新型冠狀病毒檢測方法的應(yīng)用現(xiàn)狀

周娜

（新疆第八師石河子市疾控中心檢驗科,新疆 石河子）

0 引言

新型冠狀肺炎是近年來出現(xiàn)的一種新型疾病，在患上此病后，患者主要出現(xiàn)的臨床癥狀為：高熱、咳嗽、疲勞乏力等，威脅著患者的身心健康，需要對其進行及時檢測[1]。目前在臨床中有幾種常用的檢測方法，那么本次研究就對當(dāng)前常用的SARS-COV-2 基因測序、熒光RT-PCR 核酸檢測、血清特異性抗體檢測這幾種檢測方法的相關(guān)情況進行綜述。

1 基因測序

基因組指的是生物機體內(nèi)所有遺傳信息的和，應(yīng)用高通量測序平臺分析病毒基因組序列，可以成為診斷新冠肺炎的準(zhǔn)確依據(jù)。經(jīng)過數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示：SARS-COV-2和SARS-COV 中絕大多數(shù)的全基因組序列是十分相近的[2]，與蝙蝠具有較高的同源性。但SARS-COV-2 基因組ORF1ab 區(qū)域中的RNA 聚合酶基因（RdRp）與SARSCOV 具有明顯的差異性，它是一種新型的β 群冠狀病毒[3]。

通過創(chuàng)設(shè)的研究筆者選取了華南海鮮市場接觸史的2 例急性呼吸癥患者作為研究資料，對研究資料應(yīng)用基于RNA 的宏基因組下一代測序檢測方式實施檢測，通過檢測，能夠在短時間內(nèi)檢測出新型冠狀病毒，這是樣本中唯一的病毒。采用的高通量測序檢測方法具有準(zhǔn)確性高、敏感性強的特點，通過檢測可以獲得病毒全基因組序列的準(zhǔn)確結(jié)果，這樣就能夠顯著提升病毒的檢測準(zhǔn)確性，且對及時明確疾病病機也有促進作用；同時對變異性病毒的監(jiān)測有指導(dǎo)意義，對于繼續(xù)開發(fā)診斷試劑盒有促進作用。和其他的檢測方法進行比較，基因測序方法的優(yōu)勢較高，但是這種檢測方法的成本較高，對操作人員的要求也很高，從開始檢驗一直到得到檢驗結(jié)果需要較長的時間，不能滿足COVID-19 爆發(fā)時的檢測需求。所以，在疫情期間這種檢測方式不太適合，需要結(jié)合其他的檢測方式使用。

2 實時熒光RT-PCR 核酸檢測

實時熒光RT-PCR 技術(shù)是WHO 推薦的MERS-COV檢測方法之一，目前在我國已經(jīng)將檢測患者的呼吸道分泌物、血液標(biāo)本病毒核酸陽性作為COVID-19 的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一了[4]。在疫情剛剛出現(xiàn)的時候，我國的相關(guān)部門對SARS-COV-2 確認(rèn)了序列并予以公布，確認(rèn)了在基因檢測中核酸檢測的保守序列區(qū)域內(nèi)容，主要包括：開放讀碼框、核衣殼蛋白N 基因。SARS-COV-2 屬于一類RNA 病毒，其是先將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為DNA，若樣本中有靶序列存在，那么TaqMan 探針與模板相結(jié)合，DNA 鏈擴增就會有熒光顯示，在熒光達到閾值時即可得到Ct 結(jié)果，病毒核酸濃度與Ct 值是成反比例的[5]。此外，對一些弱陽性標(biāo)本，要將具有更高敏感度的檢測方法開發(fā)出來并應(yīng)用要檢測中。張鋒教授團隊開發(fā)了一種基于QRISPR 的SHERLOCK 技術(shù)的新方法，能夠?qū)ARS-COV-2 的特異性RNA 在短時間內(nèi)檢測出來。雖然取得了一定的成效，但有一些領(lǐng)域還沒有涉及到，仍然需要繼續(xù)去探索。

