抗磷脂抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀

丁亞輝，王文強(qiáng)，李忠信

（鄭州安圖生物工程股份有限公司，河南 鄭州 450016）

1 抗磷脂綜合征

抗磷脂綜合征（antiphospholipid syndrome，APS）是一種非器官特異的自身免疫性疾病，臨床上主要以反復(fù)的動(dòng)靜脈血栓形成，習(xí)慣性流產(chǎn)、血小板減少等為主要表現(xiàn)，并伴隨抗磷脂抗體（antiphospholipidantibody，aPL）持續(xù)陽(yáng)性[1-2]。

2 抗磷脂抗體

抗磷脂抗體（antiphospholipid-antibody，aPL）是一組以磷脂或磷脂結(jié)合蛋白為靶抗原的自身抗體總稱。aPL通過(guò)識(shí)別并結(jié)合相關(guān)磷脂或磷脂結(jié)合蛋白來(lái)干擾各種依賴磷脂的凝血過(guò)程[3-4]。

1906年Wasserman將患有先天性梅毒胎兒的肝臟提取物作為抗原檢測(cè)梅毒患者血清中的抗體[5]。相關(guān)抗原在1941年被Pangborn從牛肉心臟中提取，并被鑒定為是一種線粒體磷脂，隨后將其命名為心磷脂[6]。Moore等人發(fā)現(xiàn)在沒(méi)有梅毒相關(guān)的任何其他臨床或血清學(xué)證據(jù)下，只對(duì)這種疾病的血液進(jìn)行篩查，許多SLE患者的VDRL實(shí)驗(yàn)呈現(xiàn)陽(yáng)性，陽(yáng)性率高達(dá)33%～44%[7]。Conley在1957年描述了2例SLE患者檢測(cè)到BFP-STS陽(yáng)性，其血漿中含有一種獨(dú)特的凝血抑制劑，該抑制劑可延長(zhǎng)全血滴注時(shí)間和凝血酶原時(shí)間[8]。由于這種抑制劑主要見于SLE患者，F(xiàn)eistein將次抗凝物質(zhì)命名為狼瘡抗凝物。1983年，Harris 博士等人開發(fā)了用于aCL的放射免疫測(cè)定法[9]。1986年，Loizou等將aCL的放射免疫測(cè)定法方法進(jìn)行了改良，建立了酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）[10]。

1990年GalliM等人認(rèn)為人/牛的血清/血漿中存在一種可以促進(jìn)aCL與心磷脂結(jié)合的輔助因子。并通過(guò)分離提純出50-70KD左右的蛋白，通過(guò)分析，其性質(zhì)與β2糖蛋白1（β2-GP1）非常相似[11]。同時(shí)，Matsuura等人發(fā)現(xiàn)β2-GP1可以增加aCL與心磷脂的親和力，這種aCL被稱為β2-GP1依賴型aCL，而梅毒患者血清中的aCL與心磷脂的結(jié)合卻被β2GP1抑制，因此又將這些aCL稱為非β2-GP依賴型aCL[12]。β2-GP1不僅是一種輔助因子，自身也是APS的一種靶抗原[13]。

3 國(guó)際共識(shí)以及標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀

抗磷脂綜合征（APS）的初步分類標(biāo)準(zhǔn)是在日本札幌舉行的一次會(huì)議后的研討會(huì)上制定的。初步分類標(biāo)準(zhǔn)確定了APS的基本特征，以便于病因和治療方式的研究。在第十一屆抗磷脂抗體國(guó)際大會(huì)上，將APS初步分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂并延用至今[14-15]。

由于APS臨床上缺乏特異性的表征，APS的臨床診斷大多需要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。因此，抗磷脂抗體的檢測(cè)就顯得尤為重要。在2006年APS札幌標(biāo)準(zhǔn)悉尼修訂版的分類標(biāo)準(zhǔn)中只將狼瘡抗凝物、IgG和IgM型aCL及抗β2-GP1-IgG抗體囊括到實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)中。然而，在臨床診斷中，上述5個(gè)指標(biāo)的陽(yáng)性率從30%～90%不等[16-19]。隨著對(duì)APS的研究的深入，除了分類標(biāo)準(zhǔn)中提到的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)外，更多抗磷脂抗體逐步被發(fā)現(xiàn)并得到認(rèn)可[16-17]。

