免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

天津市第五中心醫(yī)院（300450）戴隨

伴隨科技不斷進(jìn)步，免疫檢驗(yàn)技術(shù)也隨之迅速發(fā)展，從單一免疫診斷技術(shù)不斷向著微量化、多基因、單細(xì)胞等方面發(fā)展。現(xiàn)階段生物及相關(guān)科學(xué)快速進(jìn)步，醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，為免疫學(xué)檢驗(yàn)提供了發(fā)展的堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，在醫(yī)學(xué)方面大大促進(jìn)了免疫檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展[1]。本文就免疫學(xué)檢驗(yàn)研究進(jìn)展作一綜述，并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，以期為免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的臨床研究與進(jìn)展提供具有指導(dǎo)性的意見(jiàn)。

1 傳統(tǒng)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

傳統(tǒng)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)又被稱為血清學(xué)試驗(yàn)，主要是通過(guò)對(duì)沉淀物的形成、聚集、擴(kuò)散以及溶血等現(xiàn)象進(jìn)行觀察，根據(jù)觀察結(jié)果對(duì)樣本中是否含有抗體或抗原等進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)合樣本進(jìn)行中和、溶血、凝聚、沉淀等反應(yīng)，上述各項(xiàng)方法均為人工操作，用時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，操作步驟繁多復(fù)雜，其中梅毒快速診斷試驗(yàn)為最具有代表性的傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)[2]。

1.1 甲胺苯紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（TRUSR） TRUSR主要以甲苯胺紅燃料顆粒為主，檢驗(yàn)結(jié)果較為準(zhǔn)確、穩(wěn)定性較高、試驗(yàn)速度較快，但該檢驗(yàn)方式易受到抗心磷脂抗體、高血脂等干擾，檢驗(yàn)結(jié)果可能出現(xiàn)假陽(yáng)性情況。

1.2 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR） RPR是檢驗(yàn)血清非特異性抗體的常用反應(yīng)素，主要以牛心肌脂抗原作為主要抗原，在其中加入活性坦顆粒，檢測(cè)過(guò)程中需充分混勻檢驗(yàn)試劑以及血清或血漿，且在8min后檢查結(jié)果，該實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)便捷、試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、檢查速度較快。RPR是明確有無(wú)感染風(fēng)險(xiǎn)、是否復(fù)發(fā)、臨床診斷等的重要標(biāo)準(zhǔn)。但RPR在為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、乙肝、瘧疾、孕婦等進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，可能出現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性的情況[3]。

2 膠體金免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

在臨床中，膠體金是一種應(yīng)用較為廣泛的標(biāo)記技術(shù)，主要原理為根據(jù)氯金酸在還原劑作用后形成金顆粒，通過(guò)靜電作用促進(jìn)金顆粒形成穩(wěn)定膠體狀態(tài)，將其稱為膠體金。膠體金標(biāo)記能夠通過(guò)還原法將膠體金制作成為顏色不同、形狀各異的膠體金顆粒，對(duì)蛋白質(zhì)發(fā)揮吸附作用，同時(shí)非共價(jià)結(jié)合抗生素、酶、毒素、免疫球蛋白等，是臨床有效的檢驗(yàn)工具，膠體金免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)主要分為斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)、免疫層析試驗(yàn)兩種[4]。

2.1 斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn) 斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)主要包括間接法測(cè)抗體和夾心法測(cè)抗原，前者主要是將SPA顯色/金標(biāo)記抗體、抗體、抗原于膜上固定，后者則將特異性單克隆抗體、抗原、抗體于膜上固定。斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)在結(jié)核分枝桿菌等抗體或抗原檢測(cè)中應(yīng)用較為廣泛[5]。

2.2 免疫層析試驗(yàn) 快速免疫層析試驗(yàn)主要是通過(guò)將抗體固定在硝酸纖維素膜中，隨后在其干燥部位浸入樣本，由于毛細(xì)管不斷作用，能夠促進(jìn)樣品向前移動(dòng)，在移動(dòng)至抗體部位時(shí)，樣品中抗體與抗原能夠進(jìn)行特異性結(jié)合，通過(guò)免疫沒(méi)染色或免疫膠體金能夠促進(jìn)其顏色的改變，進(jìn)而取得試驗(yàn)結(jié)果[6]。

3 化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)

CLTA（化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)）主要是指免疫反應(yīng)結(jié)合化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)，用以檢測(cè)抗體或抗原的分析技術(shù)，現(xiàn)階段CLTA屬于較為成熟的超微量活性物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，具有檢測(cè)速度快、限行范圍寬、特異性強(qiáng)、靈活度高等特點(diǎn)，但在我國(guó)該分析技術(shù)的可靠程度以及靈敏度仍存在一定不足[7]。

