益氣活血腦泰方干預腦缺血后鐵代謝相關(guān)機制研究

廖君 王建君 余清平 曾勁松 胡立娟 羅寧 葛金文

摘要?目的：探討炎癥通路IL-6/stat3/Hepcidin調(diào)節(jié)鐵代謝相關(guān)機制，研究益氣活血腦泰方通過抑制炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)鐵代謝，減少細胞內(nèi)鐵聚集，為腦泰方防治腦缺血的臨床應(yīng)用提供重要實驗依據(jù)。方法：細胞實驗中，SH-SY5Y及CHME5細胞株模型干預24 h后，檢測Fe2+表達、Western Blotting檢測白細胞介素-6（IL-6）、Stat3及Hepcidin表達。動物實驗中，隨機將SD大鼠分為對照組、模型組、腦泰方低、中、高劑量組（3、9、27 g/kg）、去鐵酮組。各組大鼠預處理灌胃給藥連續(xù)3 d，大腦中動脈栓塞（MCAO）模型制備術(shù)后灌胃給藥1 d。術(shù)后1 d取材，Western Blotting檢測IL-6、Stat3及Hepcidin、Fpn的表達。結(jié)果：細胞實驗結(jié)果顯示：SH-SY5Y及CHME5細胞株模型組較正常組，細胞質(zhì)內(nèi)Fe2+表達明顯增加（P<0.01），IL-6、Stat3蛋白表達水平增高（P<0.05），Hepcidin表達明顯增高（P<0.05）。動物實驗結(jié)果顯示：與模型組比較，大鼠局灶性腦缺血后腦泰方高劑量組及去鐵酮組，大腦皮質(zhì)及髓質(zhì)IL-6和皮質(zhì)stat3、Hepcidin的表達明顯減少（P<0.01），腦泰方高劑量組髓質(zhì)Hepcidin的表達明顯減少（P<0.01），去鐵酮組髓質(zhì)Hepcidin的表達降低（P<0.05）;腦泰方高、去鐵酮組大腦皮質(zhì)及髓質(zhì)Fpn的表達較模型組明顯增加（P<0.01）。結(jié)論：腦泰方通過抑制IL-6/stat3信號通路，抑制腦缺血后炎癥反應(yīng)，減少Hepcidin分泌進而促進Fpn的表達，促進鐵離子外排，對腦缺血導致的鐵超載損傷有一定保護作用。

關(guān)鍵詞?腦泰方;腦缺血;炎癥;鐵代謝;白細胞介素-6;信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子3;鐵調(diào)素;膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白

Abstract?Objective：To explore the mechanism of IL-6/stat3/Hepcidin in the inflammatory pathway to regulate iron metabolism，and to study the effect of Yiqi Huoxue Naotai Formula on inhibiting inflammation，regulating iron metabolism，and reducing intracellular iron accumulation，providing important experimental basis of Naotai Formula in preventing and treating cerebral ischemia.Methods：In vitro experiment：SH-SY5Y and CHME5 cell lines culture for 24 h under OGD environment.The Fe2+ of the 2 cell lines were detected by kit of Metallofluor ferhonox-1 iron （Ⅱ） living cell imaging probe，and the expression of inflammatory and iron metabolism related proteins were detected by western-blot.In animal experiments，The rats were randomly divided into 5 groups：a normal group，a Sham surgery group，a model group，a low dose of NTF group（3 g/kg），a middle dose of NTF group（9 g/kg），a high dose of NTF group（27 g/kg），a Defriprone group.The expression of inflammatory and iron metabolism related proteins，IL-6/STAT3，hepcidin and Fpn1，were detected by wstern-blot.Results：Cell experiment results showed that compared with the normal group，the expression of Fe2+ in the cytoplasm of the SH-SY5Y and CHME5 cell lines in the OGD group was significantly increased （P<0.01），the expression of IL-6 and Stat3 protein was increased （P<0.05），and the expression of Hepcidin was significantly increased （ P<0.05）.The results of animal experiments showed that compared with the model group，the expression of IL-6 in the cerebral cortex and medulla，and the expression of stat3 and Hepcidin in the cerebral cortex and medulla in the high-dose Naotaifang group and the deferiprone group were significantly reduced after focal cerebral ischemia in rats （P<0.01），the expression of Hepcidin in the medulla of the Naotaifang high-dose group was significantly reduced （P<0.01），and the expression of Hepcidin in the medulla of the deferiprone group was decreased （P<0.05）; The expression of medullary Fpn was significantly higher than that of the model group （P<0.01）.Conclusion：Naotai Formula can inhibits the IL-6/stat3 signaling pathway，the inflammatory response after cerebral ischemia，reduce the secretion of Hepcidin and promote the expression of Fpn，promote the efflux of iron ions，and has a certain protective effect on iron overload damage caused by cerebral ischemia.

