SD大鼠“環(huán)形固定法”皮膚移植模型建立及評估

孫 倩，張 賀

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 實驗動物室，遼寧 沈陽 110016

大面積全層皮膚缺損是臨床和戰(zhàn)創(chuàng)傷中的常見病、多發(fā)病，皮膚移植術(shù)是其治療的基本手段，也是盡早封閉創(chuàng)面的的有效方法。建立皮膚移植動物模型是臨床研究的前提。大鼠由于價格低廉，實驗操作方便簡單，實驗用抗體種類齊全等優(yōu)點被許多實驗者采用[1-2]，但大鼠皮膚皮下有肌肉層，滑動范圍較大，其愈合過程以收縮愈合為主，大鼠的植皮模型制作一直是實驗外科研究的難點。開發(fā)一種針對大鼠皮膚特點的植皮模型在皮膚再生領(lǐng)域研究中具有十分重要的意義[3-4]。本課題組針對此難點成功開發(fā)了大鼠“環(huán)形固定法”皮膚移植模型?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及設(shè)計 選取30只體質(zhì)量260～300 g的SPF級雄性SD大鼠[北京華富康生物科技股份有限公司提供，許可證號SCXK(京)2019-0008]，移植后單籠飼養(yǎng)，自由進食進水。設(shè)計4處植皮對比實驗：在大鼠背部設(shè)計4個直徑約10 mm的圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面位置，分別標記為1、2、3、4號位(圖1)，1號位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠尾部皮膚，2號位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠背部皮膚，3號位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠側(cè)腹部皮膚，4號位采用常規(guī)移植法移植大鼠尾部皮膚[5]。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

圖1 4處預(yù)植皮位 圖2 1號位和3號位取皮處(a.尾部；b.側(cè)腹部)

1.2 儀器與試劑 0.3%戊巴比妥鈉溶液(福州飛凈生物科技有限公司)；10%氯化鈉注射液(華仁藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)品批號T2008064)；4%多聚甲醛溶液(福州飛凈生物科技有限公司)；0.5%碘伏溶液(上海利康消毒高科技有限公司，產(chǎn)品批號20200623S)；推子(深圳科德士電器有限公司)。

1.3 動物模型制作 適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察5～7 d后，戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉。全身無疼痛反應(yīng)后，大鼠背部和腹部備皮，碘伏溶液進行全身消毒，手術(shù)全程為無菌操作[5-7]。取大鼠尾尖部皮膚，用線在距離尾尖4 cm處結(jié)扎，然后用剪刀剪掉尾尖(圖2a)，剝離皮膚，平鋪剪成直徑10 mm左右的形狀，放入10%生理鹽水中，備用。取側(cè)腹部皮膚，在腹部左側(cè)用記號筆畫好直徑約10 mm的圓形(圖2b)，用鑷子提起皮膚，用剪刀沿著圓形邊緣剪出一個切口，沿著切口鈍性分離皮膚和肌肉，沿著圓形邊緣剪掉整塊腹皮，備用。取背部皮膚，在背部用記號筆畫好4個直徑約10 mm的圓形，用鑷子提起皮膚，用剪刀沿著圓形邊緣剪出一個切口，沿著切口鈍性分離皮膚和肌肉，沿著圓形邊緣剪掉背皮[8-10](圖3a)。1號位采用“環(huán)形固定法”(圖3b)，將取好的尾皮底部平鋪到創(chuàng)面，與創(chuàng)面貼合，用固定環(huán)壓住尾皮，固定環(huán)的中間凹槽部位用線與大鼠皮膚縫合以防脫落；2號位用背皮，3號位用側(cè)腹皮，方法同1號位。4號位采用常規(guī)移植法(圖3c)，將尾皮平鋪到創(chuàng)面上，背部原皮壓住尾皮，原皮的邊緣與創(chuàng)面邊緣縫合。移植皮取材見圖4。

圖3 1～4號植皮位及植皮方法(a.1～4號植皮位；b.環(huán)形固定法；c.常規(guī)移植法) 圖4 移植皮取材

1.4 觀察指標 比較1～4號植皮位的植皮成功率，體表觀察結(jié)果[11-12]，以及HE染色表現(xiàn)。HE染色：各組皮膚標本均常規(guī)固定，組織脫水，石蠟包埋后切片，脫蠟水化處理后進行HE染色。

2 結(jié)果

2.1 植皮成功率及體表觀察結(jié)果 1～3號位植皮成功率為85%，4號位為60%。1～3號位皮膚成活后均表現(xiàn)出與供皮區(qū)類似的外觀結(jié)構(gòu)，毛發(fā)繼續(xù)生長，證明毛囊存活；4號位存活皮膚有部分壞死，依賴瘢痕愈合。2號位創(chuàng)面愈合效果最佳，術(shù)后5周左右基本愈合。見圖5。

2.2 HE染色表現(xiàn) 1～4號位存活皮膚均保持供區(qū)皮膚結(jié)構(gòu)特點：背部皮膚真皮層厚，毛囊粗大；側(cè)腹部皮膚真皮層和表皮層較薄，毛囊弱?。晃膊科つw皮脂腺分布較多，毛囊傾斜角度大[13]。2號位創(chuàng)面愈合效果最佳，1號位創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于4號位。見圖6。

圖5 體表觀察結(jié)果(a.1號位；b.2號位；c.3號位；d.4號位)

圖6 術(shù)后14 d HE染色表現(xiàn)(a.1號位；b.2號位；c.3號位；d.4號位)

3 討論

創(chuàng)面愈合是一個動態(tài)過程，涉及多種細胞的生物學(xué)功能，包括角質(zhì)細胞增殖、成纖維細胞產(chǎn)生細胞外基質(zhì)、毛細血管生成及膠原合成等。本實驗結(jié)果顯示：1～3號位植皮成功率為85%，4號位為60%；1～3號位皮膚成活后均表現(xiàn)出與供皮區(qū)類似的外觀結(jié)構(gòu)，毛發(fā)繼續(xù)生長，毛囊存活，4號位存活皮膚有部分壞死，依賴瘢痕愈合，2號位創(chuàng)面愈合效果最佳，術(shù)后5周左右基本愈合；HE染色中，2號位創(chuàng)面愈合效果最佳，1號位創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于4號位。這提示，“環(huán)形固定法”的創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于常規(guī)移植法，且以背部皮移植最佳。

在實驗過程中，防止大鼠抓咬掉新移植的皮膚是關(guān)鍵，“環(huán)形固定法”能夠有效防止植皮早期皮片移動、脫落及大鼠自身抓撓，促進創(chuàng)面更好地恢復(fù)，使大鼠自由活動不被束縛?！碍h(huán)形固定法”成功率高[14-15]，術(shù)后未使用抗生素藥物，動物未出現(xiàn)感染及死亡。

綜上所述，隨著皮膚移植術(shù)的發(fā)展和進步，皮膚移植動物模型的應(yīng)用范圍將越來越廣泛，本研究建立的“環(huán)形固定法”皮膚移植模型可為更多相關(guān)研究提供實驗基礎(chǔ)。