哮喘兒童中痰細胞學(xué)與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性

陳菊梅， 王紅霞， 朱青雅， 程守斌

（1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，?？?570100； 2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院兒科，?？?570100）

哮喘是兒童主要的慢性呼吸道疾病之一，可導(dǎo)致反復(fù)呼吸困難，并伴有陣發(fā)性嘯叫、喘息、咳嗽、胸悶[1]，我國14 歲以下的兒童患病率為3.02%，嚴重影響患兒的身心健康，也給家庭和社會帶來精神負擔(dān)和經(jīng)濟負擔(dān)[2]。兒童哮喘的病理特征為慢性氣道炎癥和氣道壁重塑，慢性氣道炎癥是由嗜酸性粒細胞、肥大細胞和淋巴細胞的活化及氣道黏膜損傷引起的。血液嗜酸性粒細胞計數(shù)已確認是美泊利珠單抗有用的藥效生物標志物[3]，但其值隨時間而波動，不能用即時檢驗；另外，血液嗜酸性粒細胞計數(shù)不一定反映痰中的嗜酸性粒細胞計數(shù)[4]。然而痰細胞分布被認為可直接反映肺部炎癥，因此是哮喘研究中確定的首選方法；痰中嗜酸性粒細胞水平2%～3%已被用于定義嗜酸性粒細胞性哮喘[5]。嗜酸性粒細胞也可通過支氣管壁活檢和支氣管肺泡灌洗液進行檢測，但均為侵入性方法[6]。痰細胞學(xué)參數(shù)是評估哮喘氣道炎癥的一種非侵入性方法，但是臨床上常規(guī)取痰由于醫(yī)生指導(dǎo)不規(guī)范，兒童患者配合度較低，樣本收集常不具有代表性，檢出率存在一定誤差。本研究利用高滲鹽水誘導(dǎo)痰液安全、易行，其分析結(jié)果與通過支氣管沖洗液和支氣管肺泡灌洗液分泌的結(jié)果相似。因此，本研究觀察哮喘兒童中誘導(dǎo)痰細胞學(xué)參數(shù)變化與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性，可為臨床應(yīng)用提供一定依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年9月至2019年9月海口市人民醫(yī)院收治的確診輕度、中度持續(xù)性哮喘患者100例，輕度持續(xù)組（50例）、中度持續(xù)組（50例），年齡7～18 歲，均符合兒童哮喘診斷標準[7]。

1.2 納入、排除標準

納入標準：（1）過去2 個月未接受過吸入糖皮質(zhì)激素、鼻類固醇或白三烯改良劑，及最近10 d內(nèi)未使用全身性類固醇患者；（2）確診為輕度、中度持續(xù)性哮喘患者；（3）家屬簽署知情同意書。排除標準：（1）研究前4周患有呼吸道感染及其他慢性呼吸系統(tǒng)疾病的患者；（2）有重度全身性疾病、胸腔穿刺的患者；（3）心、肝、腎功能障礙患者。

1.3 治療方法

經(jīng)霧化器吸入布地奈德（澳大利亞阿斯利康公司，批號H20140475），0.25～0.5 mg/次，2 次/d，連續(xù)治療3 個月。

1.4 痰細胞學(xué)參數(shù)檢查

通過超聲霧化器吸入高滲鹽水誘導(dǎo)痰液?；颊咴谡T導(dǎo)前20 min 通過定量吸入器吸入400 μg沙丁胺醇，面罩吸入由超聲波霧化器（MultisonicLS290）產(chǎn)生的4 mL 單一高滲鹽水（3%NaCl）的氣霧劑，吸入時間最長為30 min，在鹽水吸入期間每5 min 排1 次痰，直到獲得足夠的樣本（1.5 mL）。痰液樣品用等體積的磷酸鹽緩沖液稀釋，該鹽水含10 mmol·L-1等體積的二硫蘇糖醇烷，室溫下渦旋振蕩，并離心10 min，將獲得的沉淀物用于分析痰細胞學(xué)。將沉淀物轉(zhuǎn)移到載玻片上，并準備濃稠的涂片。將其風(fēng)干，用甲醇固定，并用Geimstain 染色。

