新型冠狀病毒核酸檢測假陽性結(jié)果原因分析及對策

戰(zhàn)乃娟

（長春市第二醫(yī)院，吉林 長春 130062）

0 引言

新型冠狀病毒肺炎傳染性極強(qiáng)，主要是以呼吸道飛沫、接觸的途徑來傳播，人群有普遍易感性。感染者或有發(fā)熱、干咳、胸悶等癥狀表現(xiàn)，或并無特殊癥狀。大部分患者預(yù)后較佳，但嚴(yán)重者會(huì)繼發(fā)呼吸窘迫綜合征、膿毒血癥等，因此致死。隨著我國對新型冠狀病毒肺炎疫情的有效防控，治愈例數(shù)不斷增多，及早準(zhǔn)確的診斷對控制疫情復(fù)燃有重要意義。咽拭子核酸檢測是目前普遍使用的病毒檢測手段，但卻有一定的假陽性結(jié)果占比，對正確篩選新型冠狀病毒肺炎患者造成影響[1]。本文便通過調(diào)查分析1526 份咽拭子核酸檢測報(bào)告結(jié)果，統(tǒng)計(jì)咽拭子核酸檢測的假陽性概率，并分析原因，提出幾點(diǎn)對策。

1 資料來源和方法

1.1 研究資料

1526 份咽拭子核酸檢測結(jié)果報(bào)告，均為應(yīng)檢盡檢、愿檢盡檢、住院患者及陪護(hù)和發(fā)熱、干咳、呼吸困難疑似新冠病毒肺炎的標(biāo)本。

1.2 方法

采樣之前，指導(dǎo)患者用清水漱口，之后張口發(fā)“啊”音，視情況判斷是否選用壓舌板。需經(jīng)培訓(xùn)合格后的專業(yè)醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行采集工作，采集前必須做好一人已消毒與手衛(wèi)生工作，取無菌棉拭子輕柔且快速的擦拭受檢者咽側(cè)壁和咽喉壁數(shù)次。取樣后將拭子放入核算檢測專用病毒滅活采樣管中，折斷拭子桿使其全拭子頭部完全部置于管中。旋緊管蓋、做好標(biāo)記，放入塑料袋密封好，送至檢驗(yàn)科進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

將數(shù)據(jù)錄入Excel2016 軟件，統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 研究資料一般情況

1526 份檢測報(bào)告中，男611 例、占40.04%，女915 例、59.96%；年齡分布：低于20 歲的患者有8 例、占0.52%，21～30歲的患者有47 例、占3.08%，31～40 歲的患者有131 例、占8.58%，41～50 歲的患者有227 例、占14.86%，51～60 歲的患者有377 例、占24.71%，61～70 歲的患者有430 例、占28.18%，71～80 歲的患者有182 例、占11.93%，高于80 歲的患者有124 例、占8.13%。其中年齡超過51 歲的患者共計(jì)1113 例、占72.94%。應(yīng)檢盡檢和愿檢盡檢患者1252 例，主要表現(xiàn)為發(fā)熱患者32 例，主要為干咳表現(xiàn)患者204 例，主要為呼吸困難癥狀表現(xiàn)患者16 例，其他癥狀患者38 例。

2.2 統(tǒng)計(jì)咽拭子核酸檢測假陽性結(jié)果

1526 例咽拭子核酸檢測報(bào)告中，有9 例（0.59%）咽拭子核酸檢測結(jié)果為假陽性。提示單次咽拭子核酸檢測結(jié)果假陽性占0.59%。

3 討論

目前，用以臨床檢測新型冠狀病毒的方法主要有核酸檢測法和免疫學(xué)檢測法，核酸檢測法指的是檢測病毒RNA，包括基因測序、芯片檢測、熒光定量PCR 等，其中熒光定量PCR的應(yīng)用最為常見。核酸檢測標(biāo)本包括痰液、咽拭子、血液和肺泡灌洗液等，其中咽拭子核酸檢測方法的應(yīng)用最廣泛。但，不規(guī)范取樣、試劑盒不標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)人員儀器問題或人工操作過程中污染等因素都有可能會(huì)導(dǎo)致咽拭子核酸檢測結(jié)果的假陽性[2]，不僅會(huì)造成未患病者本人的惶恐，也不利于正確篩選新型冠狀病毒肺炎患病者。由于核酸檢測質(zhì)量直接關(guān)系著被檢測的及早、正確診斷，因此，探討降低核酸檢測假陽性結(jié)果非常有必要。下面就結(jié)合核酸檢測假陽性結(jié)果發(fā)生的原因，提出控制對策：

