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    間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體在骨性關(guān)節(jié)炎治療中的研究進(jìn)展

    2021-01-06 02:12:03孟竹張君濤
    關(guān)鍵詞:外泌體充質(zhì)滑膜

    孟竹,張君濤

    (1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院、國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心,天津 300193;2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨傷科,天津 300193)

    0 引言

    骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是全世界成年人中最常見的退行性關(guān)節(jié)疾病,其特點(diǎn)是關(guān)節(jié)軟骨的慢性進(jìn)行性破壞,嚴(yán)重影響軟骨及周圍組織的退行性關(guān)節(jié)疾病[1],其發(fā)病基礎(chǔ)是關(guān)節(jié)軟骨退化損傷、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生。OA的發(fā)生發(fā)展就是軟骨單位(由關(guān)節(jié)軟骨、鈣化軟骨、軟骨下皮質(zhì)骨和骨小梁形成一生物復(fù)合物)的組成、功能特性以及結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化[2]。隨著人口老齡化加劇及肥胖人群逐漸增多,OA的發(fā)病率呈逐年升高趨勢[3],同時(shí)也受生活環(huán)境、遺傳及職業(yè)等其他因素影響,OA有望成為第四大致殘?jiān)騕4]。然而,目前OA的臨床治療手段主要包括抗炎鎮(zhèn)痛藥物、軟骨保護(hù)劑、關(guān)節(jié)鏡手術(shù)、關(guān)節(jié)置換和中醫(yī)理療等,目的都在于減輕疼痛,保存軟骨功能,延緩關(guān)節(jié)退變,改善畸形,維持關(guān)節(jié)的正?;顒?dòng),不能從根本上解決問題,無法阻止疾病的發(fā)生發(fā)展。因此,尋找OA新的治療策略一直是骨科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

    隨著科技發(fā)展,以干細(xì)胞為主的再生醫(yī)學(xué)以及生物治療是近些年來的研究熱點(diǎn)之一。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一類具有自我更新能力的多潛能祖細(xì)胞,具有來源廣、分化能力強(qiáng)[5]等特點(diǎn)。相較于其他干細(xì)胞,MSC獲取及儲(chǔ)存相對(duì)容易,在具有強(qiáng)大分化能力的基礎(chǔ)上,免疫排斥更小,經(jīng)過不斷實(shí)驗(yàn),MSC已經(jīng)成為再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最廣泛的干細(xì)胞[6]。同時(shí)大量證據(jù)表明MSC治療OA可獲得較好的療效[7-9]。但由于MSC受供體影響大量獲取困難、存活率有限以及對(duì)微環(huán)境敏感等諸多原因[10-12],使得在臨床應(yīng)用還存在一些挑戰(zhàn)。隨著深入研究,發(fā)現(xiàn)MSC不僅通過自身增殖分化修復(fù)受損組織,還能通過分泌——外泌體(exosome,Exo)來改變微環(huán)境,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)功能,間接實(shí)現(xiàn)修復(fù)治療作用。這為MSC直接應(yīng)用于臨床提供了另一思路,同時(shí)也為OA的治療提供了新的治療策略。本文就不同間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體在骨性關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)和作用機(jī)制進(jìn)行綜述。

    1 外泌體

    外泌體是一種由細(xì)胞分泌的直徑為40-150 nm、密度范圍為1.09-1.18 g/mL的具有雙層磷脂膜結(jié)構(gòu)的囊泡樣物質(zhì),其內(nèi)容物包括多種蛋白標(biāo)志物、DNA 片段及RNA。其功能往往表現(xiàn)為細(xì)胞間通訊介質(zhì),可遠(yuǎn)距離膜性轉(zhuǎn)運(yùn)供體細(xì)胞內(nèi)的生物小分子至受體細(xì)胞發(fā)揮其調(diào)控作用[13]。1983年,Johnstone首次在綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)外泌體并命名為“exosome”。當(dāng)時(shí)被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物,在之后的十多年中并未受到重視,直至1996年G Raposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體,所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗腫瘤反應(yīng)。2007年H Valadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA進(jìn)行遺傳物質(zhì)交換。從此外泌體逐漸引起了研究者們的重視。

    外泌體由于其獨(dú)特的生物學(xué)特征,在多種疾病的診斷及治療中都有著諸多應(yīng)用,其作用機(jī)制也被不斷明確,如腫瘤可通過外泌體傳輸特異性miRNA、LncRNA來調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境以及促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移侵襲等多個(gè)生物學(xué)過程[14]。2010年,間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體被首次報(bào)道,實(shí)驗(yàn)證明其可明顯減輕小鼠心肌缺血再灌注損[15]。

