RP-HPLC法測定河南產(chǎn)刺梨中維生素C的含量

秦麗娜，王?？?，李小敏，王先友

(河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開封 475004)

刺梨(RosaroxburahiiTratt)為薔薇科植物的果實(shí)，別名山王果、木梨子、刺菠蘿、刺酸梨子、九頭鳥，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、延緩衰老、抗癌等功能，常用來調(diào)理養(yǎng)身，也是一種罕見的果實(shí)[1-3].河南省大概從1993開始栽培刺梨，主要位于黃河故道地區(qū)，采收時(shí)間比別的省份早一個(gè)月左右.刺梨果實(shí)中含有豐富的超氧化物歧化酶(SOD)、維生素、微量元素、有機(jī)酸和氨基酸等化學(xué)成分[4].其中維生素C(L-抗壞血酸)含量根據(jù)不同的品種和生長階段可達(dá)1 300～3 500 mg/100 g，是蘋果中維生素C含量的455倍，獼猴桃的5 ～ 22倍，被譽(yù)為維生素C之王[5].

維生素C存在于新鮮蔬菜和水果中，它是維持人體正常生理功能的重要維生素.測定維生素C的方法主要有熒光光度分析法[6]、2，6-二氯靛酚鈉鹽滴定法[7]、2，4-二硝基苯肼比較法.高效液相色譜法具有專屬性好、快速、高效、靈敏度高的特點(diǎn)[8]，因此，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對維生素C進(jìn)行檢測，可排除其余成分的干擾.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Silgerrn TM C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；十萬分之一電子天平，賽多利斯BT125D.

1.2 試藥與樣品

甲醇：色譜純；磷酸二氫鉀：化學(xué)純；偏磷酸：分析純；維生素C對照品：W-01750-81-7天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司.

刺梨：2017年11月采自河南省開封市尉氏縣，經(jīng)河南大學(xué)藥學(xué)院袁王俊副教授鑒定為刺梨(RosaroxburahiiTratt)，曬干、粉碎，儲(chǔ)存于密封的干燥塑料袋中.

2 溶液配制

因維生素C不穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)過程中可能被氧化分解，參考文獻(xiàn)[9-10]用1%偏磷酸配制溶液可提高維生素C的穩(wěn)定性.

2.1 供試品溶液

精密稱取刺梨粉200 mg于離心管內(nèi)，加適量1%偏磷酸浸泡過夜，超聲提取15 min，放至室溫，離心5 min(3 500 r/min)，取上清液置于10 mL棕色容量瓶中；再向離心管中加入適量1%偏磷酸，同法提取三次，合并上清液，用1%偏磷酸溶液定容.

2.2 對照品溶液配制

精密稱取維生素C對照品約50 mg于50 mL的容量瓶中，用1%偏磷酸溶解、定容.分別精密量取0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4 mL于10 mL的棕色容量瓶中，分別用1%的偏磷酸溶液定容.

3 測定方法

3.1 色譜條件

色譜柱：Silgerrn TM C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)，流動(dòng)相：0.05 mol/L的磷酸二氫鉀水溶液，流速：1 mL/min，柱溫：室溫，檢測波長：245 nm(維生素C的最大吸收波長)，進(jìn)樣量：10 μL.

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 專屬性實(shí)驗(yàn)

按照上述色譜條件，得到的各實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：樣品溶液中，分離度約為3，如圖2，理論塔板數(shù)為9 798.

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 樣品溶液色譜圖

3.2.2 線性范圍

按照“2.2”配制出不同梯度對照品溶液，按照“3.1”色譜條件測定，分別以濃度x為自變量，峰面積y為因變量進(jìn)行線性回歸，測得維生素C的回歸方程為y=22 961x+12 357(r=0.992 5).結(jié)果表明，維生素C在8.16 ～ 14.28 mg/L濃度之間線性關(guān)系良好.

3.2.3 系統(tǒng)精密度

按照上述色譜條件，對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測得維生素C峰面積的RSD為0.13%.

3.2.4 供試品溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液分別于0、4、8、16、24 h進(jìn)行HPLC檢測.結(jié)果顯示供試品維生素C峰面積的RSD為0.69%，表明在24 h內(nèi)穩(wěn)定.

3.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按照“2.1”方法平行制備6份供試品溶液，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，測得維生素C含量的RSD值為1.4%.

3.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取含量已知的刺梨粉末，添加對照品適量，平行6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，測得平均回收率為99.45%，6次測定結(jié)果的RSD為1.6%(n=6).

3.2.7 樣品中維生素C的含量測定

按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液及對照品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，依照外標(biāo)對照法計(jì)算含量，結(jié)果見表1.

表1 刺梨中維生素C的含量

4 結(jié)論

1)實(shí)驗(yàn)中加入了具有還原作用的1%偏磷酸，從穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)供試品維生素C峰面積的RSD為0.69%，可以看出24 h內(nèi)含量基本無變化，能夠保證樣品和對照品溶液在測定的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定.

2)所用樣品采收于11月份，可能受品種或者采收季節(jié)影響，維生素C的含量與文獻(xiàn)相比偏低.因此建議：8月份左右，刺梨剛成熟時(shí)趕快收集、曬干、妥善保存.