Keywords?Naotaifang （NTF）; Cerebral ischemia; Inflammation; Iron metabolism; IL-6; Signal transduction and transcriptional activator 3（stat3）; Hepcidin;Fpn

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.22.012

缺血性中風（Ischemic Stroke，IS）又稱腦缺血，是由各種原因?qū)е碌哪X組織血液供應(yīng)障礙，并由此產(chǎn)生缺血缺氧性壞死，進而出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙的一組臨床綜合征。腦缺血后的炎癥反應(yīng)與腦缺血急性期腦損害密切相關(guān)[1]。大腦中神經(jīng)膠質(zhì)細胞占到腦內(nèi)總細胞的90%。最初膠質(zhì)細胞被簡單地認為是大腦的填充物，僅起著支持、營養(yǎng)、保護等作用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)膠質(zhì)細胞發(fā)揮著與神經(jīng)元同等重要的功能，甚至神經(jīng)元的很多重要功能都是由神經(jīng)膠質(zhì)細胞調(diào)控[2]。小膠質(zhì)細胞（Microglia）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）最主要的免疫細胞。正常情況下，小膠質(zhì)細胞處于靜息狀態(tài)，維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。應(yīng)激反應(yīng)中神經(jīng)肽可調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞活性，激活的小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，引起神經(jīng)毒性[3]。研究者新近提出神經(jīng)的反饋調(diào)節(jié)在炎癥反應(yīng)中起重要作用，受損的神經(jīng)元通過釋放各種趨化因子激活膠質(zhì)細胞[4-5]。

鐵是人體內(nèi)必需的微量元素之一，參與氧輸送、線粒體呼吸功能以及DNA的合成，是神經(jīng)遞質(zhì)及髓鞘蛋白合成重要酶的輔基[6];鐵離子作為一種催化劑，在缺氧和炎癥反應(yīng)狀況下，能導致脂質(zhì)過氧化和氧化應(yīng)激，最終引發(fā)線粒體功能紊亂、神經(jīng)元損傷[7-9]。鐵調(diào)素（Hepcidin）是由肝臟合成并分泌的鐵調(diào)節(jié)肽類激素，有研究表明炎癥反應(yīng)可誘導Hepcidin的表達[10]。因此，開展腦缺血后神經(jīng)元及小膠質(zhì)細胞鐵代謝與炎癥反應(yīng)相關(guān)性研究，可為中醫(yī)藥防治及作用機制研究提供重要實驗依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?細胞?細胞株包括：SH-SY5Y細胞株（人神經(jīng)細胞系，中科院細胞庫，目錄號：SCSP-5014）;CHME5細胞株（小膠質(zhì)細胞，豐暉生物，貨號：CL0359）。

1.1.2?動物?50只Sprague-Dawley雄性大鼠，體質(zhì)量250～280 g，清潔級，8周齡，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心，給藥前適應(yīng)性喂養(yǎng)5～7 d（普通飼料，常規(guī)飲水，室溫控制在22 ℃左右，相對濕度約60%）。由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，合格證號：SCXK（湘）2019-0004。動物倫理審批號：LL2019092009，符合清潔級實驗動物標準。

