基于UPLC-Q-orbitrap-MS的非靶向代謝組學(xué)用于不同橄欖品種差異代謝物分析

唐雪妹 趙曉麗 高毓文 葉倩 朱富偉 蘇連水 萬(wàn)凱

摘 ?要：橄欖含有豐富的生物活性物質(zhì)，這些成分的含量與橄欖品種、加工過(guò)程及儲(chǔ)存條件等密切相關(guān)。分析我國(guó)烏橄欖和青橄欖2個(gè)主栽橄欖品種，利用液相色譜-高分辨質(zhì)譜（UPLC-Q-orbitrap-MS）結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)模型進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：利用非靶向代謝物分析流程篩選鑒定出47種顯著性差異代謝物，其中氨基酸9種，黃酮多酚類20種，油脂類8種，有機(jī)酸類3種，香豆素類化合物2種，其他5種。烏橄欖中含量較高的物質(zhì)有山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、羅漢松脂素、高車前苷、楊梅素、花旗松素、1-棕櫚酰-2-月桂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿PLPC、桐油酸、甘草次酸，青橄欖中含量較高的物質(zhì)有鞣花酸、短葉蘇木酚酸、沒(méi)食子酸及相應(yīng)的葡萄糖苷，這些物質(zhì)在2個(gè)品種中的平均含量比率超過(guò)30倍以上。這表明不同橄欖品種內(nèi)源性代謝物存在明顯差異且各具特色，為今后橄欖品質(zhì)評(píng)價(jià)、資源合理利用及不同產(chǎn)品的深度開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

關(guān)鍵詞：UPLC-Q-orbitrap-MS;非靶向;橄欖;代謝物

中圖分類號(hào)：S59 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： Olives （Olea europaea L.） are rich in biologically active substances， and the content of the components is closely related to olive varieties， processing and storage conditions. The chemical constituents of table olive were ana-lyzed by UltraHigh Performance Liquid Chromatography-Quadrupole Orbitrap Mass Spectrometry （UPLC-Q-orbitrap- MS） combined with statistical analysis. A total of 47 significantly different metabolites were identified from the chro-matograms of 2 olive varieties. The compounds included 9 kinds of amino acids， 20 kinds of flavonoids and poly-phenols， 8 kinds of lipids， 3 kinds of organic acids， 2 kinds of coumarin compounds， and 5 kinds of other compounds. Juglalin， matairesinol， plantagoside， myricetin， taxifolin， PLPC， α-eleostearic acid and 18-β-glycyrrhetinic acid showed the highest values in Canarium pimela Koening. Ellagic acid， brervifolincaboxylic acid， gallic acid and its corresponding glucosides showed the highest values in Canarium album. The average content ratio of the substances in the two varie-ties is more than 30 times. The results showed that there were significant differences in the endogenous metabolites among different olive varieties and each had its own characteristics， which would provide data support for the future olive quality evaluation， rational utilization of olive resources and in-depth development of different olive products.

Keywords： UPLC-Q-orbitrap-MS; untargeted; olive; metabolomics

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.12.006

橄欖是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，廣泛分布于地中海國(guó)家以及我國(guó)南部。從橄欖果中產(chǎn)生的橄欖油具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在人類飲食中發(fā)揮重要角色。同時(shí)，橄欖也可作鮮食和加工成涼果，是著名的亞熱帶特色水果[1]。新鮮成熟的橄欖果肉含有豐富的生物活性物質(zhì)，如多酚、黃酮、Vc、蛋白質(zhì)及微量元素等，從而使橄欖具有抗氧化、抗心血管疾病、抗癌、抗炎癥等生物功效[2-4]。橄欖產(chǎn)品生物活性物質(zhì)含量與橄欖品種、成熟程度、工業(yè)發(fā)酵過(guò)程以及儲(chǔ)存條件等密切相關(guān)。因此，開(kāi)發(fā)一種新的有效方法來(lái)分析判別橄欖品種代謝組分的差異，找到其代謝標(biāo)志物，對(duì)于橄欖油的真?zhèn)舞b別及促進(jìn)橄欖鮮果的高效加工利用具有重要意義。