3 血清特異性抗體檢測

3.1 膠體金免疫法

此種方法主要是應(yīng)用膠體金作為示蹤標(biāo)記物或顯色劑來開展檢測。其基本原理為：將金標(biāo)抗原包被在硝酸纖維素膜上，如果受檢血液標(biāo)本中含有SARS-COV-2 特異性抗體的時候，就會形成SARS-COV-2 特異性抗體-金標(biāo)抗原復(fù)合物，借助層析的作用復(fù)合物會流向檢測區(qū)域內(nèi)，由此金標(biāo)抗原SARS-COV-2 特異性抗體－第二抗體復(fù)合物形成，進而出現(xiàn)顯色反應(yīng)；剩余的那些金標(biāo)抗原會繼續(xù)發(fā)生擴散，流向質(zhì)控區(qū)域中，顯色表示結(jié)果在控[6]。膠體金法操作簡單，短時間內(nèi)即可出結(jié)果，且樣本不需要離心，在檢測大數(shù)量人群中比較適用比較適用[7]。

3.2 化學(xué)發(fā)光免疫法

這種檢測方法主要是指把發(fā)光分析與免疫反應(yīng)進行結(jié)合來實施的檢測方法，此種檢測方法能夠?qū)ξ粗目贵w進行定量檢測，當(dāng)前在臨床中應(yīng)用十分廣泛。其基本原理為：如果樣本中含有SARS-COV-2 抗體與熒光素標(biāo)記抗原結(jié)合，將包被抗熒光素抗體的磁微粒添加進入，那么即可得到SARS-COV-2 抗體-熒光標(biāo)記抗原-磁微粒復(fù)合物1，然后將其放于特定環(huán)境中進行沉淀、去上清，將酶標(biāo)二抗加入其中，得到酶標(biāo)二抗-復(fù)合物1 結(jié)合體，將其上清去掉，然后加入酶促底物，底物受到酶催化進而會產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，之后通過計算機的處理得到待測抗體的濃度[8,9]。

相關(guān)研究結(jié)果顯示，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測了確診組患者、疑似組患者與對照組人員（共計102 例的血漿標(biāo)本），通過檢測得到的結(jié)果為：SARS-COV-2IgM/IgG 抗體檢測靈敏度為96.0%，特異度為100%。另有相關(guān)研究結(jié)果顯示：應(yīng)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法對血清SARS-COV-2 總抗體實施定量檢測，得到的結(jié)果為：此種檢測方法的靈敏度為93.5%，特異度為100%，準(zhǔn)確度96.8%。檢測結(jié)果顯示：化學(xué)發(fā)光法檢測SARS-COV-2 總抗體的效果要顯著好于膠體金檢測法[10]，在SARS-COV-2 感染的檢測中具有較好的實用價值。

3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）主要是應(yīng)用酶的催化作用所實施的檢驗。ELISA 需要實施離心操作，操作程序復(fù)雜，檢測需要較長時間，而且當(dāng)前還沒有此種方法用于檢測新冠病毒檢測產(chǎn)品的出現(xiàn)。

血清學(xué)抗體檢測方式的優(yōu)點為：（1）操作方法簡單，對于條件簡陋的醫(yī)院也可以開展，比較適合用于大量樣本的篩檢過程中。（2）有助于提升熒光RT-PCR 核酸檢測的檢測準(zhǔn)確性。（3）對患者體內(nèi)抗體含量的變化情況能夠進行實時監(jiān)測出來，為疾病的及時檢測提供準(zhǔn)確依據(jù)。（4）用于傳染病既往感染規(guī)律的流行病學(xué)研究，對于促進SARSCOV-2 等病毒的感染防治和疫苗研發(fā)有重要依據(jù)[11]。

4 小結(jié)

SARS-COV-2 的傳染性是比較強的、傳播速度快，要及時發(fā)現(xiàn)、及時隔離、盡早治療。但是所采取的基因測序檢測方法的時間較長，PCR 核酸檢測的全覆蓋率較高，并且因為SARS-COV-2 與其他冠狀病毒的同源性較高，應(yīng)用血清抗體檢測方法容易發(fā)生N蛋白和S 蛋白的抗原交叉反應(yīng)現(xiàn)象[12,13]，因此，如果只是用單一的檢測方法往往不能達到理想的檢測效果，要采取兩種甚至兩種以上的檢測方式實施檢測，才能不斷提高檢測工作質(zhì)量與效率[14,15]。