1.1.3?試劑與儀器?MetalloFluor FeRhonox-1鐵離子（Ⅱ）活細胞成像探針（Goryo公司，日本，貨號：GC901）;DMEM/F12（貨號：SH30023.01B）、FBS（貨號：SH30070.03）、青鏈霉素（貨號：SV30010）、胰酶（貨號：SH30042.01）以上購自美國Hyclone公司;PBS（南京生興公司，貨號：SN331）;Fpn多克隆抗體（貨號：Anti-SLC40A1 antibody ab58695）、Hepcidin多克隆抗體（貨號：Anti-Hepcidin-25 antibody【EPR18074】ab187778）、白細胞介素-6（IL-6）多克隆抗體（貨號：Anti-IL-6 antibody ab9324）、STAT3多克隆抗體（貨號：Anti-STAT3 antibody[EPR787Y]ab68153）以上購自美國Abcam公司;HRP-羊抗小鼠（貨號：BA1050）、HRP-羊抗兔（貨號：BA1054）、轉(zhuǎn)膜液（貨號：AR1151）、NC膜（貨號：AR0135）以上購自博士德Boster公司;水合氯醛（天津市大茂化學試劑廠，CAS號：302-17-0）。CO2培養(yǎng)箱（Thermo fisher公司，美國，型號：3131）;Confocal熒光顯微鏡（Zeiss公司，德國，型號：LSM710）;電泳儀（北京六一公司，型號：DYY-12）;灌膠﹑垂直電泳﹑轉(zhuǎn)印裝置（上海天能公司，型號：VE-180）;全自動化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)（上海天能公司，型號：Tanon5200）;高速離心機（上海安亭公司，型號：TGL-20000CR）;勻漿器（寧波新芝，型號：SCIENTZ-48）;超聲破碎儀（寧波新芝，型號：JY88-IIN）;移液器（Thermo fisher公司，美國，貨號：4652000）;A4栓線（西濃科技，型號：2634）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?1）細胞實驗分組：分正常組及OGD模型組。2）動物實驗分組：SD大鼠60只，隨機分6組，每組10只，分別為正常組、模型組（灌胃生理鹽水）、腦泰方（NTF）低劑量組（3 g/kg）、NTF中劑量組（9 g/kg）、NTF高劑量組（27 g/kg）和去鐵酮組。3）大鼠局部性腦缺血模型的建立：大腦中動脈栓塞法（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）大鼠模型參照Garcia TH建立的方法[11]改進。動物麻醉用10%水合氯醛（35 mg/kg）腹腔注射。仰臥位固定，頸正中線切口。沿胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)緣分離右側(cè)肌肉和筋膜，分離右側(cè)頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）及頸內(nèi)動脈（ICA）。于CCA的遠心端和近心端及ECA處掛線備用。微動脈夾暫時夾閉ICA，近心端結(jié)扎CCA及ECA。在距CCA分叉4 mm處斜剪一小口，將拴線沿CCA插入ICA，用眼科鑷輕推拴線，當插入深度距血管分叉處18 mm時，系緊CCA遠心端的細線。修剪血管外的栓線，不需縫在皮外，以防大鼠醒來后自行拔出?？p合傷口，單籠飼養(yǎng)觀察。

1.2.2?給藥方法?腦泰方提取物為黃芪、川芎、地龍、僵蠶4味藥，按照比例8∶2∶3∶3組成，經(jīng)水煎，濃縮為含生藥2 g/mL，以60 kg成年人劑量80 g生藥/d為依據(jù)，大鼠劑量按體表面積換算，2倍劑量。藥物劑量按人鼠體表面積折算等效比率計量表，計算出大鼠等效劑量。每次灌胃的容量為1 mL/100 g大鼠，1次/d，術(shù)前灌胃3 d，術(shù)后灌胃1 d。

