組雙X線骨密度 OVX組的骨密度明顯低于同時(shí)期Sham組、Ts組、Pr組(P<0.01)；Sham組、Pr組和Ts組骨密度相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3各組血堿性磷酸酶比較 OVX組4 w、12 w血堿性磷酸酶均顯著高于Sham組、Ts組和 Pr組(P<0.01)，Pr組與Sham組及Ts組堿性磷酸酶相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組血堿性磷酸酶含量比較

3 討 論

本研究結(jié)果說(shuō)明絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的大鼠造模是成功的。摘除卵巢導(dǎo)致雌激素急劇下降，引起成果細(xì)胞與破骨功能平衡失調(diào)，破骨大于成骨，骨量減少，骨質(zhì)疏松出現(xiàn)。而堿性磷酸酶是骨代謝的一個(gè)重要指標(biāo)之一，骨質(zhì)流失增多，堿性磷酸酶升高〔7,8〕。山茶籽、葛根素治療后，骨質(zhì)疏松得到明顯好轉(zhuǎn)，骨密度也與對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。山茶籽、葛根素都含有雌激素樣成分，也叫植物性雌激素，進(jìn)入體內(nèi)，在雌激素水平偏低時(shí)，發(fā)揮雌激素樣作用〔9，10〕，當(dāng)雌激素水平較高時(shí)，不顯示其作用，這叫雙向調(diào)節(jié)。山茶籽、葛根素的雙向調(diào)節(jié)已被動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所驗(yàn)證〔11～13〕。