巨細(xì)胞病毒性疾病患兒尿HCMV-DNA水平、并發(fā)癥及更昔洛韋治療后轉(zhuǎn)歸分析

趙代艷 蘇愛芳 郭長根

人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是最大動物病毒之一，屬于β 皰疹病毒亞科，因其進(jìn)入細(xì)胞后會導(dǎo)致細(xì)胞增大而得名。HCMV在人群中感染廣泛，且多呈隱性感染，潛伏部位多為唾液腺、乳腺、腎臟等［1］，能夠隨著唾液、乳汁、尿液等排出。多數(shù)免疫正常個體HCMV 感染無癥狀，但是對于免疫抑制個體及嬰幼兒，一旦發(fā)生感染則可出現(xiàn)明顯病癥，尤其是新生兒，后期可出現(xiàn)智力低下、感覺神經(jīng)性耳聾等后遺癥［2-3］。因HCMV 感染對嬰幼兒健康危害較大，可引起多種并發(fā)癥，需及早診治以改善患兒預(yù)后［4］。HCMV 為DNA 病毒臨床可通過檢測HCMV-DNA 以診治HCMV 感染?；谝陨纤?，本研究擬觀察HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 水平和并發(fā)癥，并分析更昔洛韋治療后轉(zhuǎn)歸情況，以期為HCMV 感染性疾病患兒的臨床診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年9月本院收治的70 例HCMV 感染性疾病患兒為研究對象，患兒均符合HCMV 感染診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］，可見黃疸、發(fā)熱、腹瀉、肝脾腫大等癥狀，排除合并先天染色體疾病、合并非HCMV 感染性疾病、合并缺血性腦病、膽紅素腦病等腦疾病。70 例患兒中男39 例，女31例；年齡為1～12 個月，平均年齡（4.87±1.59）個月；產(chǎn)期：早產(chǎn)兒4 例，足月兒66 例；生產(chǎn)方式：順產(chǎn)34 例，剖宮產(chǎn)36 例；喂養(yǎng)方式：母乳喂養(yǎng)及混合喂養(yǎng)45 例，人工喂養(yǎng)25 例。另選擇35 例健康幼兒作為對照，其中男20 例，女15 例；年齡為1～12 個月，平均年齡（4.95±1.61）個月；產(chǎn)期：早產(chǎn)兒1 例，足月兒34 例；生產(chǎn)方式：順產(chǎn)19 例，剖宮產(chǎn)16 例；喂養(yǎng)方式：母乳喂養(yǎng)及混合喂養(yǎng)24 例，人工喂養(yǎng)11 例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，受檢者家屬均知情了解并簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 HCMV-DNA 檢測

采集兩組兒童新鮮尿液2 mL，于-20℃環(huán)境中保存待用。以12 000 r/min 速率將尿液在TGL-16B 高速臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）上離心5 min，除去上清液后通過Ficoll 密度梯度離心法獲取PBMC，加入DNA 裂解液混勻振蕩10 min，在100℃環(huán)境中靜置10 min，充分裂解后再次以12 000 r/min 速率離心5 min，取上清液5 μL 作為反應(yīng)模板，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增（Mastercycler PCR 擴(kuò)增儀由德國Eppendorf 公司提供）。擴(kuò)增引物序列：上游5′-TGGGCATCGACTGACGAGCA-3′，下游5′-TTTAGCAGTCTGCATAGCCT-3′。向HCMVPCR 反應(yīng)管中加入經(jīng)過處理的5 μL 反應(yīng)模版，離心1 min；將反應(yīng)管加入定量PCR 儀器孔樣品反應(yīng)槽內(nèi)，按對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品、陽性定量質(zhì)控參考品（梯度108～104copies/mL）及待檢測標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱、標(biāo)記熒光基因種類及循環(huán)條件，擴(kuò)增條件：93℃2 min；預(yù)變性：93℃50 s、55℃60 s，循環(huán)數(shù)10 個；93℃30 s、55℃45 s，循環(huán)數(shù)30 個，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分析HCMV-DNA拷貝數(shù)，HCMV-DNA 試劑盒購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，HCMV-DNA＞2.0 log10copies/L為陽性。

1.2.2 治療

HCMV 感染性疾病患兒均予以護(hù)肝利膽、降酶及氧療等基礎(chǔ)治療，入院檢查后予以更昔洛韋（山東鳳凰制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20051937）靜脈滴注，誘導(dǎo)期使用劑量：每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中靜滴，2 次/d，治療2周；之后進(jìn)行維持治療，每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中靜滴，1 次/d，治療2 周。

1.2.3 肝功能指標(biāo)檢測

分別于治療前、治療后抽取患兒股靜脈血1～2 mL，離心后分離血清，檢測肝功能指標(biāo)，包括總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP），檢測儀器為德國羅氏公司cobas 8000全自動生化分析儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）描述，LSD-t 檢驗(yàn)行行兩組間比較；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較

觀察組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

表1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

組別觀察組對照組t/χ2值P 值n 70 35尿HCMV-DNA 水平（log10 copies/L）2.45±0.38 1.01±0.27 20.013＜0.001尿HCMV-DNA陽性率（%）43（61.43）0（0.00）33.915＜0.001

2.2 HCMV 感染性疾病患兒并發(fā)癥發(fā)生情況

HCMV 感染性疾病患兒并發(fā)癥可見貧血、肺炎、畸形、視網(wǎng)膜炎、腦炎，見表2。

表2 HCMV 感染性疾病患兒并發(fā)癥發(fā)生情況Table 2 Complications in children with HCMV infection