1.2.3?檢測指標

1.2.3.1?Fe2+檢測?1）CHME5、SH-SY5Y細胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM/F12完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37 ℃含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞增殖至80%～90%時，用胰酶將細胞消化下來，按照1∶3比例傳代。2）將1×106個細胞種在3.5 cm玻璃底培養(yǎng)皿中，將細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)貼壁后，其中CHME5-模型、SH-SY5Y-模型更換為無血清DMEM/F12培養(yǎng)基，放入1%O2三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h。實驗結(jié)束后，更換為完全培養(yǎng)基放入正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。3）將所有細胞從培養(yǎng)箱中取出，去除培養(yǎng)基，加入預冷的PBS輕輕將細胞洗2次。4）加入5 μmol/L Fe2+檢測試劑混勻后，放入正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60 min。將培養(yǎng)基去除，加入預冷的PBS洗3次。用激光共聚焦熒光顯微鏡拍照。

1.2.3.2?細胞實驗Western Blotting檢測?1）蛋白的提取及測定：將接種于六孔板中的2種細胞在模型中4 h后培養(yǎng)24 h，去除培養(yǎng)基，加入預冷的PBS，加入100 μL RIPA裂解液，冰上裂解30 min。裂解完成后，4 ℃下12 000 r/min，離心半徑6 cm，離心5 min。離心后的上清液轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中，-20 ℃保存。蛋白的含量測定（根據(jù)碧云天BCA測定試劑盒說明書操作）。2）SDS-PAGE電泳濃縮膠層電壓80 V，30 min，樣品進入分離膠后，改用120 V電壓電泳90 min。電泳至溴酚藍剛出現(xiàn)即可終止電泳，進行轉(zhuǎn)膜。3）轉(zhuǎn)膜及檢測：將膜移至含有封閉液（5%脫脂奶粉TBST溶液）的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動封閉1 h。一抗用含5% BSA的TBST溶液按照1∶1 000稀釋于4 ℃孵育過夜。用TBST在室溫下脫色搖床上洗3次，10 min/次。將二抗用TBST按照1∶5 000稀釋，室溫下孵育2 h后，用TBST在室溫下脫色搖床上洗3次，10 min/次。4）采用Tanon ECL進行化學發(fā)光，按照試劑盒說明書操作。于Tanon5200化學發(fā)光成像儀下拍照，獲取圖片。

1.2.3.3?動物實驗Western Blotting檢測?1）蛋白樣品制備：組織總蛋白提取，BCA蛋白定量，加上樣緩沖液煮沸變性處理。取一定量的組織加入相應(yīng)體積的RIPA裂解液（提前加入蛋白酶抑制劑）進行勻漿;超聲處理，處理完后置冰上裂解0.5 h。10 000×g離心10 min，取上清液至一新離心管即為所提取總蛋白溶液;取少量蛋白溶液BCA定量后，剩余蛋白溶液加入蛋白上樣緩沖液，置100 ℃水浴箱中沸水浴變性5 min。樣品制備完成，置-20 ℃保存。2）電泳：樣本每孔30 μg，濃縮膠5%，電泳電壓70 V，分離膠12%，電泳電壓90 V，時間約2 h。3）轉(zhuǎn)膜（濕轉(zhuǎn)）與封閉：0.2 μm NC膜，轉(zhuǎn)膜液（含20%甲醇）電流值150 mA，轉(zhuǎn)膜時間50～70 min;封閉液為5%脫脂奶粉溶于TBS-T;封閉時間為置室溫20 ℃，搖床搖動 1.5 h。4）孵育：一抗，按一定比例稀釋于Western專用一抗二抗稀釋液（AR1017）;IL-6（1∶200稀釋），24 kD;STAT3（1∶1 000稀釋），92?kD;Hepcidin（1∶500稀釋），15?kD;Fpn（1∶500稀釋），55?kD;孵育時間及溫度：置4 ℃冰箱，搖床搖動過夜（約15 h）;TBS-T洗膜3次，10 min/次。二抗?jié)舛龋篐RP-羊抗小鼠（1∶5 000），HRP-羊抗兔（1∶5 000）稀釋于博士德Western專用一抗二抗稀釋液（AR1017）;孵育時間及溫度：置4 ℃冰箱，搖床搖動2 h。TBS-T洗膜3～5次，15 min/次。5）ECL發(fā)光顯色：ECL化學發(fā)光試劑A液和B液等體積混合配成工作液。加ECL工作液于印跡膜上30～60 s，吸干后印跡膜通過成像分析儀自動成像，軟件ImageJ分析蛋白條帶灰度值。

