牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病體外模型細(xì)胞凋亡和氧化損傷的影響

柯來(lái)順 涂燕芬 林慶金 劉華斌 肖雪蓮

摘要?目的：探討牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病體外模型β淀粉樣肽25-35（Aβ25-35）誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡和氧化損傷的影響及機(jī)制。方法：將PC12細(xì)胞分成對(duì)照組、模型組（Aβ25-35處理）、ATG-L組（2 μmol/L牛蒡子苷元和Aβ25-35處理）、ATG-M組（4 μmol/L牛蒡子苷元和Aβ25-35處理）、ATG-H組（8 μmol/L牛蒡子苷元和Aβ25-35處理）、ATG-H+LY29400組（AKT信號(hào)抑制劑LY29400、8 μmol/L牛蒡子苷元和Aβ25-35處理）。以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化，黃嘌呤氧化法檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）含量，Western Blotting法檢測(cè)磷酸化的蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表達(dá)。結(jié)果：ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組p-AKT/AKT表達(dá)量以及SOD含量高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）;ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組細(xì)胞凋亡率低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）;ATG-H+LY29400組p-AKT/AKT表達(dá)量以及SOD含量低于ATG-H組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）;ATG-H+LY29400組細(xì)胞凋亡率高于ATG-H組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。結(jié)論：牛蒡子苷元通過(guò)激活A(yù)KT信號(hào)通路抑制阿爾茨海默病體外模型Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡和氧化損傷。

關(guān)鍵詞?牛蒡子苷元;PC12細(xì)胞;阿爾茨海默病;β淀粉樣肽25-35;AKT信號(hào);凋亡;氧化損傷;增殖

Abstract?Objective：To investigate the effect and its mechanis of arctigenin on the apoptosis and oxidative damage of PC12 cells induced by amyloid beta 25-35（Aβ25-35）in an in vitro model of Alzheimer′s disease.Methods：PC12 cells were divided into a control group，a model group （Aβ25-35 treatment），a ATG-L group （2 μmol/L arctigenin and Aβ25-35 treatment），a ATG-M group （4 μmol/L arctigenin and Aβ25-35 treatment），a ATG-H group （8 μmol/L arctigenin and Aβ25-35 treatment），and a ATG-H+LY29400 group （AKT signal inhibitor LY29400，8 μmol/L arctigenin and Aβ25-35 treatment）.Flow cytometry was used to detect cell apoptosis changes.Xanthine oxidation method was used to detect superoxide dismutase （SOD） content.The expression of Phosphorylated protein kinase B （p-AKT） protein in cells was detected with Western Blotting method.Results：P-AKT/AKT expression and SOD content in the ATG-L，ATG-M，ATG-H group were higher than those in the Model group，and the differences were statistically significant （Ps<0.05）; The apoptosis rate of the ATG-L，ATG-M，ATG-H group were lower than those of the Model group，and the difference was statistically significant （Ps<0.05）; The p-AKT/AKT，SOD levels in the ATG-H+LY29400 group were lower than those in the ATG-L，ATG-M and ATG-H group，and the differences were statistically significant （Ps<0.05）; The apoptosis rate in the ATG-H+LY29400 group were higher than those in the ATG-H group，and the differences were statistically significant （Ps<0.05）.Conclusion：Arctigenin can inhibit the apoptosis and oxidative damage of PC12 cells induced by Aβ25-35 in an in vitro model of Alzheimer′s disease by activating the AKT signaling pathway.

Keywords?Arctigenin; PC12 cells; Alzheimer′s disease; Aβ25-35; AKT signal; Apoptosis; Oxidative damage; Proliferation

中圖分類(lèi)號(hào)：R285;R745.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.22.010