2.3 HCMV 感染性疾病患兒治療前后尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較

治療后，HCMV 感染性疾病患兒尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均較治療前顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），見表3。

表3 HCMV 感染性疾病患兒治療前后尿HCMV-DNA水平及HCMV-DNA 陽性率比較Table 3 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate of children with HCMV infectious diseases before and after treatment

2.4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標(biāo)比較

治療后，HCMV 感染性疾病患兒TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均較治療前顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），見表4。

表4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標(biāo)比較（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

表4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標(biāo)比較（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

組別治療前治療后t 值P 值n 70 70 TBIL（μmol/L）200.75±41.23 67.80±15.76 25.201＜0.001 DBIL（μmol/L）51.42±10.09 12.37±2.95 31.079＜0.001 ALT（U/L）318.65±52.76 68.43±17.14 37.738＜0.001 ALP（U/L）513.29±81.45 385.46±57.30 10.739＜0.001

3 討論

HCMV 存在明顯種屬特異性，在人類中傳播較廣。我國為HCMV 感染高發(fā)區(qū)，相關(guān)資料顯示，國內(nèi)HCMV 平均感染率可高達(dá)90%［6］。HCMV 能夠通過飛沫、尿液等體液傳播，其進(jìn)入人體造成原發(fā)性感染后會潛伏于組織內(nèi)，形成終身感染，多數(shù)情況下不會出現(xiàn)明顯癥狀，但當(dāng)隱性感染者免疫功能下降時(shí)，體內(nèi)HCMV 也隨之活躍而導(dǎo)致出現(xiàn)癥狀表現(xiàn)，成為顯性感染［7-8］。對于胎兒和嬰幼兒而言，母體感染HCMV 后會經(jīng)胎盤、產(chǎn)道、乳汁等途徑將病毒傳至其體內(nèi)而導(dǎo)致其感染病毒，而HCMV 感染會累及多個臟器，如心、肝、肺、腎等，引起多種并發(fā)癥，危害大。因此，及早發(fā)現(xiàn)和早期治療，對降低疾病造成的損害、改善患兒預(yù)后具有重要意義。

熒光定量PCR 擴(kuò)增技術(shù)對HCMV-DNA 的定量檢測在HCMV 感染早期診斷中有重要價(jià)值，可降低肝、肺、腎等器官并發(fā)癥發(fā)生率，提高臨床診斷準(zhǔn)確率，減少誤診和漏診［9］。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒進(jìn)行尿HCMV-DNA 檢測，并以健康嬰幼兒為對照，結(jié)果顯示，觀察組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均顯著高于對照組，表明HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 表達(dá)水平較高，在診斷嬰幼兒HCMV感染中具有一定價(jià)值。吳德等［10］進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示HCMV 先天性感染仔鼠可見明顯空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙。王澤民［11］研究指出，小兒HCMV 感染是其血液系統(tǒng)受累的中醫(yī)病因?qū)W基礎(chǔ)之一，能夠?qū)е禄純汗撬柙煅δ墚惓＃梢l(fā)相關(guān)性血液系統(tǒng)疾病。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒并發(fā)癥進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)，顯示其并發(fā)癥可見貧血、肺炎、畸形、視網(wǎng)膜炎、腦炎，所占比例依次為34.29%、24.29%、8.57%、7.14%、7.14%，可見HCMV 感染能夠引起血液系統(tǒng)、肺、腦等組織器官病變，且并發(fā)癥發(fā)生率較高。

目前臨床治療HCMV 感染性疾病包括基礎(chǔ)對癥治療和抗感染治療，更昔洛韋是抗病毒藥物，能夠抑制皰疹病毒DNA 合成復(fù)制，具體作用機(jī)制為競爭性抑制脫氧鳥苷三價(jià)磷酸鹽和DNA 聚合酶結(jié)合，抑制病毒DNA 合成；同時(shí)丙氧鳥苷三價(jià)磷酸鹽能夠和病毒DNA 結(jié)合，終止病毒DNA 鏈延長，繼而抑制病毒復(fù)制［12-13］。更昔洛韋在單純皰疹病毒和HCMV 所導(dǎo)致的感染中具有較好治療效果，張佳佳等［14］研究顯示，更昔洛韋治療人類皰疹病毒4 型感染患兒顯效率為60%，可以明顯縮短患兒住院時(shí)間，安全有效。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒予以更昔洛韋治療，結(jié)果顯示治療后HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均較治療前顯著降低，提示更昔洛韋可以明顯抑制HCMV-DNA 復(fù)制，可控制HCMV 感染。肝功能損害是HCMV 感染重要表現(xiàn)之一，結(jié)果中治療后HCMV 感染性疾病患兒TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均較治療前顯著降低，與李娟等人［15］研究結(jié)果相符，表明更昔洛韋可通過抑制HCMV-DNA 復(fù)制減輕肝損傷，使肝功能得到恢復(fù)。

綜上所述，HCMV 感染性疾病患兒尿HCMVDNA 水平較高，容易發(fā)生多種并發(fā)癥，如貧血、肺炎、視網(wǎng)膜炎等，對HCMV 感染性疾病患兒予以更昔洛韋治療，不但能夠有效降低其尿HCMV-DNA水平，且可以較好改善患兒肝功能。