    2 間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體

    間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體(MSC-Exosomes,MSC-Exo)定義了50-200納米的小泡,這些小泡在間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)的多泡體與質(zhì)膜融合時(shí)分泌到細(xì)胞外空間[16]。相較于MSC,MSC-Exo具有與之相似的生物學(xué)功能,在此基礎(chǔ)上還具有體積小、免疫原性低,并且不會(huì)永久作為移植物而存在,并且更易于優(yōu)化體外擴(kuò)增[17]等優(yōu)勢??傊?,MSC-Exo具有更高的安全性、有效性及經(jīng)濟(jì)性,臨床應(yīng)用前景更為廣闊。

    MSC-Exo不僅表達(dá)Exo特異性表面標(biāo)志物CD9和CD81,還表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表型CD29、CD44、CD73和CD90[18]等。此外除了攜帶多種蛋白質(zhì),還能轉(zhuǎn)運(yùn)mRNA、miRNA和siRNA等多種RNA[19],參與到蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)或靶基因調(diào)節(jié),以此來實(shí)現(xiàn)再生修復(fù)作用。這也就導(dǎo)致了不同組織來源的MSCs雖然相似相似,但卻具有不完全相同的功能和潛力[20],使得不同來源的MSC-Exo也不完全相同。

    2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體

    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-BMSC)于1976年,F(xiàn)reidenstein首次發(fā)現(xiàn),是人類最早發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞。具有強(qiáng)大的增殖能力和多向分化潛能,來源方便,易于分離培養(yǎng),不存在免疫排斥等特性,因此成為組織工程最常用的種子細(xì)胞。

    Gasado等[21]的研究中發(fā)現(xiàn),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌 體 (Bone marrow mesenchymal stem cells-derived Exosomes,BM-BMSC-Exo)可以抑制滑膜淋巴細(xì)胞增殖,降低腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平,減輕滑膜炎的炎癥,由此看來BM-BMSC-Exo亦可作為OA“抗炎藥物”。但BM-BMSC-Exo不僅僅具有減輕炎癥反應(yīng)的作用。Cosenza等[22]發(fā)現(xiàn)BM-BMSC-Exo主要是通過抑制軟骨細(xì)胞中金屬基質(zhì)蛋白酶13(matrix metalloprotein 13,MMP13)、聚蛋白多糖酶 5(a disintegrin and metalloproteinase withthrombospondin motifs 5,ADAMTS5)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的產(chǎn)生,誘導(dǎo)Ⅱ型膠原蛋白(collagen Ⅱ,Col Ⅱ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan-1,Agc1)的表達(dá),同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡和巨噬細(xì)胞活化。并且在膠原酶誘導(dǎo)的小鼠骨關(guān)節(jié)炎模型上證實(shí)BM-BMSC-Exo可促進(jìn)軟骨修復(fù)、降低炎癥水平,延緩OA進(jìn)程。與上述實(shí)驗(yàn)相比,Liu等[23]通過實(shí)驗(yàn)不僅發(fā)現(xiàn)BM-MSC-Exo可以增加Col Ⅱ和Agc1,減少M(fèi)MP13和Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2),還發(fā)現(xiàn)BM-MSC-Exo可以通過lncRNAKLF3-AS1/miR-206/GIT1軸參與間充質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞增殖以及抑制軟骨細(xì)胞凋亡。Qi等[24]發(fā)現(xiàn)BM-BMSC-Exo可以抑制p38和ERK的磷酸化并促進(jìn)AKT的磷酸化,通過調(diào)控這幾個(gè)通路來抑制由IL-1β起的線粒體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮治療OA的作用。

    2.2 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

    脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADSC)最早是由Zuk等[25]人從抽脂術(shù)中脂肪組織懸液中分離培養(yǎng)出來的,是源于脂肪組織的成體干細(xì)胞,相較于其他MCS,ADSC可通過皮下抽吸等方法獲得,同時(shí)使用ADSC的倫理爭議也較少[26]。由于其極強(qiáng)的遷移能力和腫瘤趨向性,目前被廣泛應(yīng)用于腫瘤領(lǐng)域的研究31。但由于其能耐受缺血、缺氧的軟骨微環(huán)境引起的細(xì)胞凋亡,在OA治療方面也能表現(xiàn)出較好的效果[27]。但也有研究表明ADSC可以產(chǎn)生抑制軟骨細(xì)胞增殖和刺激軟骨細(xì)胞凋亡的因子[28]。