阿爾茨海默病是一種常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，也是常見(jiàn)的老年疾病之一，對(duì)于阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制，有氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)、瀑布假說(shuō)、膽堿能學(xué)說(shuō)、瀑布假說(shuō)等多種學(xué)說(shuō)[1]。β淀粉樣肽（Amyloid Beta，Aβ）沉積誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能障礙[2]。牛蒡子苷元是從中藥牛蒡子中提取出來(lái)的活性成分，具有抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等作用，對(duì)腫瘤、糖尿病等有治療功效[3-4]。有研究發(fā)現(xiàn)，牛蒡子苷元可改善神經(jīng)功能，牛蒡子苷元處理可改善乙醇誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷，減少細(xì)胞凋亡[5]。牛蒡子苷元治療后的阿爾茨海默病小鼠模型記憶功能明顯改善，衰老斑塊減少[6]。目前尚未發(fā)現(xiàn)牛蒡子苷元在阿爾茨海默病體外PC12細(xì)胞模型中的作用研究。已經(jīng)有研究表明，牛蒡子苷元發(fā)揮作用與信號(hào)通路如AKT等有關(guān)。AKT信號(hào)在組織中廣泛表達(dá)，具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、自噬、炎癥、氧化平衡等作用[7-8]。有研究顯示，阿爾茨海默病中AKT信號(hào)通路激活水平降低，而激活A(yù)KT可改善神經(jīng)損傷[9]。本實(shí)驗(yàn)以Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞，體外構(gòu)建阿爾茨海默病細(xì)胞模型，探討牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病細(xì)胞模型凋亡和氧化損傷的影響及機(jī)制，為牛蒡子苷元治療阿爾茨海默病的臨床使用提供參考。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?細(xì)胞?PC12細(xì)胞，貨號(hào)iCell-r026，由賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司提供。

1.1.2?藥物?牛蒡子苷元，規(guī)格：100 mg，批號(hào)：D297801，純度：≥98.0%，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)資源平臺(tái)生產(chǎn)。

1.1.3?試劑與儀器?AKT抗體（Abcam公司，美國(guó)，貨號(hào)：ab8805），Bax抗體（Abcam公司，美國(guó)，貨號(hào)：ab32503）;Bcl-2抗體（Santa Cruz Biotechnology公司，美國(guó)，貨號(hào)：sc-7382），p-AKT抗體（Cell Signaling Technology公司，美國(guó)，貨號(hào)：9271），Aβ25-35（Sigma公司，美國(guó)，貨號(hào)：A4559-250UG）;SOD檢測(cè)試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：BC0170）;GSH-Px檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所有限公司，貨號(hào)：A005-1-2）;MDA檢測(cè)試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所，貨號(hào)：S0131S）;AKT信號(hào)抑制劑LY29400（medchemexpress公司，美國(guó)，貨號(hào)：LY29400），酶標(biāo)儀（北京悅昌行科技有限公司，型號(hào)：SpectraMax iD5），流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特公司，美國(guó)，型號(hào)：CytoFLEX），倒置顯微鏡（上海蔡康光學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：XSP-11CD）。

1.2?方法

1.2.1?分組與給藥方法?PC12細(xì)胞分成對(duì)照組、模型組、ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組、ATG-H+LY29400組，分組處理方法如下：1）對(duì)照組：按照常規(guī)方法培養(yǎng);2）模型組：用含有20 μmol/L的Aβ25-35細(xì)胞培養(yǎng)液刺激;3）ATG-L組：用含有2 μmol/L的牛蒡子苷元和20 μmol/L的Aβ25-35細(xì)胞培養(yǎng)液處理;4）ATG-M組：用含有4 μmol/L的牛蒡子苷元和20 μmol/L的Aβ25-35細(xì)胞培養(yǎng)液處理;5）ATG-H組：用含有8 μmol/L的牛蒡子苷元和20 μmol/L的Aβ25-35細(xì)胞培養(yǎng)液處理;6）ATG-H+LY29400組：用含有10 μmol/L的AKT信號(hào)抑制劑LY29400、8 μmol/L的牛蒡子苷元和20 μmol/L的Aβ25-35細(xì)胞培養(yǎng)液處理。