橄欖品種雖繁多，但良莠不齊，缺乏科學(xué)的開(kāi)發(fā)利用依據(jù)，嚴(yán)重阻礙橄欖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。橄欖品種間有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、Vc、可溶性固形物和礦質(zhì)元素等營(yíng)養(yǎng)成分及含量的差異，在一定程度上反映了橄欖品種的遺傳差異，對(duì)橄欖鮮食品種、鮮食配套品種以及加工品種的確定也具有現(xiàn)實(shí)意義[5-6]。大量的研究結(jié)果表明，不同橄欖品種品質(zhì)和口感差異與其內(nèi)在代謝物的種類和含量密切相關(guān)。何志勇等[7]提出橄欖果實(shí)多酚類物質(zhì)如黃酮、單寧等含量是影響果實(shí)鮮食的主要因素;趙金星等[8]研究發(fā)現(xiàn)橄欖果實(shí)風(fēng)味的形成與糖酸等物質(zhì)關(guān)系小，與酚類物質(zhì)關(guān)系密切。近幾年，采用色譜質(zhì)譜技術(shù)對(duì)鮮食橄欖特征生物活性成分的研究得到了越來(lái)越多的關(guān)注，尤其是內(nèi)源性代謝物如多酚物質(zhì)、氣味芳香物質(zhì)的挖掘[9-11]。然而，從代謝組學(xué)層面深入研究橄欖品質(zhì)特征，以及不同品種橄欖果實(shí)代謝物差異成分比較等研究比較缺乏，不利于橄欖資源合理利用及橄欖不同產(chǎn)品的深度開(kāi)發(fā)。

青橄欖和烏橄欖是我國(guó)南方特有的藥食兩用水果，與國(guó)外的油橄欖差別甚大，是加工型水果，果肉除生吃亦可腌制和藥用。本研究主要利用UPLC-Q-orbitrap-MS結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)我國(guó)主要的2類橄欖的化學(xué)成分差異進(jìn)行對(duì)比分析，尋找品種間的生物標(biāo)志物。采用非靶向代謝組學(xué)策略，可有效地幫助科研人員更好地分析復(fù)雜體系的化學(xué)組成，挖掘更多有用的信息，探明不同橄欖品種成分的顯著性差異，為橄欖果實(shí)有效加工和利用提供參考依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

本研究于2018年11—12月在廣東省橄欖主產(chǎn)區(qū)采集25個(gè)鮮食橄欖樣品，其中廣州增城采集10個(gè)烏橄欖，潮州普寧采集14個(gè)青橄欖和1個(gè)烏橄欖（表1）。每個(gè)樣本均采摘于果實(shí)成熟期，由人工隨機(jī)采摘的200個(gè)成熟個(gè)體混勻組成。

1.2 ?方法

1.2.1 ?樣品提取 ?新鮮橄欖采摘后，果實(shí)表面用去離子水洗凈、晾干，將果肉和果核分開(kāi)，棄去果核部分。取適量果肉置于勻漿機(jī)中研磨搗碎至粉末狀，于–80 ℃冰箱保存。準(zhǔn)確稱量2 g橄欖樣于離心管中，加入80%甲醇水溶液10 mL，渦旋混勻，室溫條件下超聲萃取30 min;8000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清。殘?jiān)偌?0 mL甲醇重復(fù)提取2次，合并上清液。上清液部分旋轉(zhuǎn)濃縮近干，用80%甲醇水溶液定容至1 mL，過(guò)0.22 μm PTFE濾膜，于–20 ℃保存待用。

1.2.2 ?UPLC-Q-orbitrap-MS分析 ?采用賽默飛Q-Exactive液質(zhì)聯(lián)用儀，使用Tracefinder軟件實(shí)現(xiàn)儀器控制、數(shù)據(jù)采集及數(shù)據(jù)分析。色譜柱使用C18 Accucore aQ（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）柱，0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）作為流動(dòng)相，流速設(shè)置0.3 mL/min。色譜分離條件為：0～2 min，10% B;2～12 min，10%～80% B;12～15 min，80% B;15～ 18 min，80%～10% B;保持10% B平衡2 min，整個(gè)分析時(shí)間為20 min。柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積5 μL。