3.1 核酸檢測前的質(zhì)量控制

3.1.1 標(biāo)本采集前的健康宣教

進(jìn)行咽拭子標(biāo)本采集之前，由護(hù)士對患者進(jìn)行健康宣教，包括：采集的目的、意義、采集過程中可能會(huì)發(fā)生的不良反應(yīng)和注意事項(xiàng)，待患者做好準(zhǔn)備方可進(jìn)行采集操作。采集前2h避免有進(jìn)食、進(jìn)水的行為，同時(shí)也需要避免有霧化、抗炎治療行為，以免造成檢測假陽性的結(jié)果。

3.1.2 采樣前的用物準(zhǔn)備

速干手消毒劑、酒精噴壺、病毒保存液、生理鹽水、壓舌板、拭子桿、消毒濕巾、密封袋、手電筒、試管架、醫(yī)療垃圾桶等。如需轉(zhuǎn)運(yùn)，準(zhǔn)備好生物安全標(biāo)本運(yùn)輸箱。

3.1.3 樣本采集

實(shí)施要點(diǎn)：檢查患者咽喉部位是否存在腫脹和黏膜破損的問題，使用生理鹽水漱口；把拭子放到無菌生理鹽水中浸潤濕（切忌將拭子放到病毒保存液里，以防抗生素引起過敏），采集者左右使用壓舌板將患者舌頭壓住，右手拿聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子稍微用力來回擦拭其兩側(cè)咽扁桃體和咽喉壁至少3 次，放入與取出時(shí)均注意不要碰到患者唇部、舌部、牙齒與口腔黏膜等處；拭子頭端浸入到含有3mL 的病毒保存液、等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或者是磷酸鹽緩沖液試管中，尾部折斷，旋緊管蓋。對于不能良好配合的兒童進(jìn)行采集時(shí)，指導(dǎo)兒童采取仰臥位，由家屬托住兒童下頜，采集者左手輕輕按壓住兒童的額頭，右手執(zhí)無菌拭子進(jìn)行標(biāo)本采集。

3.1.4 樣本管理

采集咽拭子標(biāo)本之后及時(shí)送檢，進(jìn)行病毒的成功分離。對采集的咽拭子標(biāo)本，處理、保存均應(yīng)遵循著“早期采樣、無菌操作、低溫保存”的基本原則，將采集完成的標(biāo)本及時(shí)放到帶有生物安全標(biāo)識的雙層標(biāo)本袋中，明確有清晰標(biāo)識，存放于4℃條件下，并于2h 內(nèi)送到檢驗(yàn)科[4]。

3.2 核酸檢測中的質(zhì)量控制

3.2.1 核酸檢測試劑配制因素

配制一份合格的反應(yīng)體系，是檢測核酸病毒的一項(xiàng)重要環(huán)節(jié)，因此要求檢測人員嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行配制，并且配制過程中全程要在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作，不得離開試劑準(zhǔn)備區(qū)到其他區(qū)域進(jìn)行配制試劑。配制過程中取試劑所用耗材時(shí)必須用無菌鑷子進(jìn)

行拿取，嚴(yán)禁用手直接拿取耗材，以免手上沾有熒光反應(yīng)物污染耗材，影響結(jié)果。在配制完試劑后及時(shí)消毒和清理安全柜和操作臺。

3.2.2 核酸提取因素

核酸提取質(zhì)量對最終的檢測結(jié)果有很大影響，所以選擇適宜的核酸提取方法，是保證核酸檢測質(zhì)量的必要前提。目前常用的有煮沸裂解法、磁珠法等，相較而言磁珠法是一種全自動(dòng)核酸提取操作流程，更具標(biāo)準(zhǔn)化，因此在嚴(yán)峻形勢下，應(yīng)采用全自動(dòng)核酸檢測方法，保證核酸提取質(zhì)量。并且最好提取儀器和提取試劑是同一廠家配套使用，如提取試劑和廠家不同可以做驗(yàn)證試驗(yàn)來決定是否相互之間可以使用。如常用的磁珠法，我們一般都用的是全自動(dòng)的核酸提取儀，配套的耗材有磁鋼套，如果磁鋼套脫落或在儀器在自動(dòng)攪拌過程中破裂、出現(xiàn)劣質(zhì)的情況，就極易可能造成污染。如果我們的提取過程中要求陽性對照參與核酸提取的過程，那么在幾次儀器自動(dòng)攪拌混勻的過程中也有可能造成氣溶膠污染周圍的孔板，最后影響核酸提取質(zhì)量。因此我們不管在加樣過程中或提取過程中都要都要時(shí)刻觀察儀器提取過程中的問題。

