華南地區(qū)和西南地區(qū)漢族心血管疾病人群SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性分析

彭潔雅，何雅軍，伍敏儀

廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣州510220

他汀類(lèi)藥物是臨床使用最廣泛的降脂藥，對(duì)抑制心血管疾病有顯著作用。但他汀類(lèi)藥物存在個(gè)體差異，部分患者會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，其中最典型的是肌毒性不良反應(yīng)，表現(xiàn)為橫紋肌溶解癥狀，甚者死亡［1］。研究表明，SLCO1B1和載脂蛋白E（Apo E）基因多態(tài)性可引起他汀類(lèi)藥物藥動(dòng)學(xué)的不同影響［2］，Apo E4攜帶者患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)較非Apo E4攜帶者高40%，并且他汀類(lèi)藥物對(duì)Apo E4攜帶者療效往往不佳或無(wú)療效，而對(duì)Apo E2攜帶者的降脂作用最強(qiáng)。本研究通過(guò)觀察華南地區(qū)和西南地區(qū)漢族心血管疾病人群血清SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性特點(diǎn)，比較兩地區(qū)間SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性分布差異，為他汀類(lèi)藥物的個(gè)體化用藥提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集2019年12月—2020年6月廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院、廣州市華僑醫(yī)院、佛山市第二人民醫(yī)院收治的心血管疾病患者200例作為華南地區(qū)漢族心血管疾病人群的數(shù)據(jù)，同期重慶大坪醫(yī)院、成都西區(qū)醫(yī)院、貴州畢節(jié)市人民醫(yī)院收治的心血管疾病患者200例作為西南地區(qū)漢族心血管疾病人群的數(shù)據(jù)。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～80歲；合并高脂血癥；無(wú)肝腎功能不全及腫瘤。高脂血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①高膽固醇血癥：血清TC>6.48 mmol/L或（和）LDL-C>3.80 mmol/L；②高甘油三脂血癥：血清TG>1.76 mmol/L；③高密度脂蛋白血癥：血清HDL-C≤1.04 mmol/L。

1.2 血清SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性檢測(cè)采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR法。采集受試者靜脈血2 mL，EDTA抗凝，使用人全血核酸提純?cè)噭┖刑崛⊙夯蚪MDNA。提取的DNA推薦濃度為5～15 ng/μL，DNA的A260/A280為1.8～2.0。PCR反應(yīng)條件：37℃10 min；95℃預(yù)變性5 min；95℃15 s，60℃45 s（在此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)），40個(gè)循環(huán)。熒光信號(hào)采集為FAM通道（SLCO1B1*1b 388A、SLCO1B1*5 521T、Apo E2 526C和Apo E4 388T）、VIC通道（SL?CO1B1*1b 388G、SLCO1B1*5 521C、Apo E2 526T和Apo E4 388C）、ROX通道（內(nèi)標(biāo)基因）。基因檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司。

1.3 基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果判斷SLCO1B1基因388A>G、521T>C兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與他汀類(lèi)藥物相關(guān)，這兩個(gè)位點(diǎn)可形成4種單倍體和9種表型，4種單倍體為：SLCO1B1*1a（388A-521T）、SLCO1B1*1b（388G-521T）、SLCO1B1*5（388A-521C）、SLCO1B1*15（388G-521C）［3-4］：9種表型為：*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b、*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15、*5/*5、*5/*15、*15/*15?；虮硇?1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b為正常代謝型，*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15為中間代謝型，*5/*5、*5/*15、*15/*15為弱代謝型。

Apo E主要有526C>T和388T>C兩種單核苷酸多態(tài)性，可形成3種單倍體和6種表型，3種單倍體為：Apo E3（388T-526C）、Apo E2（388T-526T）、Apo E4（388C-526C）；6種表型為：E2/E2、E2/E3、E2/E4、E3/E3、E3/E4、E4/E4?；虮硇虴2/E2和E2/E3為保護(hù)類(lèi)基因，E2/E4和E3/E3為大眾類(lèi)基因，E3/E4和E4/E4為風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)基因。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 華南地區(qū)和西南地區(qū)心血管疾病人群SLCO1B1基因多態(tài)性分布情況華南地區(qū)SLCO1B1基因正常代謝型155例（77.5%），中間代謝型44例（22.0%），弱代謝型1例（0.5%）；西南地區(qū)分別為152例（76.0%）、42例（21.0%）、6例（3.0%）。兩地區(qū)SLCO1B1不同基因表型分布比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）。

2.2 華南地區(qū)和西南地區(qū)心血管疾病人群Apo E基因多態(tài)性分布情況華南地區(qū)Apo E基因保護(hù)類(lèi)24例（12.0%），大眾類(lèi)144例（72.0%），風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)32例（16.0%）；西南地區(qū)分別為22例（11.0%）、145例（72.5%）、風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)33例（16.5%）。兩地區(qū)Apo E不同基因表型分布比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）。

