肺癌病人血清CD147表達(dá)及臨床意義 *

喬曉娟, 邢智偉, 趙美娜, 馬補(bǔ)換, 孫維廷, 劉彩霞

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010050)

CD147分子,又稱基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(extracellular matrixmetallo-proteinase inducer,EMMPRIN),可刺激成纖維細(xì)胞產(chǎn)生大量基質(zhì)金屬蛋白酶從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[1,2]。目前對肺癌病人血清中CD147表達(dá)臨床意義尚不明確。本研究擬通過檢測肺癌病人血清中CD147表達(dá)水平,分析其與臨床病理因素及預(yù)后因素的關(guān)系,明確其在肺癌診斷及預(yù)后中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院腫瘤科、胸外科2013-08～2014-06住院的初治肺癌病人82例為研究對象。均未接受手術(shù)、化療、放療、靶向及生物治療。所有病人均經(jīng)病理和(或)細(xì)胞學(xué)確診。按美國癌癥聯(lián)合委員會(American Joint Committee on Cancer,AJCC)2010年第7版分期系統(tǒng)進(jìn)行pTNM或cTNM分期。同期采集30例健康志愿者血清標(biāo)本作為對照組。每一位入組病人、健康志愿者均知情同意并簽署留取血液標(biāo)本知情同意書。每一份標(biāo)本3000轉(zhuǎn)/min鐘離心10～15min后,收集血清置于-80℃冰箱保存,集中進(jìn)行檢測。

1.2 主要試劑和儀器

CD147ELIAS 試劑盒購于武漢優(yōu)爾生公司,BIO-RAD Mode1680酶標(biāo)儀購于美國BIO-RAD公司。

1.3 實驗方法

ELISA法檢測血清中CD147水平。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔、空白孔,向相應(yīng)的孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品或血清樣品,每個標(biāo)準(zhǔn)品及樣品均做復(fù)孔,100μL每孔。37℃溫育2h,棄去液體,甩干。每孔加檢測溶液A工作液100μL,37℃溫育1h,洗板3次。每孔加檢測溶液B工作液100μL,37℃溫育30min,洗板5次。每孔加底物溶液90μL,37℃避光顯色。每孔加終止溶液50μL,終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的OD值,根據(jù)酶標(biāo)儀所測標(biāo)準(zhǔn)品OD值及對應(yīng)濃度,制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程式,將樣本的OD值代入方程,計算出樣本濃度,乘以稀釋倍數(shù),得出血清中CD147的實際濃度。

1.4 隨訪

采用門診隨診和電話隨訪方式進(jìn)行。隨訪時間截止至2017-06-30,仍存活病人按末次隨訪日期作為截尾數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用中位數(shù)和范圍表示。分析分類變量之間關(guān)系,應(yīng)用χ2檢驗。分析計量參數(shù)之間是否有差異,應(yīng)用非參數(shù)檢驗。受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線的繪制應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行操作,最佳臨界值(cut-off值)的確定在Excel表格中進(jìn)行。應(yīng)用 Kaplan-Meier 法計算生存曲線,并應(yīng)用 Log-rank 檢驗進(jìn)行比較。本研究以P<0.05(雙側(cè)檢驗)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌病人及正常人血清CD147水平的檢測

ELISA法測定82例肺癌病人和30例健康志愿者血清CD147水平,結(jié)果顯示,肺癌病人血清CD147水平為563.77(范圍,50.32-910.80)pg/mL,健康志愿者血清CD147水平為381.05(范圍:43.38-474.52)pg/mL,肺癌病人血清CD147水平高于健康志愿者,兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。

應(yīng)用SPSS19.0繪制ROC曲線(見圖1),ROC曲線下面積為0.876(95%CI:0.812-0.939),曲線下面積差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。血清CD147的cut-off值為466.14pg/mL時,敏感性:75.6%,特異性:96.2%,陽性預(yù)測值98.4%,陰性預(yù)測值59.1%。

以cut-off值466.14pg/mL為標(biāo)準(zhǔn),肺癌病人血清CD147水平升高者占75.6%(62/82),僅有3.3%(1/30)健康志愿者血清CD147水平升高,肺癌病人血清CD147陽性率高于健康對照組,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.001)。

2.2 肺癌病人血清CD147水平與臨床特征的關(guān)系

肺癌病人血清CD147水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān),與病人性別、年齡、吸煙狀態(tài)、PS評分、組織學(xué)類型、原發(fā)腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。M1病人血清CD147水平571.35(范圍，50.32-898.71)Pg/mL顯著高于M0病人489.72(范圍，50.32-898.71)Pg/mL,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037)。Ⅳ期病人血清CD147水平顯著高于Ⅲ期病人,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037)。

