微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展

天津市第三中心醫(yī)院分院（300250）李麗華 宋金娜 李丹丹

微生物感染性疾病是臨床比較多發(fā)的疾病之一，該病會(huì)對(duì)病人造成比較大的損傷，甚至?xí)?duì)病人的生命安全造成威脅。再加上部分病人長(zhǎng)期濫用抗生素類藥物，患病期間身體體質(zhì)比較差，很容易導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性提升，還會(huì)使病人出現(xiàn)其他并發(fā)癥，給臨床治療造成較大難度。此外，城市化不斷發(fā)展，人口流動(dòng)速度不斷增大，這也使傳染病呈現(xiàn)聚集性傳播高發(fā)特征，擴(kuò)大了傳染病的受感染人群。給傳染病防治帶來(lái)了新的困難。要想打破傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)的弊端，就需要探索出一套具有安全穩(wěn)定、快速精準(zhǔn)的檢驗(yàn)技術(shù)，以提升臨床診斷的可靠性和時(shí)效性，因此，這也成為相關(guān)領(lǐng)域人士的重要研究?jī)?nèi)容。

1 微生物自動(dòng)化鑒定技術(shù)

傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的臨床微生物檢測(cè)需要經(jīng)過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)才能獲得最終檢測(cè)結(jié)果，這種檢測(cè)方式耗時(shí)費(fèi)力、操作難度高，對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)能力要求較為嚴(yán)格，一旦在細(xì)菌培養(yǎng)中出現(xiàn)操作失誤，會(huì)直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，由于細(xì)菌培養(yǎng)和繁殖的時(shí)間比較長(zhǎng)，直接拉長(zhǎng)了整個(gè)檢測(cè)周期，無(wú)法滿足當(dāng)前臨床傳染性疾病的治療和防控工作要求。為了更好地應(yīng)對(duì)這一現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，逐漸將電子自動(dòng)化技術(shù)與微生物檢驗(yàn)技術(shù)相結(jié)合，探索出了具有自動(dòng)化特征的細(xì)菌培養(yǎng)鑒定技術(shù)[1]。

1.1 全自動(dòng)微生物鑒定專家系統(tǒng) 實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)化檢測(cè)，在保證檢測(cè)準(zhǔn)確性的前提下，提升了檢測(cè)速度，在幾小時(shí)內(nèi)就可以獲得細(xì)菌的藥敏測(cè)試等檢測(cè)結(jié)果。依托這一檢測(cè)技術(shù)，可以對(duì)細(xì)菌藥敏結(jié)果進(jìn)行全方位分析，保證細(xì)菌藥敏結(jié)果解釋的準(zhǔn)確性和合理性，從而為傳染性疾病的臨床治療與防控提供決策建議。

1.2 全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀 這一技術(shù)具有比較突出的臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，操作簡(jiǎn)單而且檢測(cè)人員工作量比較少，基本上實(shí)現(xiàn)了全過(guò)程自動(dòng)化檢測(cè)。在標(biāo)本收入培養(yǎng)瓶后只需要根據(jù)儀器提示將培養(yǎng)瓶放入到儀器中，配合熒光檢測(cè)器，培養(yǎng)儀就會(huì)自動(dòng)完成培養(yǎng)和動(dòng)態(tài)檢測(cè)，準(zhǔn)確找出陽(yáng)性瓶，極大提升了檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)效率[2]。

2 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

2.1 免疫酶技術(shù) 該技術(shù)目前已經(jīng)被應(yīng)用在微生物臨床檢測(cè)中，主要是通過(guò)酶的催化作用將物質(zhì)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，利用了抗原抗體反應(yīng)特異性原理。在實(shí)驗(yàn)中將酶定為標(biāo)記物，然后觀察酶催化底物時(shí)所發(fā)生的顏色反應(yīng)，從而得到抗原抗體反應(yīng)結(jié)論。這種技術(shù)可以應(yīng)對(duì)臨床多種傳染性疾病的治療需要，例如肺炎支原體傳染病治療、流感病毒治療等。目前在臨床檢驗(yàn)中，運(yùn)用最為廣泛的免疫酶技術(shù)是ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)），該技術(shù)具有比較高的靈敏度，能夠完成病毒抗原和抗體的檢測(cè)需要。

2.2 熒光免疫技術(shù) 該技術(shù)是利用免疫學(xué)技術(shù)與熒光標(biāo)記相結(jié)合而產(chǎn)生的。將熒光素視為標(biāo)記物，通過(guò)熒光顯微鏡對(duì)標(biāo)本進(jìn)行觀察，然后對(duì)抗原或者抗體的基本情況進(jìn)行確定。這種技術(shù)的主要應(yīng)用優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)效率高、靈敏度高等特征顯著[3]。

3 生物分子學(xué)技術(shù)

3.1 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR技術(shù)） 該技術(shù)主要是對(duì)DNA的復(fù)制進(jìn)行模擬，擴(kuò)大檢測(cè)目標(biāo)基因的整體數(shù)量，已經(jīng)廣泛應(yīng)用在消化性潰瘍、結(jié)腦（結(jié)核性腦膜炎）、腦膜炎球菌性腦膜炎和衣原體感染等疾病的臨床檢查中。能夠?qū)Υ龣z微生物進(jìn)行快速檢驗(yàn)，具有檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)速度快等臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，尤其適合一些突發(fā)公共衛(wèi)生事件的臨床微生物檢測(cè)需要，可以快速完成細(xì)菌的耐藥性檢測(cè)和流行病學(xué)檢測(cè)。3.2 分子雜交及其相關(guān)技術(shù) 在傳統(tǒng)意義上，該技術(shù)主要應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域，后經(jīng)不斷發(fā)展，在臨床微生物檢測(cè)中的應(yīng)用也逐漸增多。主要是將被檢測(cè)單鏈核酸分子通過(guò)DNA雜交，使其變成穩(wěn)定的雙鏈核酸分子。在分子雜交階段呈現(xiàn)高度特異性，該實(shí)際臨床微生物檢驗(yàn)過(guò)程中具有準(zhǔn)確度高，不受到細(xì)菌干擾，檢測(cè)簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快等應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，非常適合微生物快速檢驗(yàn)的臨床疾病治療和防控需要[4]。