質(zhì)譜分析條件：離子源參數(shù)，使用ESI電離源在正負(fù)離子切換模式下進(jìn)行質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，噴霧電壓4 kV（正離子模式），3.5 kV（負(fù)離子模式）;鞘氣（N2>95%）為40 bar;輔助氣體（N2>95%）為10 bar;加熱器溫度300 ℃;離子傳輸管溫度320 ℃。一級(jí)掃描模式MS Full Scanning mode，質(zhì)荷比（m/z）為100～1000，分辨率為70 000。二級(jí)質(zhì)譜掃描模式采用數(shù)據(jù)依賴采集（dd-MS2），分辨率為17 500。高能碰撞解離（HCD）的能量設(shè)置為階梯模式（20、40、60 eV）

1.2.3 ?質(zhì)量控制 ?從每個(gè)樣品提取液中取相同體積樣品混合組成質(zhì)控樣（QC），用于數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性評(píng)估。在UPLC-Q-orbitrap-MS分析過(guò)程中，每5個(gè)樣品中插入1個(gè)質(zhì)控樣，用于監(jiān)測(cè)方法的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的可靠性。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

液質(zhì)采集的原始數(shù)據(jù)文件直接導(dǎo)入compound discover軟件分析，經(jīng)過(guò)峰檢測(cè)、提取、去卷積、歸一化、峰對(duì)齊等處理后，生成包含質(zhì)荷比、保留時(shí)間、峰面積的代謝物數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集可進(jìn)一步用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。前處理得到數(shù)據(jù)集用SIMCA-P軟件進(jìn)行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）。PCA得分圖可清楚的區(qū)分不同種類和不同地區(qū)的樣品，采用OPSL-DA模型比較2個(gè)不同樣品，從而實(shí)現(xiàn)特征生物標(biāo)志的挖掘。

2 ?結(jié)果與分析

目前，考慮樣品的化學(xué)復(fù)雜性，為了獲得更為完整的信息，代謝組學(xué)策略已經(jīng)由單獨(dú)目標(biāo)物或者已知一類物質(zhì)的檢測(cè)向全面信息檢測(cè)轉(zhuǎn)變。本研究采用非靶向代謝組學(xué)研究不同品種橄欖化學(xué)成分差異，具體分析流程如圖1所示，首先采用UPLC-Q-orbitrap-MS采集橄欖樣品的植物化學(xué)指紋圖譜，獲得樣品數(shù)據(jù)集，再利用PCA統(tǒng)計(jì)學(xué)模型對(duì)不同類型橄欖進(jìn)行初步聚類分析，隨后OPLS-DA及變量選擇方法變量權(quán)重值（VIP）、S圖（S-plot）等篩選出不同品種橄欖的特征化合物，從而實(shí)現(xiàn)不同品種樣品間差異化學(xué)成分分析和鑒定。

2.1 ?橄欖指紋圖譜

為了從橄欖樣品中萃取更多有效成分，從而獲得樣品的全面信息，需要選擇合適的分析條件包括提取方法和質(zhì)譜分析方法。根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，在大部分植物代謝物研究中，均采用水和甲醇作為萃取溶劑，超聲輔助萃取可有效提高萃取效率[12]，因此本研究采用超聲萃取的提取方法，同時(shí)，考察3種溶劑100%甲醇、70%甲醇和純水的提取效果。結(jié)果表明，70%甲醇可提取出更多的代謝物成分，萃取效果優(yōu)于100%甲醇和純水。甲醇具有較高的極性，溶解性好，可萃取大部分極性代謝物。此外，橄欖是果實(shí)含水量較少的水果，一定含水量的甲醇提取溶液可同時(shí)有效提取脂溶性代謝物和水溶性代謝物，因此，本研究選擇70%甲醇，超聲輔助萃取作為橄欖樣品的最優(yōu)提取方法。

