基于2′，4′-二氟聯(lián)苯基的新型1，2，4-三氮唑類化合物的合成及其抗真菌活性

陳 勇，魏文博，段坤坤，方家寶，張尹超，楊占濤

(安陽師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院, 河南 安陽 455000)

真菌感染是十分常見的疾病，它能夠造成皮膚、粘膜等淺表皮處的感染，這類真菌感染中最常見的是皮膚癬菌病.真菌也可以造成皮下組織等深部感染，可侵犯內(nèi)臟及腦膜等處，甚至引起全身播散性感染，既侵襲性真菌感染.引起的疾病如真菌性腸炎，腦膜炎等，嚴(yán)重的狀況下，會(huì)造成人的死亡.近年來，隨著高效廣譜抗生素、免疫抑制劑、抗惡性腫瘤藥物的廣泛應(yīng)用，器官移植、體內(nèi)置管以及久駐ICU病人的增加，侵襲性真菌感染引起的發(fā)病率和致死率逐年上升，已成為危害人類健康的嚴(yán)重威脅之一[1-6].當(dāng)前，2019新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，簡稱SARS-CoV-2)引起的新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，簡稱COVID-19) 仍在全球肆虐并引起了全球性關(guān)注，新型冠狀病毒肺炎傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高，重癥患者病死率高.重癥新冠肺炎患者具備侵襲性真菌感染發(fā)生的高危因素，且已有重癥病例出現(xiàn)繼發(fā)或合并真菌感染報(bào)告[7].藥物治療是應(yīng)對(duì)侵襲性真菌感染的主要方法，然而已有的抗真菌藥物種類有限，致病性真菌對(duì)這些藥物產(chǎn)生耐藥性，大部分藥物還具有毒副作用等問題，使得研發(fā)新的抗真菌藥物成為必要.

氮唑類抗真菌藥物是目前常用的一類抗真菌藥物，按照藥物的分子結(jié)構(gòu)可分為咪唑類和三氮唑類.氮唑類藥物的作用機(jī)制：通過抑制ERGl1基因編碼的14α-羊毛甾醇脫甲基酶(CYP51)，抑制真菌細(xì)胞膜中的羊毛甾醇轉(zhuǎn)化為麥角甾醇，并使毒性的甾醇產(chǎn)物在真菌細(xì)胞中積累，從而抑制真菌的生長與復(fù)制[8-9].咪唑類抗真菌藥物(咪康唑，酮康唑等)是一類開發(fā)較早，抗真菌活性較高，但毒副作用較大，主要用于淺表真菌感染的治療.后來科研工作者研制出了三氮唑類抗真菌藥，相對(duì)于咪唑類抗真菌藥，三氮唑類抗真菌藥具有毒性較低，抗菌譜較廣，可用于治療深部真菌感染引起的疾病.但是三氮唑類抗真菌藥久用易使真菌產(chǎn)生耐藥性，藥效漸弱.為此研究者通過不斷的改進(jìn)藥物分子的結(jié)構(gòu)，來應(yīng)對(duì)致病性真菌的耐藥性，進(jìn)而提高三氮唑類抗真菌藥的療效.研究者先后研制出了第一代三氮唑類抗真菌藥氟康唑、伊曲康唑等；第二代三氮唑類抗真菌藥伏立康唑、沙伯康唑等；最新上市的三氮唑類抗真菌藥艾沙康唑[9-11].

目前臨床上可用于治療深部真菌感染的藥物除三唑類抗真菌藥物外，還有多烯類抗真菌抗生素兩性霉素B(Amphotericin B)、制霉菌素A1(Nystatin A1)；棘白菌素類抗真菌藥卡泊芬凈(Caspofungin)、米卡芬凈(Micafungin)[12-14].三唑類抗真菌藥物作為一類全合成化學(xué)藥，可利用有機(jī)合成的多樣性，用有機(jī)合成的方法，合成種類繁多，結(jié)構(gòu)新穎的具有潛在抗真菌活性的化合物，進(jìn)而可在此基礎(chǔ)上開發(fā)出高效、低毒、廣譜的抗真菌藥物.因此，三唑類抗真菌藥仍是目前臨床上用于治療深部真菌感染的主要藥物.