ECLIA（電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)）主要是將免疫檢測(cè)技術(shù)結(jié)合電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，具有速度快、穩(wěn)定性高、干擾因素少、成本低、無(wú)需催化劑等特點(diǎn)，能夠有效簡(jiǎn)化試驗(yàn)步驟，顯著提升試驗(yàn)速度，但ECLTA相關(guān)試劑價(jià)格過(guò)高，在臨床較難廣泛推廣使用。ECLTA技術(shù)試驗(yàn)原理相對(duì)簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)速度較快，干擾素較少、結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，對(duì)于體內(nèi)藥物濃度、維生素、血漿以及分泌激素等具有顯著的檢驗(yàn)作用[8]。

4 標(biāo)記免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

4.1 元素標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù) 釕元素、鑭系元素均為元素標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)中常見(jiàn)的標(biāo)記元素，分別通過(guò)電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)、分辨熒光免疫分析技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，前者主要通過(guò)電場(chǎng)作用被反復(fù)刺激從而放大信號(hào)，而分辨熒光免疫分析技術(shù)能夠應(yīng)用于兩種指標(biāo)的同時(shí)測(cè)定中。

4.2 量子點(diǎn)標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù) 量子尺寸相對(duì)較小，因其能夠連續(xù)能帶變成分立能級(jí)結(jié)構(gòu)，接受激發(fā)而產(chǎn)生熒光，故其實(shí)質(zhì)上屬于探針的一種?，F(xiàn)階段，Ⅲ～V族或Ⅱ～Ⅵ族元素所組成的納米微粒是應(yīng)用最多的量子點(diǎn)標(biāo)記類型，在生物多組分、免疫示蹤定位、疾病早期診斷以及細(xì)胞成像中具有較為顯著的推廣應(yīng)用價(jià)值。

4.3 核酸標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù) 核酸標(biāo)記檢驗(yàn)技術(shù)主要是將核酸的轉(zhuǎn)錄翻譯或擴(kuò)增作為設(shè)計(jì)原理，核酸轉(zhuǎn)錄翻譯主要是通過(guò)標(biāo)記的抗體DNA與抗原發(fā)生反應(yīng)后進(jìn)行胞外轉(zhuǎn)錄翻譯成酶后進(jìn)行測(cè)定，而核酸擴(kuò)增主要是DNA通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)在短期內(nèi)根據(jù)幾何級(jí)數(shù)不斷擴(kuò)增而達(dá)到數(shù)百萬(wàn)倍。核酸的轉(zhuǎn)錄翻譯與擴(kuò)增均具有較高的靈敏度。

5 生物傳感器免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

5.1 生物傳感器 生物傳感器是能夠在規(guī)定范圍進(jìn)行感應(yīng)與測(cè)量，根據(jù)測(cè)量結(jié)果規(guī)律將其轉(zhuǎn)變?yōu)橛行У男盘?hào)輸出裝置，主要是由識(shí)別元件感受器、存在光學(xué)或電化學(xué)檢測(cè)元件組成的信號(hào)轉(zhuǎn)換器兩部分組成，是由醫(yī)學(xué)、電子學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)等多種學(xué)科組合而成，主要優(yōu)勢(shì)在于檢驗(yàn)速度快、成本低、靈活度高、選擇性好等，能夠?qū)崿F(xiàn)在線持續(xù)監(jiān)測(cè)，伴隨近年來(lái)生物傳感器技術(shù)的不斷發(fā)展，使得該檢驗(yàn)技術(shù)得到醫(yī)學(xué)方面的支持和廣泛推廣。

5.2 生物芯片技術(shù) 生物芯片又被稱為微陣列，屬于一種高新技術(shù)，在生命科學(xué)領(lǐng)域中生物芯片發(fā)展較為快速，主要是指微電子技術(shù)或微加工技術(shù)于固相載體芯片上形成微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)細(xì)胞、組織及蛋白質(zhì)的有效檢測(cè)，生物芯片包括芯片實(shí)驗(yàn)室、蛋白芯片以及基因芯片三部分，生物因子速度相對(duì)較快，能夠獲取較為準(zhǔn)確的生物信息，具有較高的監(jiān)測(cè)效率，對(duì)于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展具有重要影響意義。

6 總結(jié)與展望

伴隨醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，要求免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)能精準(zhǔn)地分析特定部位取得的微量樣本，隨著微納電子學(xué)、分子生物學(xué)等科研技術(shù)的不斷進(jìn)步，在此趨勢(shì)下，免疫學(xué)檢驗(yàn)更多新興、更加敏感的檢驗(yàn)方式也隨之不斷被應(yīng)用，免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)正朝著更新、更高的方向發(fā)展。