2.3 不同病理類型病人血清CD147水平與臨床特征關(guān)系

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)病人血清CD147水平與病人性別、年齡、吸煙狀態(tài)、PS評分、組織學(xué)類型、原發(fā)腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期均無相關(guān)性(P >0.05)。

入組的SCLC病人29例,為Ⅲ期和Ⅳ期接受化療病人,無T1及N0、N1病人。SCLC病人血清CD147水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān),M1病人血清CD147水平顯著高于M0病人,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.043)。Ⅳ期病人血清CD147水平顯著高于Ⅲ期病人,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.043)。而SCLC病人血清CD147水平性別、年齡、吸煙狀態(tài)、PS評分、原發(fā)腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P >0.05)。

2.4 肺癌病人血清CD147表達(dá)與肺癌病人生存的關(guān)系

以cut-off值466.14pg/mL為標(biāo)準(zhǔn),將肺癌病人分為CD147低表達(dá)組和CD147高表達(dá)組,進(jìn)行3年隨訪,生存分析結(jié)果顯示血清CD147表達(dá)與肺癌病人生存無關(guān)(P>0.05)。生存曲線提示與CD147高表達(dá)組比較,CD147低表達(dá)組病人生存期有延長趨勢,考慮CD147表達(dá)水平可能與肺癌病人的遠(yuǎn)期生存相關(guān)(見圖2)。

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移往往是腫瘤治療失敗的主要原因,其相關(guān)的細(xì)胞和分子機(jī)制極為復(fù)雜[3]。近年來,在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)許多與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的物質(zhì)。CD147分子,是一種高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面的糖蛋白,來源于人肺癌細(xì)胞系LX-1,屬于免疫球蛋白超家族。CD147在腫瘤發(fā)展過程中起到重要調(diào)控作用,通過一種和(或)多種信號通路使MMPs 的分泌增加,進(jìn)而促使腫瘤細(xì)胞生長及侵襲。并且能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增生和血管形成[4]。

目前研究表明:CD147在胃癌、頭頸部鱗癌等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)增高,與腫瘤發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[5,6]。Xu[7]的研究結(jié)果顯示:非小細(xì)胞肺癌組織中CD147高表達(dá),與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后相關(guān)。袁鈴[8]的研究同樣提示:非小細(xì)胞肺癌組織中CD147表達(dá)明顯高于癌旁組織及其相對應(yīng)的正常肺組織,結(jié)合臨床病理特征發(fā)現(xiàn)CD147表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤大小、是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期密切相關(guān)。但目前對肺癌病人血清中CD147表達(dá)臨床意義尚不明確。本研究應(yīng)用ELISA法檢測肺癌病人血清中CD147水平,分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,探討肺癌病人血清CD147水平的臨床意義。

本實驗結(jié)果顯示肺癌病人無論是血清CD147水平還是血清CD147陽性率均顯著高于健康對照組,血清CD147水平有可能作為肺癌診斷的分子標(biāo)志物。血清CD147診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.876,敏感性:75.6%,特異性:96.2%,提示血清CD147在肺癌中的診斷效能較好。

本研究檢測了肺癌病人血清CD147水平,結(jié)果顯示血清CD147水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān),隨著遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)及TNM分期的進(jìn)展,血清CD147的水平增高,提示CD147在腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。

進(jìn)一步分析不同病理類型血清CD147水平與臨床特征關(guān)系,結(jié)果顯示:NSCLC病人血清CD147水平與臨床特征無關(guān),而SCLC病人血清CD147水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)。與NSCLC相比,SCLC具有腫瘤倍增速度快,惡性程度高,較早發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移,具有更高的侵襲性,CDl47通過刺激成纖維細(xì)胞產(chǎn)生大量基質(zhì)金屬蛋白酶從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,有可能在SCLC發(fā)展過程中起重要作用。

進(jìn)一步對肺癌病人血清CD147表達(dá)水平與生存關(guān)系的研究顯示,血清CD147低表達(dá)組與高表達(dá)組生存期的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.155)。但CD147低表達(dá)組病人生存期有延長趨勢,考慮CD147表達(dá)水平可能與肺癌病人的遠(yuǎn)期生存相關(guān)。

本實驗結(jié)果提示血清CD147水平有可能作為肺癌診斷的分子標(biāo)志物。血清CD147表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān),且分層分析顯示高侵襲性SCLC病人血清CD147表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期同樣相關(guān),血清CD147水平有可能是小細(xì)胞肺癌預(yù)后的標(biāo)志物,有待進(jìn)一步探究。因本實驗樣本量少,實驗結(jié)論只有一定的參考意義,只有擴(kuò)大樣本量,才能更精確分析CD147在肺癌診斷及預(yù)后中的價值。