盡管科研工作者已經(jīng)開發(fā)了多個(gè)分子結(jié)構(gòu)不同的三唑類抗真菌藥物，但由于多種原因?qū)е碌恼婢腥镜募膊∫苍谠龆啵F(xiàn)有的抗真菌藥物也存在一定的毒副作用，尤其是真菌耐藥性的增加，所有這些均給真菌感染疾病的治療帶來困難.因此開發(fā)新型高效、低毒的抗真菌藥物仍有必要[15-18].

為了應(yīng)對(duì)致病性真菌對(duì)現(xiàn)有藥物產(chǎn)生的耐藥性，并提高藥物的藥效性，一個(gè)有效的方法是對(duì)原有藥物的分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行化學(xué)修飾[19-21].已用于臨床的三唑類抗真菌藥多以2，4-二氟苯基為分子骨架，通過不斷地化學(xué)修飾，分別開發(fā)出了一、二、三代三唑類抗真菌藥[8-9].從藥物開發(fā)的實(shí)踐看，聯(lián)苯基是構(gòu)成藥物分子的理想結(jié)構(gòu)片段，根據(jù)藥物分子設(shè)計(jì)原理中的結(jié)構(gòu)骨架變換原則[22]，新藥的創(chuàng)制是在發(fā)現(xiàn)活性分子基礎(chǔ)上的骨架變換.因此，本研究以已有的唑類抗真菌藥物的構(gòu)效關(guān)系為基礎(chǔ)，依據(jù)藥物分子設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)并合成以 2，4-二氟代聯(lián)苯基為分子骨架的新型三氮唑化合物.合成路線如Scheme 1所示.

Scheme 1 目標(biāo)化合物的合成路線 Scheme 1 The synthetic route of the title compounds

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

ACQUITYTMUPLC/LCT Premier XE型高分辨液相質(zhì)譜儀(美國Waters公司)；Am-400型核磁共振儀(德國Bruker公司).

試劑：2，4-二氟聯(lián)苯、 三甲基碘化亞砜、十六烷基三甲基溴化銨、CDCl3、d6-DMSO(分析純，阿拉丁)、1-(4-三氟甲基苯甲基)哌嗪、高氯酸鋰、1-(4-三氟甲基嘧啶-2-基)-哌嗪，1-(3-硝基吡啶-2-基)-哌嗪、4-碘苯磺酰氯、4-甲基苯磺酰氯、對(duì)氟苯甲酰氯、對(duì)苯甲酰氯、對(duì)氰基苯甲酰氯、2-呋喃甲酰氯、2-噻吩甲酰氯、環(huán)丙基(哌嗪-1-基)甲酮、三乙胺(分析純，阿拉丁)；四氫呋喃、乙酸乙酯、石油醚、乙腈、二氯甲烷(分析純，科密歐)；柱層析硅膠(青島海洋化工廠)54～57 μm.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 目標(biāo)化合物的合成

1) 1-[2′，4′-二氟-(1，1′-聯(lián)苯基)-4-基]-2-氯乙酮 (2) 和1-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4基)-2-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-乙酮(3)的合成同文獻(xiàn)[23].

2) 1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-2，3-環(huán)氧丙烷(4)的合成向反應(yīng)瓶中加入1.55 g (5.19 mmol) 化合物3、1.26 g (5.72 mmol) 三甲基碘化亞砜、0.19 g十六烷基三甲基溴化銨、13 mL的甲苯和2 mL NaOH(aq. 20 %)，控溫60 ℃，攪拌反應(yīng)1.5 h.向反應(yīng)后的混合溶液加入25 mL乙酸乙酯，轉(zhuǎn)入分液漏斗，混合液用水洗滌，洗滌后的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥.減壓蒸去溶劑，余物用石油醚：乙酸乙酯(V∶V=1∶1)的展開劑過硅膠色譜柱，得到0.89 g棕紅色粘稠狀化合物4，產(chǎn)率54.9 %.

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C17H14F2N3O: 314.1105; found: 314.1112.