1.2.2?檢測(cè)指標(biāo)與方法?1）CCK-8實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖[10]：在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中接種PC12細(xì)胞，接種密度為每孔4 000個(gè)細(xì)胞/100 μL，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜以后，分別在細(xì)胞中添加牛蒡子苷元，使其終濃度為0、2、4、8、16、32 μmol/L，或按照1.2.1中方法分組，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，在孔內(nèi)添加CCK-8，每個(gè)孔中添加10 μL，在37 ℃繼續(xù)反應(yīng)3 h。調(diào)整酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為450 nm，檢測(cè)每個(gè)孔的OD值。OD值表示細(xì)胞增殖活性。2）流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡[11]：對(duì)照組、模型組、ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組、ATG-H+LY29400組細(xì)胞培養(yǎng)24 h以后，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，在細(xì)胞中加入PBS洗滌2次，然后添加Binding Buffer配制成單細(xì)胞懸浮液，吸取5 μL的PI和Annexin V-FITC添加到細(xì)胞內(nèi)，放在室溫條件下結(jié)合15 min。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡變化。3）Western Blotting方法檢測(cè)Bax、Bcl-2、p-AKT蛋白表達(dá)[12]：對(duì)照組、模型組、ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組、ATG-H+LY29400組細(xì)胞培養(yǎng)24 h以后，每個(gè)檢測(cè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，在細(xì)胞中加入PBS溶液洗滌2次，添加含PMSF的RIPA，在冰上充分裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中，4 ℃，10 000×g離心10 min。蛋白存在于上清液中。蛋白濃度測(cè)定用常規(guī)BCA方法，步驟根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。在蛋白樣品中加入5×Loading Buffer，于100 ℃煮沸5 min。本實(shí)驗(yàn)選擇10%分離膠、5%濃縮膠進(jìn)行電泳。每個(gè)泳道內(nèi)添加30 μg蛋白樣品。首先以70 V的電壓電泳，肉眼可見(jiàn)藍(lán)色染料電泳到分離膠時(shí)，此時(shí)將電壓調(diào)整為100 V，等到藍(lán)色染料已經(jīng)完全進(jìn)入玻璃板底部邊緣1 mm處，關(guān)閉電源。將凝膠取出，切下分離膠。根據(jù)蛋白分子量大小裁剪NC膜。在冰上，100 V電壓條件下轉(zhuǎn)膜2 h。NC膜放在封閉液中，轉(zhuǎn)移到37 ℃條件下結(jié)合1 h。然后將NC膜放在一抗溶液中，Bax、Bcl-2一抗按照1∶800稀釋?zhuān)琾-AKT一抗按照1∶600稀釋?zhuān)珹KT一抗按照1∶1 000稀釋?zhuān)? ℃過(guò)夜反應(yīng)。把NC膜放在1∶2 000稀釋以后的二抗中，轉(zhuǎn)移到37 ℃環(huán)境中結(jié)合1 h。滴加ECL顯色試劑。以GAPDH作為參照，根據(jù)條帶的灰度值對(duì)目的蛋白表達(dá)量進(jìn)行半定量分析，目的蛋白表達(dá)量=目的條帶灰度值/內(nèi)參GAPDH灰度值。4）SOD、GSH-Px、MDA含量檢測(cè)[13]：對(duì)照組、模型組、ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組、ATG-H+LY29400組細(xì)胞培養(yǎng)24 h以后，以SOD檢測(cè)試劑盒（黃嘌呤氧化法）、GSH-Px檢測(cè)試劑盒（比色）。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，數(shù)據(jù)均滿(mǎn)足正態(tài)分布及方差齊性，2組比較用t檢驗(yàn)，多組差異比較用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?牛蒡子苷元對(duì)PC12細(xì)胞增殖影響?與0 μmol/L比較，2、4、8 μmol/L牛蒡子苷元處理后的PC12細(xì)胞增殖活性沒(méi)有變化，而16、32 μmol/L牛蒡子苷元處理后的PC12細(xì)胞增殖活性降低。見(jiàn)表1。選擇對(duì)PC12細(xì)胞增殖毒性無(wú)影響的2、4、8 μmol/L牛蒡子苷元做后續(xù)研究。

2.2?牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病PC12細(xì)胞增殖和凋亡的影響?模型組PC12細(xì)胞增殖活性降低，細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)增多，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組PC12細(xì)胞增殖活性逐漸升高，細(xì)胞凋亡率逐漸降低，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)逐漸減少，Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸增多，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖1，表2。

2.3?牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病PC12細(xì)胞氧化損傷的影響?模型組PC12細(xì)胞SOD、GSH-Px含量降低，MDA含量升高，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組PC12細(xì)胞的SOD、GSH-Px含量逐漸升高，MDA含量逐漸降低，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4?牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病PC12細(xì)胞中AKT信號(hào)通路的激活作用?模型組PC12細(xì)胞p-AKT/AKT表達(dá)量降低，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。ATG-L組、ATG-M組、ATG-H組PC12細(xì)胞p-AKT/AKT表達(dá)量逐漸升高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。見(jiàn)圖2和表4。

2.5?AKT信號(hào)通路抑制劑對(duì)牛蒡子苷元作用阿爾茨海默病PC12細(xì)胞增殖、凋亡和氧化損傷的影響?ATG-H+LY29400組PC12細(xì)胞增殖活性降低，細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)增多，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，p-AKT/AKT表達(dá)量減少，SOD、GSH-Px含量降低，MDA含量升高，與ATG-H組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖3，表5。

