超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定蜂蜜中10種農(nóng)藥殘留

王仁德 吳升德 谷群遠 湯勇 劉鋒

摘 要：目的：利用QuEChERS法提取，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜建立同時測定蜂蜜中10種農(nóng)藥（多菌靈、啶蟲脒、氯蟲苯甲酰胺、殺撲磷、倍硫磷、乙螨唑、溴氰菊酯、噠螨靈、氯菊酯、聯(lián)苯菊酯）殘留的方法。方法：以Accucore aQ C色譜柱（2.6 μm，2.1 mm×150 mm）進行色譜分離，通過質(zhì)譜的MRM掃描模式進行定性篩查和定量檢測。結(jié)果：10種農(nóng)藥殘留在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，定量限（LOQ）為3～5 μg/kg。空白蜂蜜樣品在2.5 μg/kg、5.0 μg/kg和10.0 μg/kg 3個加標(biāo)水平的平均回收率為73.6%～110.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%～7.5%。結(jié)論：該方法適合蜂蜜中農(nóng)藥多殘留的快速篩查和定量分析。

關(guān)鍵詞：蜂蜜;農(nóng)藥殘留;超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

Determination of Ten Pesticide Residues in Honey by Ultra High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

WANG Rende， WU Shengde*， GU Qunyuan， TANG Yong， LIU Feng

（Yancheng Products Quality Supervision and Inspection Institute， Yancheng 224056， China）

Abstract： Objective： To extract by QuEChERS method and establish the simultaneous determination of 10 pesticides in honey （carbendazim， acetamiprid， chlorantraniliprole， pyrethionine， fenthion， etoxazole， etc.） in honey Deltamethrin， pyridaben， permethrin， bifenthrin） residue methods. Methods： Chromatographic separation was performed on an Accucore aQ C18 column （2.6 μm， 2.1 mm×150 mm）， and qualitative screening and quantitative detection were performed by the MRM scanning mode of mass spectrometry. Results： The 10 pesticide residues showed a good linear relationship within a certain concentration range， the correlation coefficients were all greater than 0.99， and the limit of quantification （LOQ） was 3～5 μg/kg. The average recoveries of blank honey samples at the three spiked levels of 2.5 μg/kg， 5.0 μg/kg and 10.0 μg/kg were 73.6%～110.8%， and the relative standard deviations were 0.1%～7.5%. Conclusion： This method is suitable for rapid screening and quantitative analysis of pesticide residues in honey.

Keywords： honey; pesticide residues; ultra high performance liquid chromatography

蜂蜜是我國傳統(tǒng)的保健食品，也是我國重要的出口創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品。蜜蜂在傳播花粉、采集花蜜和花粉的過程中，不可避免的會接觸到空氣、水、農(nóng)作物上殘存的農(nóng)藥，而且蜂農(nóng)為了防治蜜蜂的病蟲害，生產(chǎn)中經(jīng)常使用殺螨劑，造成農(nóng)藥在蜂產(chǎn)品中的殘留。人們長期食用含有農(nóng)藥殘留的蜂蜜，不利于身體健康。目前，我國現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)涉及蜂蜜中農(nóng)藥殘留限量指標(biāo)的僅有10項，已不符合市場需求，且不利于蜂蜜產(chǎn)品的質(zhì)量控制。蜂蜜基質(zhì)復(fù)雜，主要成分是葡萄糖、果糖、蔗糖和水分，除此之外，還含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和多酚類物質(zhì)等，這使得蜂蜜中農(nóng)藥殘留提取凈化的前處理方法，以及檢測分析方法的選擇尤為重要。近年來蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢測的前處理方法中，應(yīng)用比較多的主要有液液萃取法、固相萃取法和QuEChERS法等。常用的檢測方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜法等。本文研究采用QuEChERS法進行蜂蜜樣品的前處理，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜建立快速測定蜂蜜中10種農(nóng)藥殘留的方法，為我國蜂蜜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的常規(guī)監(jiān)管和風(fēng)險評估提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

SCIEX Triple Quad 5 500+LC-MS/MS-QTRAP Ready三重四極桿質(zhì)譜/線性離子阱質(zhì)譜，配有增強子離子掃描（EPI）模式，（SCIEX公司，美國）;HMG-WY型多管渦旋振蕩儀（山東美正生物科技有限公司）;Thermo Scientific Heraeus Biofuge Stratos高速冷凍離心機（美國熱電公司）。