3) {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯基-4-基)-3-(-1-哌嗪基)}-2-丙醇(5a)的合成

把11.25 mL的乙醇和11.25 mL的THF加入反應(yīng)瓶中，搖勻，配成混合溶劑；再向反應(yīng)瓶中加入0.48 g (5.6 mmol)哌嗪、1.17 g (3.75 mmol)化合物4和1.25 ml的三乙胺，在65 ℃下攪拌反應(yīng) 7 h.反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)瓶中加入25 mL蒸餾水，把反應(yīng)瓶中的混合液轉(zhuǎn)入分液漏斗，混合液用25 mL×2乙酸乙酯萃取，萃取液用無水硫酸鎂干燥，旋蒸除去溶劑，余物過硅膠色譜柱，先用乙酸乙酯作洗脫劑，把少量雜質(zhì)先行洗脫除去，待產(chǎn)物流出后，改用甲醇作洗脫劑，得1.11 g白色固體產(chǎn)物化合物5a，產(chǎn)率 88.5%.

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C21H24F2N5O: 400.1949; found: 400.1942.

4) {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-氯苯基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(5b)的合成

稱取0.106 7 g (0.34 mmol )化合物4，0.098 3 g(0.5 mmol )1-[(4-氯苯基)]-哌嗪，0.106 g (1 mmol)LiClO4及4 mL乙腈加入 到反應(yīng)瓶中，在85 ℃下，攪拌18 h.然后，向反應(yīng)混合物中加入10 mL蒸餾水并用乙酸乙酯(15 mL×2)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，旋蒸除去有機(jī)溶劑，余物進(jìn)行硅膠色譜分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯(V∶V)=1∶1，得0.116 g橙紅色蠟狀物化合物5b，產(chǎn)率為67.1%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.14 (s，1H)，7.90 (s，1H)，7.49 (d，J=29.6 Hz，4H)，7.42 (dd，J=15.2，8.6 Hz，1H)，7.17 (d，J=8.9 Hz，2H)，6.95 (dt，J=19.2，8.6 Hz，2H)，6.75 (d，J=8.9 Hz，2H)，4.84 (s，1H)，4.48 (d，J=14.3 Hz，1H)，4.37 (d，J=14.3 Hz，1H)，3.06 (s，1H)，3.01 (t，J=4.8 Hz，4H)，2.77 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.52 (dd，J=10.4，5.3 Hz，2H)，2.44 (dd，J=10.5，5.2 Hz，2H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.64，161.09，158.54，151.17，149.56，144.88，143.07，134.33，131.33，129.08，128.94 (2C)，125.35 (2C)，124.77，117.20 (2C)，111.75，111.55，104.45，73.02，63.66，58.07，54.21 (2C)，49.21 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C27H27ClF2N5O: 510.1872; found: 510.1883.

5) 化合物5c～5e的合成方法和化合物5b的合成方法相同.

① {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-三氟甲基苯甲基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(5c)的合成

橙色蠟狀產(chǎn)物，產(chǎn)率 45.0%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.13 (s，1H)，7.88 (s，1H)，7.61～7.46 (m，6H)，7.43～7.35 (m，3H)，7.00～6.86 (m，2H)，4.43 (d，J=14.3 Hz，1H)，4.33 (d，J=14.3 Hz，1H)，3.85 (s，1H)，3.52 (d，J=13.5 Hz，1H)，3.44 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.99 (d，J=13.3 Hz，1H)，2.72 (d，J=13.3 Hz，1H)，2.38 (s，2H)，2.32 (s，6H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.65，161.15，158.35，151.21，149.66，144. 81，143.05，134.23，131.38，129.12，128.97 (2C)，125.29 (2C)，124.81，123.78，117.23 (2C)，111.63，111.56，104.48，73.24，65.39，64.59，58.12，54.37 (2C)，48.22 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C29H29F5N5O: 558.2292; found: 558.2285.