3?討論

阿爾茨海默病占全部老年癡呆的60%以上，記憶減退、人格變性、認(rèn)知障礙等是阿爾茨海默病的臨床表現(xiàn)。Aβ沉積產(chǎn)生老年斑、神經(jīng)元丟失是阿爾茨海默病的典型病理特征，Aβ可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，造成神經(jīng)功能障礙[2]。細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激平衡與抗氧化酶活性有關(guān)，GSH-Px、SOD是常見(jiàn)的抗氧化酶，其活性降低可以誘導(dǎo)氧自由基積累，誘導(dǎo)脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化，產(chǎn)生MDA，造成氧化損傷[14]。氧自由基還可以激活細(xì)胞凋亡途徑，加快細(xì)胞凋亡[15]。Bax和Bcl-2是Bcl-2蛋白家族成員，二者表達(dá)改變與細(xì)胞凋亡水平相關(guān)[16]。Bax在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)作用，Bcl-2在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮抑制作用，Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)變化共同影響細(xì)胞凋亡[17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Aβ25-35處理后的PC12細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)增多，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，細(xì)胞增殖活性下降，GSH-Px、SOD含量降低，MDA含量升高，Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷，提示成功構(gòu)建了阿爾茨海默病體外細(xì)胞模型。

牛蒡子苷元是一種木脂素類(lèi)化合物，可用于治療麻疹、風(fēng)熱感冒，現(xiàn)代藥理學(xué)還證明牛蒡子苷元具有降血糖、抗菌、抗腫瘤等功效[18]。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病也具有改善功效，牛蒡子苷元治療后的阿爾茨海默病小鼠神經(jīng)記憶功能明顯改善[6-7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，牛蒡子苷元處理后的阿爾茨海默病PC12細(xì)胞增殖活性升高，細(xì)胞凋亡減少，細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)減少，Bcl-2蛋白表達(dá)增多，GSH-Px、SOD含量升高，MDA含量降低，牛蒡子苷元改善阿爾茨海默病PC12細(xì)胞氧化損傷，減少細(xì)胞凋亡，我們首次在體外阿爾茨海默病細(xì)胞模型中證明了牛蒡子苷元的作用，并且說(shuō)明牛蒡子苷元可能是阿爾茨海默病的治療藥物。

牛蒡子苷元的藥理學(xué)作用廣泛，但其分子作用機(jī)制尚不明確。研究表明，牛蒡子苷元可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路發(fā)揮作用。牛蒡子苷元在改善阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的同時(shí)可促進(jìn)AKT磷酸化，牛蒡子苷元作用機(jī)制可能與AKT信號(hào)通路有關(guān)[7]。AKT是一個(gè)具有廣泛作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化、衰老、自噬等過(guò)程[19-21]。已知AKT信號(hào)在阿爾茨海默病中激活水平降低，而激活A(yù)KT信號(hào)可改善阿爾茨海默病進(jìn)展[22]。本實(shí)驗(yàn)表明，牛蒡子苷元提高了阿爾茨海默病PC12細(xì)胞中p-AKT磷酸化水平，并且AKT信號(hào)抑制劑可逆轉(zhuǎn)牛蒡子苷元對(duì)阿爾茨海默病PC12細(xì)胞增殖、凋亡和氧化損傷的作用，這進(jìn)一步驗(yàn)證了牛蒡子苷元可通過(guò)激活A(yù)KT信號(hào)影響阿爾茨海默病PC12細(xì)胞損傷，首次發(fā)現(xiàn)牛蒡子苷元影響阿爾茨海默病體外細(xì)胞模型凋亡和氧化損傷的機(jī)制與AKT信號(hào)有關(guān)。

綜上所述，牛蒡子苷元具有抗阿爾茨海默病作用，其可以通過(guò)激活A(yù)KT信號(hào)抑制阿爾茨海默病PC12細(xì)胞凋亡和氧化損傷，這為牛蒡子苷元治療阿爾茨海默病的臨床使用提供了理論支撐。以后實(shí)驗(yàn)中會(huì)繼續(xù)分析牛蒡子苷元其他可能作用機(jī)制和具體分子靶向機(jī)制。

參考文獻(xiàn)

[1]周成成，梁幼雅，劉四軍，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討當(dāng)歸芍藥散治療阿爾茨海默病的作用機(jī)理[J].中醫(yī)雜志，2019，60（9）：784-789.

[2]Wu HX，Hao EW，Du ZC，et al.Research Progress on the Intervening Effects of Active Components of Chinese Herbs on Amyloid-Beta-Induced Injury of Neural Cells[J].World J Tradit Chin Med，2019，5（2）：122-130.

