湖北省博落回葉片中生物堿類成分分析

黃泰奇 楊濮溶 黃明浩 冉金龍 張哲 張劉強 楊書香

摘 要 對湖北省4個地區(qū)的博落回葉片中血根堿、白屈菜紅堿及原阿片堿進行定性、定量分析。采用薄層色譜法鑒別博落回中的血根堿、白屈菜紅堿，高效液相色譜法測定血根堿、白屈菜紅堿及原阿片堿含量。結(jié)果表明，湖北省4個地區(qū)的博落回葉片中均含有血根堿和白屈菜紅堿，且血根堿、白屈菜紅堿含量及原阿片堿含量均符合標準規(guī)定或高于文獻報道值。因此湖北省內(nèi)這4個地區(qū)的野生博落回資源具有開發(fā)利用的價值。

關(guān)鍵詞 博落回;血根堿;白屈菜紅堿;湖北省

中圖分類號：R956 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.32.002

博落回（Macleaya cordata）別名號筒桿、山號筒，是罌粟科博落回屬多年生直立草本植物，基部具乳黃色漿汁。生于山坡及草叢中，喜溫暖、濕潤的環(huán)境，喜肥、怕澇，有較強的耐旱力和抗寒力，對土壤要求不嚴，但在肥沃的土壤中長勢健壯。適宜的生長溫度為22～28 ℃[1]。博落回具有改善土壤條件、防止土壤流失及修復(fù)土壤重金屬污染等生態(tài)價值[2-3]。博落回味苦，辛，性寒，溫，大毒;具有散瘀、祛風(fēng)、解毒、止痛、殺蟲等功能;主治痛瘡疔腫、臁瘡、痔瘡、濕疹、蛇蟲咬傷、跌打腫痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、齲齒痛、頑癬、滴蟲性陰道炎及酒糟鼻，其獸藥加工品的抗菌效果良好[4]。博落回的根、莖、葉及果中均含有多種生物堿，其中主要的生物堿有4種：原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿[5]。目前，湖南省、貴州省的部分地區(qū)已經(jīng)大面積種植博落回，且部分地區(qū)通過博落回種植順利脫貧，而作為同樣適合博落回生長的湖北省尚無人工大面積種植博落回的先例[6]。因此通過薄層色譜法、高效液相色譜法對取自湖北省4個地區(qū)——鄂州市汀祖鎮(zhèn)、咸寧市通山縣黃沙鋪鎮(zhèn)、黃石市大冶市茗山鄉(xiāng)及黃岡市麻城市乘馬崗鎮(zhèn)的博落回葉片中生物堿類成分進行定性、定量分析，以確定湖北省內(nèi)這4個地區(qū)的野生博落回資源具有開發(fā)利用的價值。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

KQ-100DE超聲波清洗機，購自昆山市超聲波儀器有限公司;ME104E分析天平，梅特勒-托利多;手持式紫外分析儀，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司;硅膠G薄層板，青島海洋化工廠;e2695型高效液相色譜儀，美國沃特世公司。

1.1.2 試劑

血根堿標準品，西安天寶生物科技有限公司;白屈菜紅堿標準品、原阿片堿，成都埃法生物公司;鹽酸、甲醇、二甲苯、氯仿、氨水、三乙胺及磷酸等試劑，均為國產(chǎn)分析純。

1.2 供試材料

博落回葉，于2021年6月取自鄂州市汀祖鎮(zhèn)（樣品1）、咸寧市通山縣黃沙鋪鎮(zhèn)（樣品2）、黃石市大冶市茗山鄉(xiāng)（樣品3）及黃岡市麻城市乘馬崗鎮(zhèn)（樣品4），共計39個樣品。

1.3 方法

1.3.1 薄層色譜法

1）博落回葉供試品溶液的制備。取博落回葉粉末0.500 0 g，加入25 mL提取液，其中提取液為甲醇與1%鹽酸水溶液按1∶1體積比配制而成，然后超聲處理1 h，過濾，濾液作為供試品溶液。

2）標準品溶液的制備。分別取血根堿和鹽酸白屈菜紅堿對照品，加提取液25 mL，制成單位為1 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

3）測定。吸取血根堿和鹽酸白屈菜紅堿對照品溶液及4個地區(qū)的博落回葉供試品溶液1 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿、二甲苯、甲醇及氨水按50.0∶10.0∶1.0∶0.1的體積比配制液為展開劑，展開、取出、晾干，在254 nm熒光下顯色。