② {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-三氟甲基嘧啶-2-基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(5d)的合成

黃色蠟狀物，產(chǎn)率56.4%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.43 (d，J=4.7 Hz，1H)，8.14 (s，1H)，7.89 (s，1H)，7.52 (s，4H)，7.41 (dd，J=15.2，8.5 Hz，1H)，6.94 (dt，J=19.2，8.6 Hz，2H)，6.72 (d，J=4.8 Hz，1H)，4.91 (s，1H)，4.48 (d，J=14.3 Hz，1H)，4.38 (d，J=14.3 Hz，1H)，3.73 (s，4H)，3.03 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.77 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.42 (dd，J=10.7，5.4 Hz，2H)，2.34 (dd，J=10.6，5.3 Hz，2H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.63，161.13，160.02，158.53，156.20，151.17，144.89，142.98，134.38，131.34，129.09，128.89，125.32(2C)，121.87，119.13，111.73，111.52，104.87，73.13，63.90，58.01，54.13 (2C)，43.65 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C26H25F5N7O: 546.2041; found: 546.2035.

③ {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(3-硝基吡啶-2-基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(5e)的合成

橙紅色蠟狀物，產(chǎn)率為61.0%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.31～8.24 (m，1H)，8.13 (s，1H)，8.08 (dd，J=8.0，1.5 Hz，1H)，7.89 (s，1H)，7.51 (s，4H)，7.47～7.36 (m，1H)，7.03～6.88 (m，2H)，6.73 (dd，J=8.0，4.5 Hz，1H)，4.84 (s，1H)，4.47 (d，J=14.3 Hz，1H)，4.37 (d，J=14.3 Hz，1H)，3.45～3.32 (m，2H)，3.33～3.22 (m，2H)，3.05 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.76 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.52～2.43 (m，2H)，2.43～2.32 (m，2H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.63，161.09，158.53，152.54，151.69，151.19，144.89，142.90，135.51，134.40，133.16，131.36，129.12，129.10，125.30 (2C)，113.68，111.62，104.43，73.13，63.80，58.00，54.04 (2C)，47.93 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C26H26F2N7O3: 522.2065; found: 522.2071.

6) {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-碘苯磺酰基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(6a)的合成

把399 mg(1 mmol)化合物5a、303 mg(1 mmol)4-碘苯磺酰氯、15 mL新蒸的二氯甲烷和320 μL三乙胺加入到反應(yīng)瓶中.室溫條件下磁力攪拌9 h.反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物旋蒸除去溶劑，余物過硅膠色譜柱，洗脫劑為乙酸乙酯，濃縮后得到245 mg黃色固體化合物6a，產(chǎn)率為36.8%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.05 (s，1H)，7.90 (d，J=8.4 Hz，2H)，7.86 (s，1H)，7.51～7.35 (m，7H)，7.01～6.87 (m，2H)，4.50 (s，1H)，4.41 (d，J=14.4 Hz，1H)，4.30 (d，J=14.4 Hz，1H)，2.99 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.88 (s，4H)，2.69 (d，J=13.6 Hz，1H)，2.50～2.42 (m，2H)，2.42～2.30 (m，2H).

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.65，161.07，158.52，151.25，149.56，144.85，142.52，138.43(2C)，134.47，131.3(2C)，129.04(2C)，125.23 (2C)，124.36，111.78，104.48，100.60，74.58，63.42，57.74，53.44 (2C)，45.90 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C27H27IF2N5O3S: 666.0847; found: 666.0853.

7) {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-甲基苯磺?；?-1-哌嗪基]}-2-丙醇(6b)的合成方法和化合物(6a)相同.

黃色蠟狀固體0.209 6 g，產(chǎn)率47.4%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.05 (s，1H)，7.87 (s，1H)，7.59 (d，J=8.2 Hz，2H)，7.44 (dt，J=14.1，7.4 Hz，5H)，7.34 (d，J=8.0 Hz，2H)，6.95 (ddd，J=19.3，9.3，7.2 Hz，2H)，4.56 (s，1H)，4.40 (d，J=14.4 Hz，1H)，4.29 (d，J=14.4 Hz，1H)，3.00 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.87 (s，4H)，2.69 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.46 (s，3H，—CH3)，2.45～2.32 (m，4H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 163.64，161.11，158.48，151.28，149.51，144.75，142.62，139.54，134.47，132.38(2C)，131.34(2C)，129.04(2C)，125.23 (2C)，124.36，111.78，104.48，74.58，63.42，57.74，53.44 (2C)，45.90 (2C)，24.58 (—CH3)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C28H30F2N5O3S: 554.2037; found: 554.2044.