乙腈和甲醇為色譜純（Fisher Scientific），甲酸和甲酸銨為HPLC級（Tedia）;QuEChERS提取鹽包（4 g硫酸鎂、1 g乙酸鈉）、凈化劑（400 mg/mL硫酸鎂、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C18）（美國安捷倫公司）;10種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（多菌靈、啶蟲脒、氯蟲苯甲酰胺、殺撲磷、倍硫磷、乙螨唑、溴氰菊酯、噠螨靈、氯菊酯、聯(lián)苯菊酯）（純度均大于98%，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司，中國）;實驗用水為超純水，由美國Millipore公司純水儀制備。

蜂蜜購于鹽城市各大超市，20 ℃保存。

1.2 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，以甲醇定容，配制成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用甲醇稀釋定容，制成10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液，-18 ℃儲存。用50%甲醇將標(biāo)準(zhǔn)中間液配制成各濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4 ℃儲存。

1.3 樣品處理

精確稱取5 g樣品于50 mL離心管中，加入5 mL的純水搖勻，渦旋振蕩3 min后，靜置5 min，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩提取2 min，加入鹽包，立即渦旋振蕩2 min后，5 000 r/min離心5 min，移取2 mL上清液至裝有0.5 g凈化劑的10 mL離心管中，立即渦旋振蕩2 min后，5 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜，待上機測定。

1.4 儀器分析條件

1.4.1 色譜條件

采用Accucore aQ C色譜柱（2.6 μm，2.1 mm×150 mm）;柱溫40 ℃;進樣量1 μL;流動相A為含0.1%甲酸的水溶液，流動相B為甲醇，梯度洗脫條件見表1。

1.4.2 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜設(shè)置加熱電噴霧離子源溫度為550 ℃;毛細管電壓為5.5 kV;MRM掃描模式，正離子采集，其他質(zhì)譜參數(shù)如表2所示。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

QuEChERS法簡便快捷，價格低廉，適用面廣，其采用的凈化劑主要是PSA粉末、C粉末和石墨化碳黑粉末3種，可有效降低蜂蜜中各種復(fù)雜基質(zhì)的干擾。本試驗比較了3種提取鹽包和2種凈化劑包對蜂蜜樣品的影響。當(dāng)采用鹽包（4 g硫酸鎂、1 g乙酸鈉）、凈化劑（400 mg/mL硫酸鎂、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C）處理蜂蜜樣品時，10種農(nóng)藥都能達到相對較好的回收率。

2.2 色譜質(zhì)譜條件的選擇與優(yōu)化

本試驗采用C色譜柱進行分析，比較了常用的乙腈-水和甲醇-水體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在甲醇-水體系中具有更好的響應(yīng)，因此選用甲醇-水體系作為流動相。在流動相中加入0.1%甲酸溶液，有利于化合物的離子化，可以提高待測農(nóng)藥的響應(yīng)值。在優(yōu)化條件下測定的10種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖1所示。

2.3 線性范圍和定量限

配制10種農(nóng)藥的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以外標(biāo)法進行定量分析。結(jié)果表明，10種農(nóng)藥在一定的濃度范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.99。在空白樣品中添加低濃度的10種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按已建立的方法測定，以最接近3倍信噪比的加標(biāo)水平進行計算，3倍信噪比對應(yīng)的加標(biāo)水平為檢出限，10倍信噪比對應(yīng)的加標(biāo)水平為定量限，具體結(jié)果見表3。

2.4 準(zhǔn)確度和精密度

向空白蜂蜜樣品中添加農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)水平分別為2.5 μg/kg、5.0 μg/kg和10.0 μg/kg，每個濃度水平6份平行樣品，其回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表4。10種農(nóng)藥的平均加標(biāo)回收率在73.6%～110.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.1%～7.5%。結(jié)果表明本方法的精密度和準(zhǔn)確度良好。

2.5 實際樣品測定

對本市市售蜂蜜進行隨機采樣，采用本文建立的方法對15份蜂蜜樣品進行檢測，均未檢測到上述10種農(nóng)藥殘留。

3 結(jié)論

本研究采用QuEChERS法結(jié)合超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定蜂蜜樣品中10種農(nóng)藥殘留。該方法操作簡便、準(zhǔn)確度及精密度好，適用于蜂蜜中農(nóng)藥多殘留的快速定性篩查和定量檢測。

參考文獻

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基金項目：江蘇省市場監(jiān)督管理局科技計劃項目（KJ207545）。

作者簡介：王仁德（1990—），男，江蘇鹽城人，本科。研究方向：食品安全檢測。

通信作者：吳升德（1981—），男，廣西南寧人，博士，高級工程師。研究方向：產(chǎn)品質(zhì)量檢測。E-mail：shengdewu@163.com。