aPL最早的標(biāo)準(zhǔn)化研究工作始于1996年，E.N. Harris博士等人對(duì)來(lái)自各地的30個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了一次aCL測(cè)試的評(píng)估，采用反射免疫法和ELISA法，最終建立了Harris標(biāo)準(zhǔn)血清[20]。截止目前，各商品化aCL試劑盒均溯源到Harris標(biāo)準(zhǔn)血清。然而，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間的檢測(cè)結(jié)果仍舊存在差異。1995年，一個(gè)法國(guó)研究小組對(duì)9種抗心磷脂抗體試劑盒進(jìn)行了評(píng)估，均采用ELISA法并使用Harris標(biāo)準(zhǔn)血清和試劑盒配套質(zhì)控進(jìn)行對(duì)照和校準(zhǔn)，結(jié)果顯示IgG型和IgM型aCL陽(yáng)性樣本的一致性分別為59%和51%[21]。到2000年，一個(gè)歐洲研究小組進(jìn)行了一次aCL標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目，對(duì)歐洲使用Harris標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行校準(zhǔn)的24家實(shí)驗(yàn)室發(fā)放10份樣品，其中只有6家對(duì)IgG型aCL的檢測(cè)結(jié)果一致，但是IgM型aCL的檢測(cè)結(jié)果均不一致[22]。2013年，北京協(xié)和醫(yī)院對(duì)全國(guó)116家實(shí)驗(yàn)室抗磷脂抗體檢測(cè)進(jìn)行了比對(duì)分析，結(jié)果顯示：從定性分析來(lái)看，aCL檢測(cè)的陽(yáng)性符合率可到達(dá)96.6%，陰性符合率可達(dá)到99.5%，但從定量分析來(lái)看，同一廠家的試劑盒在不同實(shí)驗(yàn)室間的變異系數(shù)高達(dá)31%-90%，不同廠家的檢測(cè)結(jié)果差異更為明顯[14]。

（1）質(zhì)控品或者參考品。Harris標(biāo)準(zhǔn)血清是將高滴度的APS患者的血清進(jìn)行混合后制備的。然而，該血清不可再生，消耗完之后需要重新進(jìn)行混合制備以及校準(zhǔn)，但不同患者的血清中aCL活性有一定的差異性，質(zhì)量控制難度較大，因此需要建立更為穩(wěn)定的溯源標(biāo)準(zhǔn)。Ichikawa K等人將鼠單克隆抗體的可變區(qū)和人源抗體的恒定區(qū)嵌合研制出相應(yīng)參考品的IgG型aCL（HACL）和IgM型aCL（EY2C9）[23-24]。這種使用基因工程制備的嵌合型抗體更有利于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量控制，但其他類型的aPL還缺少相應(yīng)的質(zhì)控品或者參考品。

（2）檢測(cè)方法。經(jīng)典的ELISA法在很長(zhǎng)一段時(shí)間中作為aCL檢測(cè)的主流方法。近些年出現(xiàn)的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光法從精密性、準(zhǔn)確性、特異性等方面均優(yōu)于ELISA、可降低實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果差異，更好的服務(wù)于臨床。Moerloose等人使用3種化學(xué)發(fā)光法的商品試劑盒對(duì)321個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其結(jié)果天間變異只有4.3%-11.2%，而ELISA的天間變異可能使樣本的陰陽(yáng)性產(chǎn)生變化，此外化學(xué)發(fā)光法具有更寬的檢測(cè)范圍[25]。

2019年最新發(fā)布的抗磷脂抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用專家共識(shí)，肯定了一些新技術(shù)和非傳統(tǒng)的aPL抗體的檢測(cè)價(jià)值[26]。但對(duì)于aPL標(biāo)準(zhǔn)化的建立似乎未有太多的進(jìn)展，更多標(biāo)志物的出現(xiàn)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化的建立帶來(lái)了更多的挑戰(zhàn)。

4 討論

近些年人們對(duì)aPL的認(rèn)識(shí)和研究越來(lái)越深入，非傳統(tǒng)aPL抗體的價(jià)值得到了肯定，能夠更好的服務(wù)于臨床。此外，隨著檢測(cè)技術(shù)的更迭，化學(xué)發(fā)光等方法提高了aPL檢測(cè)的精密性和可重復(fù)性。但是由于缺乏國(guó)際權(quán)威組織發(fā)布的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，除aCL-IgG和aCLIgM外其他aPL也無(wú)國(guó)際統(tǒng)一單位，導(dǎo)致各廠家定量產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果差異較大，一定程度上限制了aPL尤其是非傳統(tǒng)aPL的臨床應(yīng)用。值得期望的是，目前國(guó)內(nèi)相關(guān)組織和機(jī)構(gòu)已經(jīng)開始開展磷脂項(xiàng)目的室間質(zhì)評(píng)工作，國(guó)內(nèi)的試劑生產(chǎn)廠家也已經(jīng)推出了基于磁微?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)的自動(dòng)化、定量抗磷脂抗體檢測(cè)試劑，在一定程度上為國(guó)內(nèi)抗磷脂抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化提供了助力。