使用UPLC-Q-orbitrap-MS系統(tǒng)在最優(yōu)的流動(dòng)相組成和洗脫梯度下對(duì)不同品種的橄欖果肉甲醇提取物進(jìn)行分析，得到橄欖樣品的代謝輪廓指紋圖譜。如圖2所示，負(fù)離子模式下，2種不同橄欖的代謝成分存在明顯差異，如烏橄欖在2～12 min出現(xiàn)的峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)種類和相對(duì)含量與青橄欖明顯不同，12 min后仍可見(jiàn)多個(gè)特異性峰（圖2A）。同樣，正離子模式下，2種橄欖的代謝指紋圖譜差異明顯，烏橄欖在保留時(shí)間 7～8 min以及12 min后具有顯著差異性峰，青橄欖在1.77 min和8～9 min之間有特征峰出現(xiàn)（圖2B）。此研究結(jié)果為后續(xù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異性代謝物奠定基礎(chǔ)。

2.2 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及差異代謝物篩選

在最優(yōu)的條件下分析所有的橄欖樣品，通過(guò)合適的參數(shù)設(shè)置，用compound discover自動(dòng)提取到9586個(gè)代謝物。多變量統(tǒng)計(jì)學(xué)方法PCA已經(jīng)被廣泛用于評(píng)估產(chǎn)品質(zhì)量、追蹤產(chǎn)物起源、辨別劣質(zhì)產(chǎn)品等過(guò)程的數(shù)據(jù)分析[13]。PCA的基本原理是使用數(shù)學(xué)程序?qū)⒍鄠€(gè)相關(guān)的變量轉(zhuǎn)變成少個(gè)不相關(guān)的變量，稱之為主成分（PCs）。本研究用SIMCA-P軟件對(duì)檢測(cè)到的橄欖數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA，主要以峰面積作為變量來(lái)觀察樣品直接的變化。圖3是30個(gè)樣品的PCA 得分圖和荷載圖。PCA得分圖可直觀地反映出不同品種橄欖樣品的差異。如圖3所示，在主成分1和主成分2的二維圖上， 30個(gè)樣品可清楚的分為幾個(gè)組，一個(gè)樣品出現(xiàn)在95%置信區(qū)間以外，可判斷為異常值，這個(gè)異常值可能是原材料差異或者保存過(guò)程中引起的變化。在PCA得分圖中可看到QC樣品均集中在中心位置，且分布緊密，說(shuō)明本方法利用UPLC- Q-orbitrap-MS獲得數(shù)據(jù)具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，數(shù)據(jù)可靠，可用于橄欖的代謝組學(xué)分析。此外，各品種樣品組內(nèi)聚集在一起，不同品種樣品之間相距較遠(yuǎn)，在空間上可明顯區(qū)分，聚類趨勢(shì)明顯，說(shuō)明幾組樣品的代謝產(chǎn)物在種類、數(shù)量和濃度等方面存在差異。PCA得分圖可有效的展示異常值、組別及其他類型的研究樣品。

由非監(jiān)督模式的PCA模型初步判斷樣品組別后，采用有監(jiān)督模式的OPLS-DA分析數(shù)據(jù)，該模型可降低系統(tǒng)噪聲的干擾，提高分類效能。經(jīng)7次循環(huán)交互驗(yàn)證（7-fold cross-validation）得到的模型評(píng)價(jià)參數(shù)，本研究數(shù)據(jù)建立的OPLS-DA模型的R2Y為99.2%，R2Q均為96.6%，說(shuō)明該模型具有較好的擬合性和預(yù)測(cè)性。圖4是建立OPLS-DA得分圖，青橄欖和烏橄欖在第一主成分軸上明顯分開(kāi)，說(shuō)明青橄欖的代謝成分明顯區(qū)別于烏橄欖。由此可知，不同品種對(duì)橄欖代謝物會(huì)產(chǎn)生一定的影響。通過(guò)OPLS-DA分析，代謝物和樣品之間的關(guān)系可用于品種辨別及產(chǎn)地溯源分析。