4 分子生物傳感器

分子生物傳感器是微生物快速檢測(cè)領(lǐng)域中的一類新興技術(shù)，非常適合微生物傳染性疾病的臨床診斷與防治工作，具有檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、操作技術(shù)簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度比較快等臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，且應(yīng)用范圍和應(yīng)用效果正在逐漸提升。該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了化學(xué)、物理及生命科學(xué)等多個(gè)學(xué)科的技術(shù)綜合，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)待檢測(cè)細(xì)菌的快速分析。DNA生物傳感器是目前醫(yī)療領(lǐng)域臨床應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)，可以幫助醫(yī)生更詳細(xì)地了解疾病各個(gè)階段的發(fā)展情況，提升了診斷準(zhǔn)確度，也能幫助醫(yī)生制定出更為科學(xué)、詳細(xì)的治療方案，尤其在臨床癌癥治療領(lǐng)域具有比較突出的應(yīng)用效果[5]。

5 基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)是目前醫(yī)療臨床疾病診斷中比較先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)之一，靈敏度高、準(zhǔn)確度高、檢測(cè)速度快、可以實(shí)現(xiàn)多類型疾病的共同檢測(cè)。針對(duì)傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)技術(shù)耗時(shí)比較長(zhǎng)，檢測(cè)結(jié)果不全面等缺陷，醫(yī)生可以積極采用基因芯片技術(shù)，配合臨床治療經(jīng)驗(yàn)，提升了臨床診斷的可靠性和準(zhǔn)確性。通過(guò)基因芯片技術(shù)，醫(yī)生可以實(shí)現(xiàn)快速了解致病菌種類，從而制定科學(xué)的治療方案。而且，還能對(duì)病菌的耐藥性進(jìn)行檢驗(yàn)，這樣可以提高醫(yī)生在使用抗生素類藥物治療傳染性疾病時(shí)的有效性，避免由于病毒耐藥性而延誤治療時(shí)機(jī)。基因芯片需要做好以下幾個(gè)檢驗(yàn)準(zhǔn)備的操作技術(shù)環(huán)節(jié)：芯片的制備，需要讓DNA按順序排列在芯片上；樣品的制備，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行提取，如果標(biāo)本數(shù)量不足，還需要進(jìn)行繁殖擴(kuò)增處理[6]。

6 細(xì)菌毒素技術(shù)

細(xì)菌毒素主要包含菌體外毒素和菌體內(nèi)毒素兩種，因此，在微生物快速檢測(cè)過(guò)程中，主要從外毒素檢測(cè)和內(nèi)毒素檢測(cè)兩種方法入手。毒素毒力會(huì)直接影響到細(xì)菌的致病性能力[7]。在臨床微生物檢測(cè)中，采取細(xì)菌毒素技術(shù)能夠比較明顯地提高微生物檢測(cè)效率，通過(guò)在標(biāo)本內(nèi)提取毒素實(shí)現(xiàn)快速檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率更為理想。該技術(shù)可以幫助醫(yī)生對(duì)細(xì)菌在體內(nèi)的感染程度進(jìn)行全面了解，通過(guò)內(nèi)毒素和外毒素兩種檢測(cè)方式對(duì)細(xì)菌種類進(jìn)行鑒定（外毒素檢測(cè)主要應(yīng)用于白喉毒素和肉毒毒素等方面檢測(cè)，內(nèi)毒素檢測(cè)主要檢測(cè)病人是否存在革蘭氏陰性菌、內(nèi)毒素血癥等致病菌），從而實(shí)現(xiàn)臨床治療和防控的目的[8]。

7 討論

當(dāng)前，傳染性疾病呈快速發(fā)展、快速傳播的態(tài)勢(shì)，無(wú)論是在身體層面還是心理層面，都對(duì)人們?cè)斐闪吮容^大的影響。傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)已經(jīng)無(wú)法滿足新時(shí)期的臨床傳染性疾病診斷、預(yù)防和治療需要，必須要借助快速發(fā)展的科學(xué)技術(shù)，完善微生物檢驗(yàn)技術(shù)，全面提升我國(guó)醫(yī)療臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)的靈敏度和效率，使微生物檢驗(yàn)技術(shù)可以走向自動(dòng)化、數(shù)字化的發(fā)展道路。臨床微生物檢驗(yàn)人員要充分利用微生物自動(dòng)化鑒定技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生物分子學(xué)技術(shù)、分子生物傳感器、基因芯片技術(shù)、細(xì)菌毒素技術(shù)等現(xiàn)有快速檢驗(yàn)技術(shù)，并做好新技術(shù)的研究與探索，不斷創(chuàng)新出新的微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，從而提升臨床微生物檢驗(yàn)速度、質(zhì)量、準(zhǔn)確性，為人們提供更優(yōu)質(zhì)的醫(yī)療服務(wù)，提高傳染性疾病的防控能力，保障人們的身體健康及生活安全。