    Tofi?o-Vian等[29]研究發(fā)現(xiàn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體(ADSC-Exo)通過抑制炎癥和氧化應(yīng)激來介導(dǎo)OA成骨細(xì)胞的抗衰老作用。在體外IL-1β處理的炎癥模型中,ADSC-Exo通過抑制β-半乳糖苷酶活性,減少炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子 -α(TNF-α)、白細(xì)胞介素 6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)和NO的產(chǎn)生,同時(shí)能顯著下調(diào)IL-1β誘導(dǎo)的線粒體膜電位變化和氧化應(yīng)激,是細(xì)胞抗衰老機(jī)制的可能性之一。Ragni等[30]研究發(fā)現(xiàn)ADSC-Exo可抑制OA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)。

    2.3 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞

    2001年De Bari首次從膝關(guān)節(jié)附近滑膜中分離出滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 (synovium-derived mesenchymal stem cell,SMSC),相較于其他MSC,SMSC具有更強(qiáng)體外增殖能力[31],并且不受疾病、年齡等因素影響[32],通常取自自體并且極易誘導(dǎo)分化,較少會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)使其在臨床研究中的地位逐日劇增,可作為軟骨損傷、骨損傷及韌帶損傷等組織工程中的種子細(xì)胞。

    Zhu等[33]研究發(fā)現(xiàn)在膠原誘導(dǎo)的(collagenase-induced,CI)小鼠OA模型中,滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體(SMSC-Exo)可以增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的增殖和遷移,延緩OA進(jìn)展,但不能使損傷軟骨恢復(fù)正常形態(tài)結(jié)構(gòu)。Tao等[34]經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明SMSC-Exo攜帶的Wnt5a和Wnt5b通過Wnt信號(hào)通路激活YAP,增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的增殖和遷移,但同時(shí)會(huì)顯著減少細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)分泌。在此基礎(chǔ)上繼續(xù)實(shí)驗(yàn),利用轉(zhuǎn)染得到過表達(dá)miR-140-5p的SMSC-Exo可以彌補(bǔ)這一缺陷,其機(jī)制主要是通過RALA信號(hào)通路激活SRY-Box轉(zhuǎn)錄因子9(SRY-box transcription factor 9,SOX9),避免抑制ECM的合成。過表達(dá)miR-140-5p的SMSC-Exo可以在不破壞細(xì)胞外基質(zhì)分泌的情況下增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的增殖和遷移,在大鼠模型中也得到了驗(yàn)證。

    2.4 胚胎干細(xì)胞/誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞

    胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ESC)是早期胚胎或原始性腺中分離獲得的全能干細(xì)胞,擁有無限的自我更新能力以及多胚層分化能力,可誘導(dǎo)分化成幾乎所有種類和功能的細(xì)胞。但由于ESC存在倫理爭論、免疫抑制以及潛在的成瘤性等原因,限制了它在臨床上的應(yīng)用。誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞(Induced pluripotent stem cell,IPSC)由Shinya Yamanaka于2006年報(bào)道相關(guān)性研究,擁有與ESC相似的胚胎干細(xì)胞特性,并且不受倫理限制,使得其逐漸代替ESC成為研究熱點(diǎn)之一。由于其成瘤性,臨床常用ESC/IPSC向MSC轉(zhuǎn)化作為臨床干細(xì)胞治療的來源[35]。ESC/IPSCMSC細(xì)胞擁有與BM-BMSC類似的免疫調(diào)節(jié)功能以及多向分化能力,同時(shí)無成瘤性,使得其在再生醫(yī)學(xué)中潛力無限。

