復(fù)方香芍口服液治療動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的藥效和安全性研究

韓憲忠 沈正澤（通訊作者） 王柏桉 景良紅 丁家昱

（1 重慶市人民醫(yī)院＜中國(guó)科學(xué)院大學(xué)重慶醫(yī)院＞藥學(xué)部 重慶 400014）

（2 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院藥學(xué)部 重慶 402160）

（3 重慶涪陵中心醫(yī)院藥劑科 重慶 401331）

胃潰瘍是指發(fā)生在胃角、胃竇、賁門(mén)和裂孔疝等部位的一種常見(jiàn)的消化性潰瘍。以上腹部疼痛為主要癥狀，也可出現(xiàn)在左上腹部或胸骨、劍突后疼痛，嚴(yán)重者可出現(xiàn)胃出血、穿孔等并發(fā)癥。中醫(yī)藥改善患者整體狀態(tài)、促進(jìn)胃潰瘍愈合，以健脾益胃、理氣止痛為根本。目前市場(chǎng)上治療腹痛的中成藥較多，但同時(shí)具有健脾益胃、止痛、理氣的藥物不多，如現(xiàn)有的中藥制劑元胡止痛片止痛效果雖好，但理氣活血止痛之功似嫌不足。復(fù)方香芍口服液處方由木香、白芍、厚樸、吳茱萸、甘草組成。本文對(duì)復(fù)方香芍口服液進(jìn)行了初步的藥效學(xué)、安全性的研究[1-3]，結(jié)果表明本制劑具有良好地促進(jìn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)胃潰瘍的作用，且長(zhǎng)期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)主要臟器未出現(xiàn)明顯病理改變。

1.實(shí)驗(yàn)方法與材料

1.1 復(fù)方香芍口服液的制備

白芍、甘草切成片，與吳茱萸加12 倍量水煎煮1.5 小時(shí)，濾過(guò)，藥渣加10 倍量水煎煮1 小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，備用；厚樸粉碎成粗粉，木香切成片，加10 倍量水蒸餾6 小時(shí)，收集揮發(fā)油，蒸餾后的水煎液濾過(guò)，濾液與以上提取液混合，濾過(guò)，濾液減壓濃縮，濃縮液，備用。濃縮液加入吐溫-80 攪拌均勻，加入已溶解羥苯甲酸乙酯的乙醇溶液混合均勻，然后加入亞硫酸氫鈉充分?jǐn)嚢杈鶆蛉芙夂?，再加入已溶解揮發(fā)油的乙醇溶液，加純化水到1000ml，調(diào)pH 值至6 ～7，分裝，即得。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性Sprague-Dawley 大鼠，180 ～220 克，購(gòu)自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物成對(duì)飼養(yǎng)在透明的飼養(yǎng)籠里（47 厘米×32 厘米×21 厘米），籠底鋪有玉米芯制成的墊料，動(dòng)物可自由飲水和進(jìn)食。飼養(yǎng)室每天上午8 點(diǎn)開(kāi)始燈光照明，晚上8 點(diǎn)自動(dòng)熄燈，保持12 小時(shí)晝夜更替。每天實(shí)驗(yàn)從早上9 點(diǎn)開(kāi)始進(jìn)行。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

冰醋酸，分析純，臨用前配成10%使用。法莫替丁來(lái)源與本院藥房。復(fù)方香芍口服液（批號(hào)：181223），由重慶市人民醫(yī)院制劑室提供。按“2.1 復(fù)方香芍口服液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究”方法制備的制劑為臨床劑量組、低劑量組為臨床劑量組1/2 的劑量，用生理鹽水稀釋。

