醫(yī)院制劑銀黃解毒消腫膠囊急性毒性試驗(yàn)

羅純清，王 興，羅黎霞，賀 燦，陳 可，謝嘉馳，易華平

(湘潭市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 湘潭 411100)

銀黃解毒消腫方為湘潭市中醫(yī)醫(yī)院的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由牡丹皮、赤芍、大黃、知母、連翹、山銀花、黃連等藥味組成，功專涼血解毒、散結(jié)消腫，多用于熱毒瘀血之急喉痹、疔癰瘡癤等的治療。我院臨床一直以協(xié)定處方“外科一號(hào)方”中藥湯劑的形式廣泛應(yīng)用。因中藥湯劑需要臨時(shí)煎煮，費(fèi)時(shí)費(fèi)力、不易保存、不便攜帶，故擬按相關(guān)技術(shù)原則將其開發(fā)成醫(yī)院制劑-銀黃解毒消腫膠囊[1]。膠囊劑型具有劑量更準(zhǔn)確、方便攜帶、美觀、掩蓋不良?xì)馕兜葍?yōu)勢(shì)。急性毒性試驗(yàn)即單次給藥毒性試驗(yàn)，其對(duì)初步闡明藥物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意義，并能提供一些與人類藥物過(guò)量所致急性中毒相關(guān)的信息[2]。本研究根據(jù)相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則，觀察ICR小鼠經(jīng)口灌服銀黃解毒消腫膠囊后出現(xiàn)的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，并預(yù)測(cè)人體用藥過(guò)量時(shí)可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)，初步觀察其用藥安全性，為其安全性評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與試劑

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)ICR小鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量范圍：18.2～22.0 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2011-0003。每籠5只進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)室溫度：21.4～23.9 ℃，濕度：42.3%～59.8%，換氣次數(shù)：15～20次/h，12 h/12 h交替照明，動(dòng)物檢疫合格、適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)后進(jìn)行稱重、分組和給藥。

1.2 試藥

銀黃解毒消腫膠囊(自制，取膠囊內(nèi)容物，含量：5.34 g生藥量/g，批號(hào)：20131110)；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號(hào)：20121222)。

1.3 儀器

TP-1200C型電子天平(湘儀天平儀器設(shè)備有限公司)。

2 方法

2.1 劑量設(shè)置

由于藥物濃度的限制，本試驗(yàn)采用最大濃度0.47 g干膏/mL，按累積劑量200.784 g生藥/kg，當(dāng)日給藥2次。給藥前禁食12 h以上，6 h后進(jìn)行第2次給藥，具體見表1。

表1 試驗(yàn)劑量及分組設(shè)計(jì)

2.2 藥液的配制

稱取銀黃解毒消腫膠囊內(nèi)容物14.1 g，加0.5% CMC-Na溶液適量，攪拌混勻，后定容至30 mL，即得0.47 g干膏/mL的藥液。

2.3 急性毒性最大耐受量法試驗(yàn)

選擇檢疫合格的SPF級(jí)ICR小鼠40只，雌雄各半，按性別體重采用區(qū)段隨機(jī)方法分為兩組，每組20只，分別為溶媒對(duì)照組和銀黃解毒消腫膠囊組。給藥前禁食12 h以上，以40 mL/kg的劑量經(jīng)口灌胃給予相應(yīng)供試品。銀黃解毒消腫膠囊累積劑量為200.784 g生藥/kg，分兩次給藥，間隔6 h。給藥當(dāng)天，尤其在給藥后0～4 h內(nèi)密切觀察并記錄各組動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和特點(diǎn)、毒性反應(yīng)出現(xiàn)及恢復(fù)時(shí)間以及死亡情況等。然后每天觀察2次，即上、下午各1次，連續(xù)觀察14天。分別于給藥前及給藥后第7天、第14天，使用電子天平對(duì)小鼠體質(zhì)量進(jìn)行稱量。所有小鼠在試驗(yàn)結(jié)束后腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉處死，并予以大體解剖，肉眼觀察臟器的位置、大小、色澤、粘連等情況，并檢查臟器表面和切面的質(zhì)地、積液及腫瘤等異常改變。在試驗(yàn)過(guò)程中若有非計(jì)劃死亡的動(dòng)物(包括瀕死動(dòng)物)，均應(yīng)進(jìn)行大體解剖。

2.4 觀察指標(biāo)

小鼠一般活動(dòng)狀況；中毒癥狀及死亡情況；體質(zhì)量變化；大體解剖檢查。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 小鼠一般活動(dòng)狀況

給藥前和14天觀察期間，溶媒對(duì)照組和銀黃解毒消腫膠囊組小鼠自主活動(dòng)如常，未見異常和死亡現(xiàn)象。

3.2 小鼠中毒癥狀及死亡情況

整個(gè)試驗(yàn)期間未見小鼠異常及死亡現(xiàn)象。

3.3 體質(zhì)量變化情況

分別于給藥前、給藥后第7天和第14天稱重，結(jié)果與溶媒對(duì)照組比較，銀黃解毒消腫膠囊組小鼠體重變化無(wú)顯著性差異，且體質(zhì)量增長(zhǎng)在正常范圍內(nèi)，說(shuō)明經(jīng)口灌服銀黃解毒消腫膠囊對(duì)ICR小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)無(wú)明顯影響，具體見表2、表3、表4。

表2 銀黃解毒消腫膠囊對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

表3 銀黃解毒消腫膠囊對(duì)雌性小鼠體質(zhì)量的影響

表表4 銀黃解毒消腫膠囊對(duì)雄性小鼠體質(zhì)量的影響

3.4 大體解剖檢查結(jié)果

兩組小鼠各器官表面和切面均未見明顯異常情況。

4 討論

急喉痹即現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所指的急性咽炎，是指咽黏膜、黏膜下及其淋巴組織的急性炎癥，臨床上常表現(xiàn)為咽部的紅腫熱痛和咽部干癢等[3]。風(fēng)熱痰學(xué)說(shuō)已成為現(xiàn)代急喉痹病因?qū)W說(shuō)的主流，并形成了廣泛的共識(shí)[4]。我院醫(yī)生在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)急喉痹多屬實(shí)證熱證，其病因病機(jī)多為外邪侵襲，上犯咽喉或肺胃熱盛，上攻咽喉。銀黃解毒消腫膠囊處方來(lái)源于我院醫(yī)生的臨床長(zhǎng)期實(shí)踐，并以協(xié)定處方的形式在院內(nèi)使用多年，療效肯定。

本課題組在前期已對(duì)銀黃解毒消腫膠囊的抗炎鎮(zhèn)痛作用及其對(duì)急性咽炎模型大鼠的治療作用進(jìn)行了研究，顯示其具有較好的治療作用。本試驗(yàn)在肯定其療效的前提下，對(duì)該制劑的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，ICR小鼠經(jīng)口灌胃給予銀黃解毒消腫膠囊(0.47 g干膏/mL)，最大劑量40 mL/kg，每天給藥2次(累積劑量為200.784 g生藥/kg)，對(duì)其一般活動(dòng)狀況和體質(zhì)量增長(zhǎng)無(wú)明顯影響，未見明顯急性毒性反應(yīng)。根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[5]，計(jì)算小鼠最大耐受藥物倍數(shù)，以耐受人臨床用量的100倍以上為安全，而本試驗(yàn)中小鼠最大耐受藥量相當(dāng)于70 kg成人臨床擬用量的627倍，提示銀黃解毒消腫膠囊口服用藥安全性較高。