    Wang等[36]研究發(fā)現(xiàn)hESC-MSC-Exo可以減輕軟骨破壞和基質(zhì)降解,延緩OA 進(jìn)展。分別用IL-1β處理的原代小鼠軟骨細(xì)胞作為體外OA模型以及DMM模型小鼠作為在體OA模型,從兩方面證明hESC-MSC-Exo可以使CollⅡ的合成增加,ADAMTS5合成抑制,以此來維持軟骨細(xì)胞表型,減輕軟骨損傷,延緩了OA進(jìn)展。Zhang等[37]通過軟骨缺損大鼠模型表明hESC-MSC-Exo在修復(fù)臨界大小(直徑1.5mm,深度1mm)的軟骨缺損是有效的。經(jīng)過12周,hESC-MSCExo組無論在形態(tài)學(xué)或是組織學(xué)上均優(yōu)于對(duì)照組。主要通過激活A(yù)KT和ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移并且增加M2型抗炎性巨噬細(xì)胞的浸潤。Zhu[33]等在膠原誘導(dǎo)的小鼠OA模型中,比較IPSC-MSC和SMSC分泌的Exo用于OA的治療效果。實(shí)驗(yàn)表明IPSC-MSC-Exo和SMSC-Exo均能緩解OA的進(jìn)展,但在體外IPSC-MSC-Exo具有更強(qiáng)的促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和遷移能力的作用;小鼠OA模型中,IPSC-MSCExo組對(duì)軟骨的修復(fù)作用也優(yōu)于SMSC-Exo組。所以相較于SMSC-Exo,IPSC-MSC-Exo可能具有更好的治療效果。

    2.5 圍產(chǎn)期組織間充質(zhì)干細(xì)胞

    以上MSC在臨床研究應(yīng)用較為常見,此外,圍產(chǎn)期組織來源的MSC也受到越來越多的關(guān)注,如人胎盤、臍帶、羊膜來源的MSC。

    2.5.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞

    Yan等[38]研究表明臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical cord mesenchymal stem cell,UCMSC)來源的外泌體(UMSC-Exo)通過轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和Smad2/3信號(hào)通路的激活,促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖、遷移和基質(zhì)合成,同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡。

    2.5.2 羊水干細(xì)胞

    Zavatti等[39]研究發(fā)現(xiàn)羊水干細(xì)胞(Amniotic fluid stem cell,AFCS)來源的外泌體(AFCS-Exo)在體外可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)變成M2型巨噬細(xì)胞,增強(qiáng)抗炎因子IL-10和TGF-β1的表達(dá),減弱促炎因子IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α的表達(dá)。在碘乙酸誘導(dǎo)的OA大鼠模型中,AFCS-Exo通過促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化修復(fù)軟骨損傷。

    2.5.3 胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞

    胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(Placental tissue-derived MSC, PLA-MSC)成骨能力最好。蔣文捷等[40]提出PLA-MSC可能通過下調(diào)TNF-α、IL-1β及IL-6水平,抑制MMPs的分泌與鈣黏素11的表達(dá),上調(diào)TGF-β水平,來減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)炎癥與軟骨破壞。但是并未直接提出是PLA-MSC來源的Exo在起作用。

    3 小結(jié)

    綜上所述,不同來源的MSC-Exo治療OA已經(jīng)被人們逐漸發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證,除此之外,MSC-Exo含有大量的miRNAs,除了可以直接作用于靶基因或者靶蛋白外,還參與到多種信號(hào)通路傳導(dǎo),如 SMAD、AKT、ERK等通路。更重要一點(diǎn),部分miRNAs具有修飾作用,就如上述提到的過表達(dá)miR-140-5p的SMSC-Exo可以增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的增殖和遷移并且不破壞細(xì)胞外基質(zhì)分泌;Sun等[41]也發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-320c的BMMSC-Exo可更高效地促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖,抑制MMP13生成和增強(qiáng) Sox9表達(dá)。

    雖然現(xiàn)在有大量證據(jù)能表明MSC-Exo對(duì)于OA有確切療效,但是許多功能及作用機(jī)制尚未完全闡明。此外,除了之前提到的IPSC-MSC-Exo比SMSC-Exo對(duì)OA的治療效果更佳以外,幾乎沒有其他實(shí)驗(yàn)研究不同來源的MSC-Exo哪種對(duì)于OA的療效最好。在今后的臨床研究中,除了進(jìn)一步探索MSC-Exo在體內(nèi)的確切機(jī)制,還應(yīng)注意到MSC-Exo最佳提取培養(yǎng)條件、臨床療程及劑量、如何修飾以達(dá)到最優(yōu)效果等等,以確保安全、有效,做到精準(zhǔn)醫(yī)療。

    MSC-Exo在各個(gè)領(lǐng)域都在飛速發(fā)展,并且還有巨大的發(fā)展空間,在骨科疾病的治療中占據(jù)著重要的地位。雖然目前治療策略仍停留在體外研究階段,在臨床應(yīng)用方面還面臨著諸多問題,如生物安全性、道德倫理等。但相信在不久的將來,隨著研究進(jìn)一步深入,MSC-Exo會(huì)為OA治療提供一個(gè)更安全、更方便、更經(jīng)濟(jì)和更有效的治療方法。

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