1.3.2 高效液相色譜法

1）色譜條件。色譜柱：Waters Symmetry C18

（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動相：A相為乙腈，B相為0.5%三乙胺緩沖溶液（pH=2.5，用磷酸調(diào)節(jié)pH）;線性洗脫濃度：0～14 min，B相保持75%;14～27 min，B相75%～40%;27～29 min，B相40%～75%;29～35 min，B相保持75%;流速：0.8 mL·min-1;檢測波長：270 nm;柱溫：35 ℃;進樣體積：5 μL。

2）對照品溶液的制備。參照標準制備混合標準溶液[7]：取原阿片堿3.6 mg、血根堿4 mg、白屈菜紅堿4 mg，分別加入到10 mL容量瓶中，用提取液定容到10 mL，制成濃度為0.4 mg·mL-1的血根堿和白屈菜紅堿溶液，以及0.36 mg·mL-1的原阿片堿溶液。

3）試樣品的制備。取博落回葉粉末過篩（60目）

0.5 g，塞入錐形瓶中，加入50 mL提取液，室溫超聲提取60 min，放冷至室溫，用0.45 mm的微孔濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中，用提取液容至刻度。

4）測定。分別取制備的3種對照品溶液和樣品溶液5 μL進樣，并計算血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿峰面積及含量，含量計算公式為：

（1）

式（1）中：m1為樣品中生物堿（血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿）峰面積（μV·s），m2為此生物堿標準品峰面積（μV·s），c為此生物堿標準品濃度（mg·mL-1），w為樣品中此生物堿含量（%）。

1.3.3 博落回葉等級評價方法

博落回葉的分級標準為：血根堿和白屈菜紅堿含量之和（按干燥品計算%）≥1.5的為一級;<1.5且≥1.0的為二級;<1.0且≥0.5的為三級。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層色譜結(jié)果

薄層色譜結(jié)果如圖1，博落回葉供試品溶液在2種生物堿相同位置顯相同顏色的斑點，說明4個地區(qū)的博落回葉片中均含有血根堿和白屈菜紅堿。

2.2 高效液相色譜結(jié)果

3種生物堿標準品及樣品液相色譜圖分別如圖2和圖3。結(jié)果表明，血根堿、白屈菜紅堿及原阿片堿標準品保留時間分別為13.8 min、8.3 min、5.2 min，且樣品中3種生物堿保留時間與標準品一致。

2.3 樣品中生物堿含量

根據(jù)博落回葉等級評價方法可知，4個地區(qū)采集的39個樣品中僅2個樣品中血根堿和白屈菜紅堿含量之和未達到三級標準，且達到三級標準的有11個樣品、達到二級標準的有7個樣品、達到一級標準的有19個樣品。其中，含量最高的是來自咸寧市的樣品，血根堿和白屈菜紅堿含量之和為12.40%。39個樣品中，原阿片堿含量最低為4.05%，最高為22.43%，均高于文獻[8]報道的值。4個地區(qū)樣品原阿片堿含量、血根堿和白屈菜紅堿含量之和的極值與平均值統(tǒng)計如表1。

3 結(jié)論與討論

根據(jù)薄層色譜結(jié)果可知，取自湖北省4個地區(qū)的野生博落回葉供試品溶液均含有血根堿和白屈菜紅堿。根據(jù)液相色譜檢測結(jié)果可知，血根堿和白屈菜紅堿含量之和基本達到標準[7]規(guī)定值，且原阿片堿含量高于已有研究報道的數(shù)值，說明湖北省野生博落回資源具有開發(fā)利用的價值。

參考文獻：

[1] 孫偉，陳衛(wèi)，王雅輝.博落回的栽培[J].特種經(jīng)濟動植物，2006（4）：10-12.

[2] 鄒序安，龍正權(quán).博落回的生物學(xué)特性與生態(tài)價值[J].福建林業(yè)科技，2009，36（3）：244-247.

[3] 聶堅.博落回對鎘污染土壤的修復(fù)潛力及耐性機理探究[D].長沙：湖南大學(xué)，2016.

[4] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：656.

[5] 陳燕樂，楊廣民，唐昭山，等.博落回中四種生物堿的薄層鑒別研究[J].中國獸藥雜志，2020，54（4）：30-35.

[6] 曾凡榮.點“葉”成金，助農(nóng)增收[J].湖南農(nóng)業(yè)，2021（4）：9.

[7] 長沙市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局.博落回葉：DB43/T 498-2009[S].2009.

[8] 曾建國，劉華.博落回主要功能成分及其在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè)，2019，40（7）：1-6.

（責(zé)任編輯：劉寧寧）