牛白血病的流行病學(xué)及常用診斷方法

劉偉彬/內(nèi)蒙古錫林郭勒盟阿巴嘎旗吉爾嘎郎圖蘇木綜合保障和技術(shù)推廣中心 011499

牛白血病病毒是牛地方流行性白血病（又稱牛白血?。┑牟≡?，是制約我國乃至全世界牛品種選育和牛養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)健康持續(xù)發(fā)展的重要影響病原體之一。牛白血病在世界大部分國家的牛群中均有存在，在我國北京、上海、新疆等省市也報(bào)道過牛白血病病例存在。牛白血病病毒感染可導(dǎo)致多種臨床結(jié)果，大多數(shù)牛白血病病毒感染的牛是病毒的無癥狀攜帶動物，既沒有任何臨床癥狀，也沒有任何血液淋巴細(xì)胞生化變化。大量研究報(bào)道表明牛白血病病毒感染但臨床上表現(xiàn)正常的?？赡鼙憩F(xiàn)出一定程度的免疫失調(diào)、牛奶產(chǎn)量減少、傳染病高發(fā)和生殖效率低下從而導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失。大約1/3 的受感染牛會出現(xiàn)未轉(zhuǎn)化B 淋巴細(xì)胞的良性非惡性增殖形式，稱為持續(xù)性淋巴細(xì)胞增多癥。不到5%的受感染牛在相對較長的潛伏期后發(fā)展為惡性 B 細(xì)胞淋巴瘤，這種惡性 B 細(xì)胞淋巴瘤主要在4～5歲以上的牛中檢測到，惡性腫瘤會導(dǎo)致脾臟破裂和淋巴結(jié)顯著增大，這些病變可在皮膚下見的。牛白血病的腫瘤細(xì)胞可以滲透到胃、心臟、腸和子宮等器官，從而導(dǎo)致牛白血病的臨床癥狀多種多樣，主要常見癥狀包括消化障礙、病牛體重減輕、產(chǎn)奶量減少等。

1 牛白血病的流行病學(xué)

牛白血病病毒可感染多種反芻動物，但主要的易感宿主和產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)損失的動物為牛，包括奶牛、肉牛和牦牛，但相對比，奶牛受牛白血病病毒的影響更大。牛白血病可在各日齡的牛中出現(xiàn)，但以低日齡牛的易感性和臨床癥狀程度更為嚴(yán)重。目前，無人感染牛白血病病毒發(fā)病的有力證據(jù)。牛白血病病毒可通過水平和垂直兩種傳播途徑在牛群中傳播，對于犢牛來說，兩種途徑均可感染，一方面犢?？赏ㄟ^帶毒牛垂直感染牛白血病病毒，另一方面，犢牛也可通過帶有牛白血病的牛乳、呼吸道吸入病毒或直接接觸帶毒牛水平感染。由于牛白血病病毒感染后可出現(xiàn)無癥狀攜帶者，該種帶毒牛對牛群的威脅更大。此外，輸液、疫苗接種等操作也可導(dǎo)致牛白血病的傳播，使用未消毒的輸液等相關(guān)醫(yī)療器械，導(dǎo)致易感染接觸帶毒牛的血液造成感染。此外，蚊、蠅等吸血性昆蟲在牛白血病的傳播過程中也具有重要作用。

2 牛白血病在中國的流行情況

牛白血病病毒已經(jīng)通過種畜貿(mào)易傳播到各大洲，并且在全世界的牛中很普遍。牛白血病病毒的感染水平在國家之間和國家內(nèi)部地區(qū)之間有所不同。牛白血病在中國奶牛場中的流行率較高，牛白血病病毒感染率最高可達(dá)49.1%，而肉牛場的牛白血病病毒陽性率甚至不到1.6%。此外，血清學(xué)檢測顯示，中國20.1%的牦牛為 BLV 陽性。

3 牛白血病的診斷

目前，已有多種牛白血病病毒的檢測方法可供選擇，這些方法可分為兩種，一種是基于牛白血病病毒特異性抗體的血清學(xué)檢測方法，另一種為基于病毒核酸的分子生物學(xué)檢測方法。

