肉雞馬立克氏病熒光PCR診斷

陳忠瓊，駱璐，凌洪權(quán)，董春霞，姚璐，蔣佳利，歐陽(yáng)吳莉，李泰，曾政

（重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶渝北 401120）

馬立克氏病（MD）是由馬立克氏病病毒（MDV）引起的一種常見的禽類淋巴組織增生性傳染病，病禽以外周神經(jīng)、虹膜、臟器及皮膚等組織器官發(fā)生單核細(xì)胞浸潤(rùn)并形成腫瘤為特征。依據(jù)生物學(xué)特性將MDV分成3個(gè)血清型，MDV-1型為致瘤MDV，MDV-2 型為不致瘤MDV，MDV-3 型為HVT，其中只有MDV-1 型才具有致病性。不同品種或品系的雞均可感染該病，母雞比公雞更易感。該病一般發(fā)生于1 月齡以上的雞，2～7月齡為發(fā)病高峰。

1 發(fā)病情況

某肉雞場(chǎng)（存欄量約16 000 羽）90 日齡左右的雞陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病、死亡，1 個(gè)月內(nèi)發(fā)病約3 000羽，死亡約2 000羽。

患雞精神沉郁、羽毛松亂、食欲不振、極度消瘦，最終衰竭而亡，有些病雞出現(xiàn)肢體麻痹，步態(tài)不穩(wěn)等癥狀。病雞經(jīng)抗菌藥物治療，無(wú)明顯效果。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

采集10份患雞腎臟、肝臟、脾臟、心臟病料應(yīng)用熒光PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。

2.1 檢測(cè)材料

2.1.1 樣品 剪取待檢組織病料約1 g 研磨后加入1.5 mL PBS 液繼續(xù)緩慢研磨成勻漿，取勻漿液轉(zhuǎn)移到2 mL 無(wú)DNA、RNA 酶污染的離心管中，8 000 r/min 離心5 min 后，取上清液備用。

2.1.2 試劑 病毒RNA/DNA 提取試劑盒；禽馬立克氏病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒。

2.2 檢測(cè)方法 參照病毒RNA/DNA提取試劑盒使用說(shuō)明書，提取組織病料中的馬立克氏病毒DNA。操作如下：在每個(gè)PCR 反應(yīng)管中先加入熒光PCR 反應(yīng)液15 μL，之后再分別向每個(gè)PCR反應(yīng)管中加入模板DNA 5 μL。在熒光PCR 儀上進(jìn)行50 ℃2 min，95 ℃10 min，循環(huán)95 ℃15 s，60℃60s，共40次，在每次循環(huán)第二步（60℃60s）收集熒光FAM信號(hào)的擴(kuò)增反應(yīng)。

3 檢測(cè)結(jié)果

10 份病料均出現(xiàn)馬立克氏病病毒核酸特異性熒光曲線，結(jié)果均為陽(yáng)性。

4 小結(jié)

馬立克氏病是家禽常見的免疫抑制性傳染病，MDV一旦感染，不論雞群免疫狀態(tài)如何，都會(huì)在雞群中快速傳播，并長(zhǎng)期存在，這也是MD難以控制的原因。

及時(shí)、準(zhǔn)確、高效地對(duì)MD進(jìn)行診斷有重要的防控意義。MD 實(shí)驗(yàn)室診斷方法較多，包括病毒分離、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA、PCR 法、熒光PCR法、間接免疫熒光法等，其中熒光PCR 是定量檢測(cè)方法，具有靈敏性高、特異性強(qiáng)、速度快等優(yōu)點(diǎn)?！?/p>