3.2.3 檢驗(yàn)員因素

核酸檢測人員需要專業(yè)的技能培訓(xùn)和考核合格后方可進(jìn)行該檢測工作，并需要有專業(yè)的分子生物學(xué)知識和技能。在核酸檢測過程中需要相當(dāng)多的繁雜的程序和了解操作過程中的一些注意事項(xiàng)，并能避免操作失誤等方可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。在提取核酸前的應(yīng)注意以下事項(xiàng)：（1）加樣前應(yīng)充分混勻標(biāo)本，并動(dòng)作輕柔，不能用力過大，以免造成液體濺出污染；（2）操作一個(gè)步驟需進(jìn)行一次消毒換手套，此過程中避免酒精噴灑到磁珠板中或擴(kuò)增試劑中，否則影響陽性的核酸提取；（3）加陽性對照或陽性質(zhì)控品時(shí)一定要輕不要加錯(cuò)或噴濺到其他孔板中，以免造成污染；（4）每次操作完后都要進(jìn)行消毒和紫外處理，保證環(huán)境衛(wèi)生。

3.2.4 核酸擴(kuò)增

PCR 法是目前普遍使用的檢測方法，該方法特異性好、靈敏度高、檢測穩(wěn)定性強(qiáng)，但由于疫情發(fā)生突然、發(fā)展迅速，很多檢測產(chǎn)品未能經(jīng)過嚴(yán)格的臨床驗(yàn)證，貿(mào)然使用，會(huì)由于其檢測性能、質(zhì)量穩(wěn)定性等問題而導(dǎo)致核酸檢測質(zhì)量水平低、出現(xiàn)假陽性結(jié)果。因此，選擇特異性好、靈敏度高、可重復(fù)性好的核算擴(kuò)增試劑是減少假陽性結(jié)果的基礎(chǔ)保障[5]。那么往往核酸檢測假陽性基本都是污染造成的，因此結(jié)果的判讀一般都根據(jù)試劑的說明書指導(dǎo)進(jìn)行正確的判讀，如果實(shí)驗(yàn)室只有單靶標(biāo)陽性，需要進(jìn)行復(fù)查，如復(fù)查結(jié)果為陰性大概有幾種可能的存在：（1）八連排蓋子沒蓋緊，導(dǎo)致的氣溶膠污染。（2）熒光染料污染，沒有扣除熒光背景信號導(dǎo)致儀器誤讀。（3）基線沒有設(shè)置好導(dǎo)致的曲線異常。（4）加樣標(biāo)本錯(cuò)誤或擴(kuò)增試劑的不一致導(dǎo)致的假陽性等。

3.3 核酸檢測后的質(zhì)量控制

首先，判定該批次核酸檢測結(jié)果的可信性與否，如發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中存在陽性質(zhì)量控制或陰性質(zhì)量控制異常的問題，則應(yīng)排除本次檢測結(jié)果的可信性，重新做核酸的提取與檢測。

其次，嚴(yán)格按照所使用的核酸檢測試劑說明書判斷各個(gè)樣本檢測結(jié)果的有效性與否，尤其是要注意：某樣本靶標(biāo)檢測與內(nèi)標(biāo)質(zhì)量控制檢測結(jié)果皆是陽性，表明該樣本可能是由于未提取到有效核酸標(biāo)本、或是提取物中存在抑制成分殘留而造成假陽性結(jié)果，應(yīng)判定結(jié)果無效。

最后，如各靶標(biāo)檢測結(jié)果皆為陽性，則判定檢測結(jié)果為陰性；若為一陰一陽，則判定結(jié)果為可疑，需對該標(biāo)本再次進(jìn)行核酸提取、擴(kuò)增檢測，復(fù)核結(jié)果；若皆為陽性，則判定該檢測結(jié)果為陽性。

結(jié)合以上分析，新型冠狀病毒核酸檢測中針對存在的假陽性結(jié)果問題，應(yīng)通過規(guī)范核酸檢測全流程來提高檢測質(zhì)量，防止假陽性錯(cuò)誤報(bào)告的產(chǎn)生。