正交試驗(yàn)法優(yōu)選陳渭良傷科油的滲漉提取工藝

楊 波，李子鴻，劉東文，林明越

（佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

滲濾法是將適度粉碎的藥材放入滲濾筒中，從上部連續(xù)添加溶劑，該溶劑從藥材層滲透而向下流動，從而提取出藥材的方法。陳渭良傷科油為佛山市中醫(yī)院骨傷科常用制劑，由黃連、黃柏、梔子等幾味藥材組成，能解毒斂瘡，散瘀消腫，止血止痛。陳渭良傷科油的原提取工藝為以60%乙醇浸漬提取，需浸漬45～60天，存在提取效率低，生產(chǎn)周期長的缺點(diǎn)。筆者擬采用滲漉工藝，綜合考察滲漉速度、乙醇用量、浸漬時間等工藝參數(shù)，以浸膏收率及黃連、黃柏中有效成分小檗堿含量為評價指標(biāo)，優(yōu)選出陳渭良傷科油的最佳提取工藝，可大大提高生產(chǎn)效率，為大生產(chǎn)的工藝改良提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

賽默飛Thermo 液相色譜 U3000；METTLER AE200電子天平；HH-600型電熱恒溫水箱，上海比朗儀器有限公司；202-3AB型電熱恒溫干燥箱，上海比朗儀器有限公司

1.2 材料

黃連、黃柏、大黃、地榆、紫珠葉、梔子中藥飲片由國藥集團(tuán)馮了性（佛山）藥材飲片有限公司提供；鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號110713-201613）。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計

處方中黃連清熱燥濕，瀉火解毒，是為君藥；黃柏清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡，與黃連配伍能增強(qiáng)清熱解毒之功效，是為臣藥，兩者的主要有效成分都為小檗堿[1]，所以以小檗堿含量和浸膏收率為考察指標(biāo)，選取浸漬時間、乙醇用量、滲漉速度3個考察因素，每個因素3個水平，選擇L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2 浸膏收率測定

按處方分別稱取黃柏、大黃、地榆、紫珠葉、梔子各48 g，黃連40 g共9份，粉碎成粗粉(過二號篩)，參照2015年版中國藥典四部制劑通則流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，分別按照表2排列的條件進(jìn)行滲漉。具體操作如下：將藥粉置有蓋不銹鋼桶內(nèi)，加粗粉量0.8倍的乙醇液攪拌均勻，濕潤密閉放置1.5小時，使充分膨脹。將濕潤膨脹后的藥物樣品拌松弄散，然后用不銹鋼勺盛粉，均勻的裝入滲漉筒，約裝10厘米厚，用T型棒壓勻，再按上述操作，一層一層的裝入，適當(dāng)加壓，藥粉填裝不得超過滲漉筒的2/3高處。藥粉面上蓋不銹鋼孔板壓牢，打開滲漉筒下面的放料閥，并放一容器，然后緩緩加入乙醇液。待排出藥粉粉粒之間的空氣，并有乙醇流出約250 ml左右，關(guān)閉放料閥，加乙醇液至滿，蓋上漉筒、浸漬。浸漬達(dá)到工藝規(guī)定時間后，開放料閥以相應(yīng)的滲漉速度進(jìn)行滲漉，濾液放入貯液缸內(nèi)，并將排空時的乙醇液倒入貯液缸。將滲漉液濃縮至浸膏狀，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，即得。浸膏收率=干膏質(zhì)量/藥材質(zhì)量×100%。

2.3 小檗堿含量測定

2.3.1 參考物質(zhì)溶液的制備：取適量的鹽酸小檗堿參考物質(zhì)，準(zhǔn)確稱重，加流動相制成含0.1 mg/1 ml的溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備：取2.2浸膏收率測定項(xiàng)下的干膏，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用流動相補(bǔ)足減失重量，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 線性關(guān)系的研究：在“2.3.2”下準(zhǔn)確吸取2、4、6、8、10μl的參考物質(zhì)溶液，將其注入高效液相色譜儀中，并根據(jù)“2.3.1“，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，得線性回歸方程：Y＝0.537X+9.674，r＝0.9997(n=5），表明進(jìn)樣量在0.1938～0.969μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

本方由黃連、黃柏等6味藥材組成，以黃連和黃柏的主要成分小檗堿的含量為指標(biāo)。干提取物的收率也可以反映化合物中有效成分的提取量，因此也被選作檢測指標(biāo)。設(shè)計小檗堿含量的權(quán)重系數(shù)為0.6，干浸膏收率的權(quán)重系數(shù)為0.4[3]。綜合評分W（%）＝0.6W1/Wmax1＋0.4W2/Wmax2。分別測定上述9份樣品，并進(jìn)行方差分析，見表1。

表1 綜合評分方差分析

2.5 最佳工藝驗(yàn)證

已優(yōu)選的最佳滲漉提取工藝制備3批供試品干膏，分別測定浸膏收率及小檗堿含量，計算綜合評分，結(jié)果表明按正交試驗(yàn)優(yōu)選的滲漉提取工藝穩(wěn)定可靠，浸膏收率和小檗堿含量都較高，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 3批驗(yàn)證試驗(yàn)評價結(jié)果

3 討 論

中藥復(fù)方制劑所含成分復(fù)雜，通常有多種活性成分發(fā)揮治療作用。當(dāng)選擇評估系統(tǒng)時，不可能且不必要使用化合物中的所有活性成分作為評估指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)以滲濾液的回收率和君臣藥材的主要活性成分小檗堿的含量為評價滲濾液過程的指標(biāo)。綜合加權(quán)評分法用于對滲透過程進(jìn)行綜合評估，避免了單一評估指標(biāo)的局限性和單一性，使分析和評估更加全面，強(qiáng)調(diào)了影響藥物功效的關(guān)鍵指標(biāo)因素，使藥物的使用更加合理。 分析結(jié)果更全面，更科學(xué)，更客觀過程優(yōu)化更合理[4-6]。本試驗(yàn)優(yōu)選出的陳渭良傷科油提取滲漉工藝，為陳渭良傷科油工藝改革提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，可作為下一步中試工藝的參考。