1.3?統(tǒng)計學方法?采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間差異比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2?結(jié)果

2.1?細胞實驗結(jié)果?1）SH-SY5Y及CHME5細胞株正常組及模型組比較，模型組細胞形態(tài)明顯改變，細胞皺縮，有些細胞脫落，懸浮于細胞培養(yǎng)液。見圖1。2）SH-SY5Y及CHME5細胞株檢測Fe2+檢測：模型組較正常組，細胞質(zhì)內(nèi)Fe2+表達均明顯增加（P<0.01）。見圖2。3）SH-SY5Y及CHME5細胞株WB檢測炎癥介質(zhì)及鐵轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白的表達。見圖3。SH-SY5Y細胞株，模型組與正常組比較，炎癥介質(zhì)及相關(guān)通路蛋白IL-6，STAT3表達增加（P<0.05），鐵調(diào)節(jié)蛋白hepcidin表達明顯增加（P<0.01）。CHME5細胞在正常培養(yǎng)及模型培養(yǎng)比較，模型組炎癥介質(zhì)IL-6表達明顯增加（P<0.01），炎癥相關(guān)通路蛋白STAT3及hepcidin表達增加（P<0.05）。

2.2?動物實驗結(jié)果?1）WB檢測大鼠局灶性腦缺血模型后各觀察組大腦皮質(zhì)炎癥及鐵代謝相關(guān)蛋白表達。與正常組比較，模型組大鼠大腦皮質(zhì)IL-6、STAT3的表達明顯增加（P<0.01）;與模型組比較，腦泰方高劑量組及去鐵酮干預可明顯降低大腦皮質(zhì)IL-6、STAT3的表達（P<0.01）。與正常組比較，模型組大鼠大腦皮質(zhì)hepcidin的表達明顯增加（P<0.05），腦泰方高劑量組及去鐵酮干預可明顯降低hepcidin的表達（P<0.01）;膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白Fpn的表達模型組較正常組明顯降低（P<0.01），而腦泰方高劑量組及去鐵酮組較模型組明顯升高（P<0.01）。見圖4。2）WB檢測大鼠局灶性腦缺血模型后各觀察組大腦髓質(zhì)炎癥及鐵代謝相關(guān)蛋白表達。與正常組比較，模型組大鼠大腦髓質(zhì)IL-6的表達明顯增加（P<0.01）;與模型組比較，腦泰方高劑量組及去鐵酮干預可明顯降低大腦髓質(zhì)IL-6的表達（P<0.01）。模型組STAT3與正常組比較有升高，藥物干預組較模型組表達降低，但差異無統(tǒng)計學意義。模型組hepcidin較正常組的表達明顯增加（P<0.01），與模型組比較，腦泰方中、高劑量組及去鐵酮組明顯降低hepcidin的表達（P<0.01，P<0.05）;膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白Fpn模型組較正常組明顯降低（P<0.01），而腦泰方高劑量組及去鐵酮組較模型組明顯升高（P<0.01）。見圖5。

3?討論

腦缺血早期的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為細胞間黏附分子（ICAM）與循環(huán)中的白細胞（WBC）結(jié)合，促使后者移入中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）[12]，以及小膠質(zhì)細胞活化分泌細胞因子，如白細胞介素-1（IL-1），白細胞介素-6（IL-6），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與γ干擾素（INF-γ）等，調(diào)控免疫應(yīng)答[13]。小膠質(zhì)細胞激活后產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)、過氧化物及興奮性氨基酸毒導致神經(jīng)元損傷[14]。炎癥反應(yīng)是腦缺血后繼發(fā)性損傷的重要因素[15]。