[3]Lee YJ，Nam HS，Cho MK，et al.Arctigenin induces necroptosis through mitochondrial dysfunction with CCN1 upregulation in prostate cancer cells under lactic acidosis[J].Mol Cell Biochem，2020，467（1-2）：45-56.

[4]趙輝，賈莉，袁莉，等.牛蒡子苷元對(duì)高糖刺激大鼠系膜細(xì)胞VEGF和PDGF-BB表達(dá)的影響[J].河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，15（5）：633-634.

[5]Huang J，Xiao L，Wei JX，et al.Protective effect of arctigenin on ethanol-induced neurotoxicity in PC12 cells[J].Mol Med Rep，2017，15（4）：2235-2240.

[6]Zhu Z，Yan J，Jiang W，et al.Arctigenin effectively ameliorates memory impairment in Alzheimer′s disease model mice targeting both β-amyloid production and clearance[J].J Neurosci，2013，33（32）：13138-13149.

[7]張軍，孫佳佳，劉穎，等.益氣養(yǎng)陰活血方對(duì)2型糖尿病大鼠PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2020，26（6）：759-763，824.

[8]Chen Z，Li L，Wu W，et al.Exercise protects proliferative muscle satellite cells against exhaustion via the Igfbp7-Akt-mTOR axis[J].Theranostics，2020，10（14）：6448-6466.

[9]Li L，Xu Y，Zhao M，et al.Neuro-protective roles of long non-coding RNA MALAT1 in Alzheimer′s disease with the involvement of the microRNA-30b/CNR1 network and the following PI3K/AKT activation[J].Exp Mol Pathol，2020，117：104545.

[10]Ma S，Zhang C，Zhang Z，et al.Geniposide protects PC12 cells from lipopolysaccharide-evoked inflammatory injury via up-regulation of miR-145-5p[J].Artif Cells Nanomed Biotechnol，2019，47（1）：2875-2881.

[11]Yang Z，Wang L，Hu Y，et al.Butorphanol protects PC12 cells against OGD/R-induced inflammation and apoptosis[J].Mol Med Rep，2020，22（3）：1969-1975.

[12]Wu L，Xi Y，Kong Q.Dexmedetomidine protects PC12 cells from oxidative damage through regulation of miR-199a/HIF-1α[J].Artif Cells Nanomed Biotechnol，2020，48（1）：506-514.

[13]Chen T，Liu S，Zheng M，et al.The effect of geniposide on chronic unpredictable mild stress-induced depressive mice through BTK/TLR4/NF-κB and BDNF/TrkB signaling pathways[J].Phytother Res，2021，35（2）：932-945.

[14]常永霞，李姣，侯文麗，等.滌痰湯合桃紅四物湯加減對(duì)腦梗死恢復(fù)早期痰瘀阻絡(luò)證腦神經(jīng)的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2021，27（1）：135-140.

[15]El Kiki SM，Omran MM，Mansour HH，et al.Metformin and/or low dose radiation reduces cardiotoxicity and apoptosis induced by cyclophosphamide through SIRT-1/SOD and BAX/Bcl-2 pathways in rats[J].Mol Biol Rep，2020，47（7）：5115-5126.

[16]車(chē)昊，馬駿.右美托咪定對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的防護(hù)作用及機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)藥，2021，16（5）：758-762.

[17]文建庭，劉健，王馨，等.新風(fēng)膠囊含藥血清對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞凋亡和炎癥的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2021，（2）：436-443.

[18]王哲，王佳賀.牛蒡子苷元藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2018，15（32）：50-53.

[19]武丹，羅馨，賈金虎，等.微小RNA-199a對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的抑制作用機(jī)制研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2021，37（1）：23-26.

[20]吳林斌，吳元肇，李曉丹，等.連翹苷經(jīng)PI3K/Akt信號(hào)通路干預(yù)腎細(xì)胞癌的機(jī)制研究[J].中草藥，2019，50（10）：2377-2382.

[21]王洋，趙福紅，宮銘海，等.蛋白質(zhì)組學(xué)在阿爾茨海默病早期診斷及中醫(yī)藥防治中的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2021，27（16）：227-236.

[22]Liu NX，Li QH.LncRNA BC200 regulates neuron apoptosis and neuroinflammation via PI3K/AKT pathway in Alzheimer′s disease[J].J Biol Regul Homeost Agents，2020，34（6）：2255-2261.

（2021-09-01收稿?責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）