1.5 哮喘五項臨床指標

通過臨床哮喘參數(shù)的標準化問卷，得到孩子及其父母的回答，記錄3 個月隨訪期間的急性加重天數(shù)、使用沙丁胺醇作為急救藥物的天數(shù)、急診就診次數(shù)、夜間咳嗽情況及缺課天數(shù)。

1.6 肺功能參數(shù)檢測

采用Mater Screen Diffusion 肺功能儀（德國耶格公司）檢測2 組患兒治療前、后用力肺活量（FVC）及1 s 用力呼氣容積（FEV1）。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。痰細胞學(xué)檢測參數(shù)及肺功能參數(shù)為計量資料，用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較使用獨立樣本t 檢驗，組內(nèi)比較采用配對t 檢驗；哮喘五項臨床指標變化與痰細胞學(xué)檢測參數(shù)變化之間的關(guān)聯(lián)性采用Spearman 相關(guān)性分析。P≤0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人口學(xué)特征

納入研究的100例患兒中男性59例（59.00%），女性41例（41.00%），輕度和中度持續(xù)性哮喘患者各50例，年齡（11.27±3.04）歲，身高（139.58±12.82）cm，體質(zhì)量（32.19±9.06）kg，體質(zhì)量指數(shù)（16.37±2.34）kg·m-2，出現(xiàn)日間癥狀（18.63±7.94）d/月，其中51例（51.00%）患兒有過敏性家族史。

2.2 兩組患者治療前后痰細胞學(xué)參數(shù)和肺功能參數(shù)比較

治療前，中度持續(xù)組嗜酸性粒細胞比例高于輕度持續(xù)組（t=3.218，P=0.002），中度持續(xù)組肺功能參數(shù)FEV1 和FEV1/FVC 均低于輕度持續(xù)性組（P均＜0.01），兩組巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞比例的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組嗜酸性粒細胞和淋巴細胞比例均降低（P＜0.05），中性粒細胞比例均升高（P＜0.05）；輕度和中度持續(xù)性哮喘組各痰細胞百分比的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；兩組患者肺功能參數(shù)FEV1 和FEV1/FVC 均升高（P＜0.05）；輕度持續(xù)組FEV1 和FEV1/FVC 均高于中度持續(xù)性組（P＜0.001），見表1。

表1 兩組患者治療前后痰細胞學(xué)檢測和肺功能參數(shù)比較（±s，%）

表1 兩組患者治療前后痰細胞學(xué)檢測和肺功能參數(shù)比較（±s，%）

與本組治療前比較*P＜0.05。

時間 組別 n 嗜酸性粒細胞 巨噬細胞 中性粒細胞 淋巴細胞 FEV1 FEV1/FVC治療前 輕度持續(xù)組 50 3.14±0.48 31.89±7.4349.37±5.6216.07±3.9589.96±10.3471.83±3.24中度持續(xù)組 50 3.53±0.71 33.14±5.2848.21±4.5915.58±4.2377.03±12.5756.04±4.37 t 值 3.218 0.970 1.130 0.599 5.617 20.524 P 值 0.002 0.335 0.261 0.551 ＜0.001 ＜0.001治療后 輕度持續(xù)組 50 0.09±0.13* 28.32±7.7559.77±10.16* 12.56±5.42* 96.48±9.15* 84.27±4.64*中度持續(xù)組 50 0.07±0.14* 29.04±7.5360.25±9.37* 11.76±4.94* 88.17±10.39* 68.53±5.82*t 值 0.740 0.471 0.246 0.771 4.244 14.953 P 值 0.461 0.639 0.807 0.442 ＜0.001 ＜0.001

2.3 治療前后所有患者痰細胞學(xué)檢測參數(shù)及肺功能參數(shù)比較

治療后，患者痰細胞學(xué)檢測參數(shù)嗜酸性粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞比例均降低（P均＜0.05），中性粒細胞比例及肺功能參數(shù)FEV1 和FEV1/FVC 均升高（P均＜0.05），見表2。