3.1 血清學(xué)檢測牛白血病病毒的血清學(xué)檢測方法是臨床上較為常見的檢測方法之一，這些檢測方法基于牛白血病病毒特異性抗體，牛白血病病毒p24衣殼蛋白和細(xì)胞外gp51 蛋白的抗體是血清學(xué)檢測的目標(biāo)。大多數(shù)血清學(xué)方法旨在檢測牛血清和牛奶中的抗體，以及牛白血病病毒感染細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)是一種相對于其他血清學(xué)檢測方法檢測成本更低，可用于同時(shí)篩查多個血清樣本的方法，但該檢測方法存在不夠靈敏并且不適合分析牛奶樣品的缺點(diǎn)。ELISA 是一種高度靈敏且易于實(shí)施的牛白血病病毒的血清學(xué)檢查方法，可用于分析血清和牛奶樣品，但是ELISA 需要許多對照，并且部分血清樣本中可能會產(chǎn)生假陰性結(jié)果?？偟膩碚f，這些基于抗體的血清學(xué)檢測方法不能用于檢測小于6個月大的小牛，因?yàn)樾∨悠分锌纱嬖谀阁w抗體，這可能會引發(fā)假陽性結(jié)果。

3.2 基于病毒基因組的分子生物學(xué)檢測方法牛白血病病毒可以整合到宿主基因組內(nèi)并可保留在宿主細(xì)胞基因組中，因此即使沒有檢測的牛白血病病毒抗體但仍可以檢測到病毒核酸。事實(shí)上，傳統(tǒng)檢測技術(shù)幾乎無法檢測到來自感染動物的新鮮腫瘤或外周血單核細(xì)胞樣本中牛白血病病毒基因組，但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得從上述樣品中檢測牛白血病病毒基因組成為可可能。因此，除了使用上述常規(guī)血清學(xué)檢測技術(shù)對牛白血病病毒感染進(jìn)行常規(guī)診斷外，基于核酸的 PCR 方法可以大大加速牛白血病流行的檢測進(jìn)程。包括標(biāo)準(zhǔn)的PCR，巢式PCR，實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）和基于血液的直接PCR在內(nèi)的多種PCR 檢測方法已在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用于牛白血病病毒檢測。然而，PCR 檢測方法需要昂貴PCR 儀器和試劑，并且樣品制作過程復(fù)雜且要求操作人員具有一定的科學(xué)背景和試驗(yàn)基礎(chǔ)。最近，研發(fā)了一種新的基于血液的 PCR 檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)無需 DNA分離和純化即可擴(kuò)增目標(biāo) DNA。該檢測方法可以以高特異性和低檢測牛白血病病毒的成本，有助于及時(shí)檢測出牛白血病病毒感染的牛。

如上所述，基于 PCR 的基因組篩選方法診斷牛白血病病毒對多種類型的樣品均可以進(jìn)行檢測，并提高了檢測的靈敏度、特異性和效率，耗時(shí)更少。PCR 還可檢測出抗體前幾周內(nèi)檢測易感牛的感染情況。然而，基于 PCR 的病毒篩查涉及復(fù)雜的樣品制備過程，可能會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。此外，基于 PCR的牛白血病病毒檢測方法需要特定的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施，包括 PCR 儀，并且還需要設(shè)計(jì)特定的引物和探針。

4 結(jié)語

目前，仍無市售商品化的牛白血病病毒疫苗和特效治療藥物，大部分牛場對牛白血病病毒控制主要通過檢測、淘汰等方法。在牛白血病病毒的防控工作中，牛白血病病毒的診斷是防控工作的基礎(chǔ)。由于大部分感染牛白血病病毒的牛不表現(xiàn)任何臨床癥狀，這對臨床診斷造成可嚴(yán)重的障礙，但高度特異和靈敏的實(shí)驗(yàn)室檢測方法可以解決該問題。由于對牛白血病病毒的知識上的欠缺，目前雖然已經(jīng)有多種可用于牛白血病病毒的檢測方法，但仍存在技術(shù)上的欠缺。因此，在未來的研究中，一方面要應(yīng)用現(xiàn)有的檢測技術(shù)了解牛群中牛白血病病毒的流行情況，定期監(jiān)測牛群的抗原或抗體水平，尤其是在奶牛場。另一方面，應(yīng)進(jìn)一步加快對牛白血病病毒的致病機(jī)理、傳播方式等方面的基礎(chǔ)研究，從而針對性的開發(fā)牛白血病病毒的診斷方法和特效疫苗藥物等，進(jìn)一步改進(jìn)牛白血病病毒的防控方法，提高防控效果。