為找出青橄欖和烏橄欖品種間的潛在差異化學(xué)標(biāo)志物，進(jìn)行擴(kuò)展統(tǒng)計(jì)分析得到S-plot圖（圖5A）。在S-plot圖中，每一個(gè)點(diǎn)代表著一個(gè)保留時(shí)間和質(zhì)荷比組成的變量（t-m/z pair），X軸表示變量的貢獻(xiàn)，離零點(diǎn)越遠(yuǎn)的變量，對(duì)兩組樣品區(qū)分貢獻(xiàn)越大。Y軸表示變量可信度，離零點(diǎn)越遠(yuǎn)的變量，對(duì)樣品區(qū)分的置信水平越高。因此，處在“S”曲線兩端的離子，可作為區(qū)分不同品種橄欖的潛在化學(xué)標(biāo)志物。此外，利用OPLS-DA模型得到的VIP來(lái)衡量各代謝物的表達(dá)模式對(duì)各組樣本分類判別的影響強(qiáng)度和解釋能力，挖掘具有生物學(xué)意義的差異代謝物。本研究選擇OPLS-DA統(tǒng)計(jì)分析VIP>1，|fold charge|>2以及students’t-test P<0.05的代謝物為具有顯著性差異的代謝物，共篩選出47個(gè)差異明顯的化合物，這些物質(zhì)可借助高分辨質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

2.3 ?顯著性差異代謝物鑒定

在代謝組學(xué)中，未知化合物的鑒定是目前主要難點(diǎn)之一。本研究代謝物鑒定采用基于高分辨質(zhì)譜的非靶向分析流程，即采用全掃描結(jié)合數(shù)據(jù)依賴二級(jí)質(zhì)譜分析（full scan-ddms2），提取準(zhǔn)確的質(zhì)荷比、保留時(shí)間、同位素峰比及二級(jí)碎片離子，與內(nèi)部數(shù)據(jù)庫(kù)及在線數(shù)據(jù)庫(kù)如massbank da-tabase （https：//massbank.eu/），human metabolome databases （HMDB， http：//www.hmdb.ca/），Metlin database （http：//metlin.scripps.edu）代謝譜圖庫(kù)進(jìn)行對(duì)比檢索。同時(shí)，鑒定到的物質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行確認(rèn)，初步預(yù)測(cè)和鑒定化學(xué)組成成分。以山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷為例，在樣品中通過(guò)準(zhǔn)確分子量可提取目標(biāo)化合物，確認(rèn)該物質(zhì)在每個(gè)樣本中的相對(duì)含量，二級(jí)碎片則可提供詳細(xì)的結(jié)構(gòu)信息。m/z 419.09665預(yù)測(cè)組成為（C20H18O10+H）+離子，通過(guò)碰撞誘導(dǎo)解離，產(chǎn)生山奈酚特征峰287.0547 （C15H10O6+H）+，丟失132 Da （C5H8O4），因此，該化合物鑒定為山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷，再通過(guò)與庫(kù)中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)二級(jí)碎片比對(duì)確認(rèn)結(jié)構(gòu)。

本研究鑒定的區(qū)分不同種類橄欖的重要代謝物及相關(guān)信息見(jiàn)表2，經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，青橄欖和烏橄欖2個(gè)品種中差異最明顯的代謝物主要為氨基酸、多酚類、黃酮類及脂質(zhì)等。其中烏橄欖中含量較高的物質(zhì)有山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、羅漢松脂素、高車前苷、楊梅素、花旗松素、1-棕櫚酰-2-月桂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿PLPC、桐油酸、甘草次酸，青橄欖中含量較高的物質(zhì)有鞣花酸、短葉蘇木酚酸、沒(méi)食子酸及相應(yīng)的葡萄糖苷，這些物質(zhì)在2個(gè)品種中的平均含量比率超過(guò)30倍以上。由此可見(jiàn)，在烏橄欖中黃酮類化合物和油脂類化合物相對(duì)較豐富，在青橄欖中多酚類化合物含量更高。