3 討論

他汀類(lèi)藥物是目前全球臨床首選使用的調(diào)脂藥物（Ⅰ類(lèi)推薦，A類(lèi)證據(jù)）［5］。然而，不同個(gè)體對(duì)他汀類(lèi)藥物的反應(yīng)和藥物代謝存在較大差異，文獻(xiàn)報(bào)道為10%～70%［6］。高強(qiáng)度他汀治療伴隨著更高的肌病以及轉(zhuǎn)氨酶或肌酸激酶上升風(fēng)險(xiǎn)，在中國(guó)人群中更為突出［7］；肌肉癥狀、肝臟損害、中樞神經(jīng)癥狀、糖尿病等是導(dǎo)致患者早期減藥或停藥的主要原因之一［8-9］；此外，長(zhǎng)期服用他汀類(lèi)可誘發(fā)輕度認(rèn)知障礙或永久性癡呆［10］，減藥或停藥則可增加臨床動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病事件的發(fā)生率［5］。因此，他汀類(lèi)藥物使用的獲益與潛在風(fēng)險(xiǎn)間的評(píng)估已成為醫(yī)患共同關(guān)心的問(wèn)題。

SLCO1B1是一種位于肝細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)體，參與轉(zhuǎn)運(yùn)多種藥物，將藥物運(yùn)送至肝臟，發(fā)揮藥效，或轉(zhuǎn)化為活性物質(zhì)［13-14］。SLCO1B1基因388A>G、521T>C兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與他汀類(lèi)用藥相關(guān)，攜帶突變基因的人群轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能降低，因此發(fā)生肌病等不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)較正常人群更高［2］。臨床藥物基因組學(xué)實(shí)施聯(lián)盟（CPIC）指南推薦，以SLCO1B1基因型為依據(jù)調(diào)整他汀類(lèi)藥物的用藥劑量，若患者具有SLCO1B1的正常代謝類(lèi)基因，表明患者對(duì)他汀類(lèi)藥物有較強(qiáng)的代謝能力，臨床上可以考慮適當(dāng)增加他汀類(lèi)藥物的劑量；若患者具有SLCO1B1的中間代謝類(lèi)基因，臨床建議使用中等劑量他??；若患者的SLCO1B1基因是弱代謝類(lèi)基因，說(shuō)明患者代謝他汀類(lèi)藥物的能力很弱，有高度肌病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，要謹(jǐn)慎使用他汀類(lèi)藥物。

Apo E主要由E2、E3、E4三種等位基因調(diào)控，不同的Apo E亞型對(duì)低密度脂蛋白受體的親和力不同。另外，E2等位基因與冠心病的較低風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，E4等位基因與冠心病的較高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)［9］。因此，帶有保護(hù)類(lèi)基因或大眾類(lèi)基因的高脂血癥患者，使用他汀類(lèi)藥物的療效明顯，日常用藥及飲食降脂效果最好［12］。具有Apo E風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)基因患者，冠心病、心肌梗死、腦梗死、老年癡呆的患病風(fēng)險(xiǎn)增加，他汀類(lèi)藥物治療效果不佳，日常生活宜低脂低鹽低糖，忌煙酒。

本研究發(fā)現(xiàn)，400例受檢者中同時(shí)具有SLCO1B1正常肌病風(fēng)險(xiǎn)型和Apo E保護(hù)類(lèi)基因型患者39例（9.75%），此類(lèi)人群對(duì)他汀藥物劑量耐受性強(qiáng)，發(fā)生心腦血管事件和肌病相關(guān)不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)較低，療效好，是他汀類(lèi)藥物的最佳受益人群；同時(shí)具有SLCO1B1高度肌病風(fēng)險(xiǎn)型和Apo E風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)基因型的患者2例（0.5%），此類(lèi)人群對(duì)他汀藥物的代謝能力較差，治療效果不佳，導(dǎo)致在高劑量使用他汀的突變型患者中容易發(fā)生肌病等不良反應(yīng)，他汀類(lèi)藥物在此類(lèi)人群中應(yīng)禁用［15］。

本研究結(jié)果顯示，華南地區(qū)與西南地區(qū)漢族心血管疾病人群的SLCO1B1和Apo E基因各表型多態(tài)性比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明同種族之間大致相同，間接支持了SLCO1B1和Apo E的基因頻率分布差異與種族相關(guān)的觀點(diǎn)［14，16］。另外，兩地區(qū)的漢族心血管疾病人群各基因型分布規(guī)律幾乎完全相同，與我國(guó)其他區(qū)域無(wú)明顯差異［14，16-17］。首先，兩地區(qū)Apo E基因的大眾類(lèi)基因型E2/E4和E3/E3最多，其中尤以E3/E3最多，基本符合人群Apo E表型分布的共同特點(diǎn)，即基因型為E3/E3的人群分布最多；其次，SLCO1B1基因型正常代謝型占比最大，中間代謝型較多，弱代謝型占比最少。表明華南和西南地區(qū)漢族人群大致以正常代謝類(lèi)基因見(jiàn)多，大部分漢族人群對(duì)他汀類(lèi)藥物都有較強(qiáng)的代謝能力，服用他汀類(lèi)藥物較安全。

綜上所述，華南地區(qū)與西南地區(qū)相比，兩地區(qū)間漢族心血管疾病患者的SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性分布無(wú)明顯差異。但由于本研究的樣本量有限，可能在統(tǒng)計(jì)上存在偏倚，仍需臨床上大樣本量的數(shù)據(jù)進(jìn)一步分析SLCO1B1和Apo E基因多態(tài)性與他汀類(lèi)藥物的療效和安全性的關(guān)系，從而更科學(xué)的評(píng)估此類(lèi)藥物的效益/風(fēng)險(xiǎn)比。