1.4 復(fù)方香芍口服液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的治療作用

五十只大鼠隨機(jī)分為5 組，即空白對(duì)照組、生理鹽水陰性組、復(fù)方香芍口服液低劑量組、復(fù)方香芍口服液臨床用量組、法莫替丁組，每組10 只。動(dòng)物術(shù)前24 小時(shí)起禁食不禁水，手術(shù)當(dāng)天用異氟烷麻醉動(dòng)物，無(wú)菌條件下在劍突下腹中線剖開(kāi)腹腔，暴露胃，在胃前壁近幽門(mén)外用微量注射器由漿膜面注入胃黏膜下層處注入30 微升20%的醋酸（空白對(duì)照組注射雙蒸水），分層縫合傷口。術(shù)后第2 天開(kāi)始給藥，空白對(duì)照組和生理鹽水陰性組灌胃生理鹽水（3ml/kg），復(fù)方香芍口服液低劑量組、復(fù)方香芍口服液臨床用量組分別灌胃復(fù)方香芍口服液1/2 劑量和原液，法莫替丁組灌胃1mg/kg。術(shù)后14 天麻醉處死動(dòng)物，取胃，用游標(biāo)卡尺測(cè)量出潰瘍的最長(zhǎng)徑和最寬徑，相乘算出潰瘍面積，并取潰瘍或相應(yīng)位置胃黏膜切片送病理檢查。

1.5 復(fù)方香芍口服液重復(fù)給藥的毒性作用

30 只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、臨床劑量組、高劑量組，動(dòng)物按“2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物”所描述方式飼養(yǎng)，每天灌胃1 次，灌胃量為3mL/kg，生理鹽水組灌胃生理鹽水，臨床劑量組灌臨床用制劑原濃度，高劑量組灌胃臨床用制劑生藥量5 倍高濃度制劑，連續(xù)灌胃30d。末次灌胃24h 后，二氧化碳處死動(dòng)物，取動(dòng)物大腦、小腦、胃、心、肝、肺器官組織，送病理檢查。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS22 統(tǒng)計(jì)分析完成。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組之間的差異采用完全隨機(jī)方差分析，各組之差的差異采用Bonferroni 事后檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P ＜0.05 作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2.結(jié)果

2.1 復(fù)方香芍口服液的制備及質(zhì)量控制

根據(jù)提取、制劑工藝研究制定的制備工藝，制得復(fù)方香芍口服液（批號(hào)：181223）1 批。其質(zhì)控指標(biāo)芍藥苷含量為7.31mg/L。

2.2 復(fù)方香芍口服液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的治療作用

完全隨機(jī)方差分析表明各組間具有顯著差異（F（4，45）=37.138，P ＜0.001，n=10），Bonferroni 事后檢驗(yàn)表明生理鹽水組的胃潰瘍面積較空白組顯著增加（P ＜0.001），復(fù)方香芍口服液臨床用量組和法莫替丁組能顯著縮小胃潰瘍面積（P ＜0.001），幾乎接近空白組動(dòng)物（見(jiàn)表1）。病理圖片顯示，醋酸可以致典型胃潰瘍結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為黏膜表面見(jiàn)炎性滲出及壞死碎屑，其下見(jiàn)纖維素樣壞死及肉芽組織形成，纖維化取代肌層達(dá)漿膜層，胃壁全層見(jiàn)大量急慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1B）。復(fù)方香芍口服液低劑量組動(dòng)物表現(xiàn)類(lèi)似的病理結(jié)構(gòu)（圖1C），而復(fù)方香芍口服液臨床用量組動(dòng)物及法莫替丁組動(dòng)物胃黏膜結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜層、肌層及漿膜層排列正常，未見(jiàn)明顯糜爛及潰瘍（圖1D 和E）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量復(fù)方香芍口服液組對(duì)潰瘍的修復(fù)作用明顯，低劑量組對(duì)潰瘍無(wú)修復(fù)作用。