3 ?討論

代謝組學(xué)技術(shù)在果實(shí)品質(zhì)方面研究雖然起步較晚，但隨后發(fā)展迅速且應(yīng)用非常廣泛[14]。本研究利用高分辨質(zhì)譜結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析，從非靶向代謝組學(xué)角度，對(duì)不同鮮食橄欖代謝差異成分進(jìn)行分析。結(jié)果表明，橄欖果肉中含有豐富的氨基酸、油脂、生物堿、多酚、黃酮類物質(zhì)，因此，鮮食橄欖具有獨(dú)特的苦澀味和諸多藥理作用，然而不同品種橄欖中代謝物的組成和含量差異顯著。多酚和黃酮類化合物有抗氧化、抗癌、抗腫瘤、抗心血管等功能[4， 15]，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，青橄欖和烏橄欖品種間，差異最為明顯的物質(zhì)集中在多酚和黃酮物質(zhì)，這些物質(zhì)在二者含量比率較大。其中奎尼酸、槲皮苷、鞣花酸在區(qū)分2個(gè)品種中的貢獻(xiàn)最大。氨基酸作為橄欖果實(shí)重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及風(fēng)味組成成分，其比例和種類是作為評(píng)價(jià)植物品質(zhì)優(yōu)劣的主要指標(biāo)之一。不同的氨基酸其風(fēng)味不同，其中絲氨酸和谷氨酰胺為甜味氨基酸，谷氨酸和苯丙氨酸為鮮味氨基酸，氨基酸在2種橄欖中都較為豐富，但不同品種氨基酸含量有所差別，是造成二者鮮食口感差異的重要因素[16]。此外，研究發(fā)現(xiàn)烏橄欖明顯區(qū)別于青橄欖的獨(dú)特的芳香氣味是由對(duì)聚傘花素等烯萜類造成，而且烏橄欖油脂含量明顯高于青橄欖，更適合作為開(kāi)發(fā)橄欖油等相關(guān)產(chǎn)品的基礎(chǔ)原料。因此，根據(jù)這些活性物質(zhì)成分和含量開(kāi)發(fā)相應(yīng)保健產(chǎn)品，可大幅度提高橄欖功能性成分的生物利用度。

目前，對(duì)于橄欖代謝物研究多數(shù)采用靶向代謝組學(xué)技術(shù)，主要集中在特定一類化合物如多酚物質(zhì)的研究上[9-12]，本研究采用非靶向代謝組學(xué)策略，無(wú)偏向性的檢測(cè)樣品內(nèi)源性代謝物差異，由單獨(dú)目標(biāo)物或者已知一類物質(zhì)的檢測(cè)向全面信息檢測(cè)轉(zhuǎn)變，可獲得更多更豐富的代謝物信息。本研究利用高分辨質(zhì)譜，可一次提取進(jìn)樣同時(shí)篩查出氨基酸、多酚、黃酮、生物堿及油脂和芳香性氣味等，方法快速高效。非靶向代謝組學(xué)策略在背景知識(shí)有限的情況下，對(duì)樣品進(jìn)行系統(tǒng)鑒定分析，獲取大量代謝物數(shù)據(jù)，對(duì)于尋找差異代謝物和生物標(biāo)志物具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

由于鮮食橄欖地域性消費(fèi)較突出，而現(xiàn)有蜜餞產(chǎn)品開(kāi)發(fā)工藝多數(shù)停留在初加工且對(duì)橄欖中生物活性成分破壞較大，造成藥用資源浪費(fèi)。不同的加工過(guò)程會(huì)導(dǎo)致氧化和水解反應(yīng)，從而使橄欖利用價(jià)值降低，因此，根據(jù)不同品種橄欖的代謝物差異從而選擇特定的加工過(guò)程，對(duì)于充分有效利用橄欖資源至關(guān)重要[17]。此外，不同的地理環(huán)境和生長(zhǎng)氣候可能對(duì)橄欖化學(xué)成分比例產(chǎn)生重大影響，這些將直接影響橄欖的口感、風(fēng)味和生物活性物質(zhì)。本研究通過(guò)非靶向代謝組學(xué)分析不同產(chǎn)地和不同品種橄欖化學(xué)成分，為橄欖植物資源合理利用及相關(guān)產(chǎn)品深度開(kāi)發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)，從而提高橄欖產(chǎn)品的附加值，拓寬橄欖市場(chǎng)。

4 ?結(jié)論

橄欖作為一種特色藥食兩用農(nóng)產(chǎn)品，在我國(guó)資源豐富，具有可觀的開(kāi)發(fā)利用前景。本研究建立一種非靶向代謝組學(xué)分析方法用于不同品種橄欖的化學(xué)成分分析，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析篩選出顯著差異代謝物并進(jìn)行了初步鑒定。研究表明，橄欖樣品含有豐富生物活性物質(zhì)，其中不同品種代謝物差異主要是酚酸類、黃酮類、氨基酸和脂質(zhì)類化合物。目前，我國(guó)橄欖加工尚處于初步階段，如何科學(xué)合理地開(kāi)發(fā)利用橄欖資源，研發(fā)豐富多樣的橄欖產(chǎn)品有待大量科技投入。本研究可為橄欖植物資源合理利用及相關(guān)產(chǎn)品深度開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 賴瑞聯(lián)， 陳 ?瑾， 韋曉霞， 等. 中國(guó)橄欖研究40年[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2020， 41（10）： 2045-2054.