Hepcidin是肝內(nèi)分泌的鐵調(diào)節(jié)蛋白，對體內(nèi)鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的調(diào)節(jié)具有重要作用。Hepcidin通過作用于Fpn調(diào)節(jié)十二指腸對鐵的吸收及巨噬細胞鐵釋放，在鐵代謝中起著關(guān)鍵的作用[16]。Hepcidin肝臟內(nèi)調(diào)節(jié)的途徑包括：即骨形態(tài)發(fā)生蛋白（Bone Morphogenetic Protein，BMP）信號途徑和IL-6信號途徑[17]。有研究提出，脈絡(luò)叢上IL-6可通過STAT3信號通路調(diào)節(jié)Hepcidin表達[18]。顱內(nèi)注射脂多糖（LPS）導致皮質(zhì)和黑質(zhì)Hepcidin表達增加，F(xiàn)pn表達減少，其中小膠質(zhì)細胞分泌IL-6及STAT3信號通路的調(diào)節(jié)起重要作用[19]。

研究者們在探討神經(jīng)系統(tǒng)炎癥與鐵代謝相關(guān)性研究時發(fā)現(xiàn)，炎癥介質(zhì)可致星形膠質(zhì)細胞的Fpn表達減少，細胞內(nèi)鐵轉(zhuǎn)出降低，髓鞘再生減少;而抗炎細胞因子可使星形膠質(zhì)細胞Fpn表達增強，細胞內(nèi)鐵輸出增加，減輕鐵超載，發(fā)揮細胞保護作用[20];IL-1和IL-6能促進星形膠質(zhì)細胞分泌銅藍蛋白，作用于微血管內(nèi)皮細胞的Fpn，提高基膜側(cè)的鐵向腦內(nèi)輸入[21];通過檢測TNF-α、IL-6、LPS刺激神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞內(nèi)鐵轉(zhuǎn)運蛋白的表達等實驗證明，神經(jīng)退行性疾病中炎癥發(fā)生和鐵聚集機制與炎癥誘導Hepcidin的產(chǎn)生，增加DMT1表達，降低Fpn表達有關(guān)[22]。因此，腦缺血后神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞炎癥及鐵代謝相關(guān)性機制研究為腦缺血防治提供新的靶點。

腦泰方由黃芪、地龍、僵蠶、川芎4味中藥組成，黃芪為君藥，借其力專、性走，周行全身，大補脾胃元氣，令氣旺則血活，血活則瘀除，以治其本;地龍性寒、味咸，具有息風通絡(luò)之功效;僵蠶味辛、咸，性平，具有祛風化痰作用，二者何用共奏通經(jīng)活絡(luò)、祛風化痰之功效，均為臣藥;川芎活血行氣，氣行則血行，且具引藥上行之功效，是為佐藥;4味藥配合，共奏益氣活血，化痰通絡(luò)之效。前期研究表明，腦泰方干預促進腦缺血及缺血再灌注神經(jīng)元Fpn的表達，增加非血紅素鐵排泄，減少鐵聚集引起的氧化損傷[23-24]。

本課題進行腦缺血后炎癥與鐵代謝相關(guān)性研究，SH-SY5Y及CHME5細胞株缺糖缺氧培養(yǎng)，炎癥介質(zhì)IL-6及通路蛋白Stat3表達明顯增加，Hepcidin生成增加，鐵離子輸出蛋白Fpn減少，神經(jīng)元及小膠質(zhì)細胞內(nèi)鐵離子聚集。動物實驗使用鐵離子螯合劑去鐵酮作為陽性對照藥。局灶性腦缺血后腦泰方干預治療，大鼠大腦皮質(zhì)炎癥介質(zhì)IL-6及通路蛋白Stat3表達明顯降低，Hepcidin表達減少，鐵離子輸出蛋白Fpn增加;髓質(zhì)IL-6表達增加，Hepcidin表達減少，F(xiàn)pn增加。

因此我們推測，腦缺血后神經(jīng)元及小膠質(zhì)細胞炎癥介質(zhì)IL-6生成增加，通過IL-6/STAT3信號通路刺激鐵調(diào)素Hepcidin生成，進而抑制Fpn表達，鐵離子聚集。益氣活血腦泰方可以通過抑制IL-6的表達，抑制Hepcidin分泌，促進Fpn表達，增加鐵離子外排，減少細胞內(nèi)鐵聚集。

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（2020-07-27收稿?責任編輯：王明）