2.4 哮喘五項臨床指標變化與痰細胞學(xué)檢測參數(shù)變化之間的關(guān)聯(lián)性分析

經(jīng)過Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果可見，痰細胞學(xué)嗜酸性粒細胞比例與急性加重天數(shù)、使用急救藥物沙丁胺醇、急診就診次數(shù)、夜間咳嗽、缺課天數(shù)呈正相關(guān)，與FEV1 和FEV1/FVC 呈負相關(guān)（P均<0.05）。巨噬細胞比例與夜間咳嗽、缺課天數(shù)呈負相關(guān)，與FEV1 和FEV1/FVC 呈正相關(guān)（P均<0.05）。淋巴細胞比例與FEV1/FVC 呈負相關(guān)（P<0.05），見表3。

表2 治療前后所有患者痰細胞學(xué)檢測參數(shù)以及肺功能參數(shù)比較（±s，%）

表2 治療前后所有患者痰細胞學(xué)檢測參數(shù)以及肺功能參數(shù)比較（±s，%）

時間 n 嗜酸性粒細胞 巨噬細胞 中性粒細胞 淋巴細胞 FEV1 FEV1/FVC治療前 100 3.35±0.62 32.52±6.35 48.79±5.11 15.83±4.08 83.50±11.46 63.94±3.81治療后 100 0.08±0.13 28.68±7.64 60.01±9.76 12.16±5.18 92.33±9.77 76.40±5.23 t 值 51.619 3.865 10.184 5.566 5.863 19.256 P 值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

表3 哮喘五項臨床指標變化與痰細胞學(xué)檢測參數(shù)變化之間的相關(guān)性分析

3 討論

本研究結(jié)果表明，哮喘兒童治療前中度持續(xù)組嗜酸性粒細胞比例明顯高于輕度持續(xù)組，而兩組巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞比例相似。這與Kansal 等[8]的研究一致，表明兒童（7～18歲）的痰中嗜酸性粒細胞計數(shù)與哮喘嚴重程度相關(guān)，50%以上患有嚴重嗜酸性粒細胞性哮喘的患者，血液和痰液中的嗜酸性粒細胞增多[9]。此外，血嗜酸性粒細胞增多經(jīng)常反映哮喘的嚴重程度，并且吸入性糖皮質(zhì)激素治療后痰液嗜酸性粒細胞減少和哮喘惡化減少之間的關(guān)系已得到廣泛認可[10]。本研究也表明，在治療前和經(jīng)布地奈德吸入治療3 個月后，輕度持續(xù)組FEV1 和FEV1/FVC 比值均高于中度持續(xù)性組，發(fā)現(xiàn)痰中嗜酸性粒細胞減少與臨床哮喘參數(shù)和FEV1 的改善相關(guān)。兒童患有哮喘病的頻率增高，其呼吸道炎癥及痰液嗜酸性粒細胞百分比增多，隨著一年中哮喘發(fā)作頻率的增加，痰中的嗜酸性粒細胞百分比也隨之增加[11]。在患有中重度哮喘且痰中嗜酸性粒細胞計數(shù)≥2%的患者中，經(jīng)氟維普蘭（受體拮抗劑）治療后，痰中嗜酸性粒細胞百分數(shù)減低，嗜酸性粒細胞的氣道炎癥減輕，肺功能和哮喘相關(guān)生活質(zhì)量得以改善[12]。據(jù)報道，長期嗜酸性氣道炎癥可能加重肺功能下降并增加發(fā)生慢性阻塞性肺疾病的風(fēng)險，較高的嗜酸性粒細胞與較低的FEV1/FVC 比值和降低FEV1 值預(yù)測相關(guān)，盡管哮喘患者的嗜酸性粒細胞計數(shù)較高，但無哮喘或喘息的患者嗜酸性粒細胞與肺活量之間的相關(guān)性相似[13]。

本研究表明，治療前中度持續(xù)組嗜酸性粒細胞比例高于輕度持續(xù)組，痰中嗜酸性粒細胞計數(shù)可能與哮喘嚴重程度相關(guān)，痰中嗜酸性粒細胞減少與臨床哮喘參數(shù)和FEV1 的改善相關(guān)。