表1 復(fù)方香芍口服液顯著減少胃潰瘍面積

2.3 復(fù)方香芍口服液重復(fù)給藥的毒性作用

動(dòng)物在反復(fù)給藥過(guò)程中無(wú)死亡。病理切片顯示，生理鹽水組及臨床劑量組動(dòng)物大腦、小腦、胃、心、肝、肺器官組織均未見(jiàn)異常結(jié)構(gòu)；高劑量組動(dòng)物有1 只動(dòng)物肝臟有水腫變性表現(xiàn)，其余動(dòng)物及臟器未見(jiàn)異常病理結(jié)構(gòu)。表明復(fù)方香芍口服液臨床使用劑量長(zhǎng)期使用安全，5 倍生藥量的高劑量長(zhǎng)期的反復(fù)給藥有可能導(dǎo)致肝臟水腫變性（圖2）。

3.討論

本文研究初步發(fā)現(xiàn)，復(fù)方香芍口服液對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍具有明顯的治療作用，臨床使用劑量長(zhǎng)期使用安全，超大劑量長(zhǎng)期使用有可能會(huì)導(dǎo)致肝臟水腫變性。

我們擬研制的復(fù)方香芍口服液經(jīng)臨床驗(yàn)證表明，該研究組方合理，肝胃并治，氣血同調(diào)。對(duì)胃痛、腹痛、脅痛都有較好的止痛作用，并能消除脹滿、增進(jìn)食欲，且無(wú)明顯副作用。本制劑處方組成為木香、白芍、厚樸、吳茱萸、甘草。木香始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為菊科植物木香的干燥根。具有行氣止痛、溫中和胃、利尿通淋等功效。其主要有效成分為揮發(fā)油、木香內(nèi)酯、生物堿等，臨床主要用于胃腸氣脹、消化性潰瘍，臨床上常與吳茱萸合用，治療消化道潰瘍及胃腸脹氣 。白芍始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，為毛茛科植物芍藥的根。具有解痙、肌松、抗菌、保護(hù)消化道潰瘍等作用[4]，其主要有效成分為芍藥苷，用于頭痛眩暈，脅痛，腹痛，四肢攣痛，血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗，盜汗等，臨床上常與甘草合用，用于治療面肌抽搐、偏頭痛、止痛、解痙、消化性潰瘍等[5]。如白芍甘草湯，加味芍藥甘草湯。甘草始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為豆科植物甘草的干燥根或根莖。具有清熱解毒，潤(rùn)肺止咳，補(bǔ)脾益氣，緩急止痛，調(diào)和諸藥之功效。其主要有效成分為甘草酸，甘草次酸，甘草甜素等，用于脾胃虛弱，倦怠乏力，脘腹、四肢攣急疼痛等。臨床常與白芍合用，用于消化道潰瘍和胃腸道解痙等，如白芍甘草合劑。厚樸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，為本蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的干燥皮。具有燥熱散滿、消食散痞，脘腹止痛之功效。其主要有效成分為揮發(fā)油、生物堿、厚樸酚、和厚樸酚等。用于濕滯傷中，脘痞吐瀉，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲喘咳。臨床常與木香、半夏合用，用于胃腹脹氣，行氣散結(jié)等。如半夏厚樸湯、厚樸排氣口服液。吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，為靶香科植物吳茱萸的未成熟果實(shí)。具有散寒止痛，疏肝理氣，溫脾利濕之功效。其主要有效成分為生物堿類(lèi)，毒性成分為揮發(fā)油，用于厥陰頭痛，寒疝腹痛，塞濕腳氣，行經(jīng)腹痛，脘腹脹痛等。常與木香合用，用于治療消化道潰瘍及胃腸脹氣，如香連丸。

目前，探索一種治療胃痛、腹痛、脅痛的新型復(fù)方中藥制劑已日趨成為醫(yī)療市場(chǎng)發(fā)展的需要。本文研究表明，復(fù)方香芍口服液的組方合理，質(zhì)量穩(wěn)定，能明顯促進(jìn)胃潰瘍的愈合，臨床劑量使用安全，超大劑量長(zhǎng)期反復(fù)使用有可能導(dǎo)致肝臟水腫樣變性，其機(jī)制需進(jìn)一步研究。