[2] 林玉芳， 陳清西. 橄欖功能成分及其抗氧化作用研究進(jìn)展[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2010， 31（1）： 158-163.

[3] Fernández-Poyatos M P， Ruiz-Medina A， Llorent-Martínez E J. Phytochemical profile， mineral content， and antioxidant activity of Olea europaea L. cv. Cornezuelo table olives. Influence of in vitro simulated gastrointestinal digestion[J]. Food Chemistry， 2019， 297： 124933.

[4] Torre R， Fitó M， Covas M I. The bioavailability of olive oil phenolic compounds and their bioactive effects in hu-mans[M/OL]//Olives and Olive Oil in Health and Disease Prevention. Academic Press， 2021： 193-203[2021-02-29]. https：//doi.org/10.1016/C2018-0-05075-61.

[5] 鄭道序， 謝曉娜， 詹潮安， 等. 橄欖品種果實(shí)營(yíng)養(yǎng)成分的比較[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， 54（16）： 3967-3969.

[6] 鐘 ?超， 吳 ?倩， 卜智斌， 等. 青橄欖營(yíng)養(yǎng)成分及加工現(xiàn)狀研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2019（19）： 224-227.

[7] 閆輝強(qiáng)， 后春靜， 馬君義， 等. 不同品種和成熟度的油橄欖果表型性狀與脂肪酸組成及含量分析[J]. 中國(guó)油脂， 2019， 44（4）： 105-111.

[8] 趙金星， 彭遠(yuǎn)琴， 邱志浩， 等. 橄欖發(fā)育過(guò)程中風(fēng)味物質(zhì)的變化規(guī)律[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2017， 38（9）： 1747-1751.

[9] Ben Brahim S， Kelebek H， Ammar S， et al. LC-MS phenolic profiling combined with multivariate analysis as an approach for the characterization of extra virgin olive oils of four rare Tunisian cultivars during ripening[J]. Food Chemistry， 2017， 229： 9-19.

[10] Cabrera-Ba?egil M， Schaide T， Manzano R， et al. Optimiza-tion and validation of a rapid liquid chromatography method for determination of the main polyphenolic compounds in table olives and in olive paste[J]. Food Chemistry， 2017， 233： 164-173.

[11] 賴瑞聯(lián)， 馮 ?新， 陳 ?瑾， 等. 福州3個(gè)鮮食橄欖品種（系）的果實(shí)品質(zhì)特征與香氣組分分析[J]. 食品科學(xué)， 2020， 41（6）： 231-238.

[12] Deng J， Xu Z， Xiang C， et al. Comparative evaluation of maceration and ultrasonic-assisted extraction of phenolic compounds from fresh olives[J]. Ultrasonics Sonochem-istry， 2017， 37： 328-334.

[13] 王 ?偉， 呂旭健， 張 ?玉， 等. 基于聚類分析和主成分分析法的楊梅營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[J]. 食品工業(yè)科技， 2017， 38（1）： 278-280， 286.

[14] 池毓斌. 橄欖果實(shí)品質(zhì)特性及其代謝組學(xué)的初步研究[D]. 福州： 福建農(nóng)林大學(xué)， 2017.

[15] 孫玉敏. 植物黃酮抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志， 2020， 8（7）： 15-16.

[16] 彭真汾， 葉清華， 王 ?威， 等. 普通橄欖和清橄欖果實(shí)游離氨基酸差異成分與谷氨酰胺代謝[J]. 食品科學(xué)， 2019， 40（4）： 229-236.

[17] Marco C， Nurcan D， Roberta C. Technologies and trends to improve table olive quality and safety[J]. Frontiers in Microbiology， 2018， 9： 617.

責(zé)任編輯：黃東杰