8) {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-氟苯甲酰基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7a)的合成

稱取100 mg (0.25 mmol) 化合物5a、39.6 mg(0.25 mmol) 對(duì)氟苯甲酰氯、3 mL新蒸的二氯甲烷和50.6 mg (0.5 mmol) 三乙胺加入到反應(yīng)瓶中，在磁力攪拌下，室溫反應(yīng)8 h.待反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合液旋蒸除去溶劑，余物過硅膠色譜柱，洗脫劑為純乙酸乙酯，得到72 mg灰白色固體化合物7a，產(chǎn)率為55.3%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.17 (s，1H)，8.08 (s，1H)，7.91 (s，1H)，7.43～7.28 (m，4H)，7.11 (t，J=8.6 Hz，1H)，7.05 (t，J=8.5 Hz，2H)，6.92 (m，3H)，5.51 (s，1H)，4.48 (d，J=14.4 Hz，1H) 4.37 (d，J=14.4 Hz，1H)，3.76～3.27 (m，4H)，3.04 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.76 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.49～2.28 (m，4H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 169.52，164.78，163.74，161.01，158.64，151.11，142.71，134.58，132.62，132.53，131.42(2C)，129.13(2C)，125.35 (2C)，124.45，115.63(2C)，111.87，104.56，77.36，73.31，63.82，58.03 (2C)，53.99 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C28H27F3N5O2: 522.2117; found: 522.2109.

9) 化合物7b～7f的合成方法和化合物7a的合成方法相同.

① {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-氯苯甲?；?-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7b)的合成

棕色蠟狀固體，產(chǎn)率為41.6%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.13 (s，1H)，7.89 (s，1H)，7.48 (s，4H)，7.42～7.32 (m，3H)，7.28 (d，J=2.1 Hz，2H)，6.97～6.86 (m，2H)，4.47 (d，J=14.4 Hz，1H)，4.36 (d，J=14.4 Hz，1H)，3.73 (s，1H)，3.40 (d，J=105.0 Hz，4H)，3.02 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.75 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.47 ～2.17 (m，4H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 169.20 (C=O)，163.62，161.05，158.48，151.12，144.89，142.64，135.93，134.46，133.67，131.27，129.13(2C)，128.77(2C)，128.54(2C)，125.25 (2C)，124.35，111.67，104.46，73.25，63.74，57.87 (2C)，54.31 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C28H27ClF2N5O2: 538.1821; found: 538.1827.

②{1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(4-氰基苯甲酰基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7c) 的合成

棕色蠟狀物固體產(chǎn)物，產(chǎn)率50.8%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.13 (s，1H)，7.89 (s，1H)，7.72 (d，J=8.3 Hz，1H)，7.65 (d，J=8.2 Hz，1H)，7.47 (s，3H)，7.42 (d，J=8.2 Hz，1H)，7.39～7.32 (m，1H)，6.99～6.84 (m，1H)，5.12 (s，1H)，4.42 (dd，J=47.0，14.4 Hz，2H)，3.65 (d，J=71.0 Hz，2H)，3.21 (s，1H)，3.02 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.75 (d，J=13.5 Hz，1H)，2.35 (dd，J=81.2，31.8 Hz，3H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 168.16 (C=O)，163.61，161.04，158.45，150.96，144.90，142.50，139.69，134.48，132.26(2C)，129.13(2C)，127.69(2C)，125.25(2C)，124.30，117.94，115.99，113.61，111.70，104.46，73.37，63.74，57.81(2C)，54.24(2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C29H27F2N6O: 529.2164; found: 529.2158.

③ {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(呋喃甲酰-2-基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7d)的合成

紫色蠟狀固體化合物，產(chǎn)率為48.5%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.18 (s，1H)，7.93 (s，1H)，7.60 (s，1H)，7.51 (s，4H)，7.45～7.42 (m，1H)，7.03～6.87 (m，3H)，6.45 (dd，J=3.4，1.7 Hz，1H)，4.65 (s，1H)，4.49 (d，J=14.4 Hz，2H)，4.40 (d，J=14.4 Hz，2H)，3.71 (s，4H)，3.08 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.83 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.48 (d，J=5.5 Hz，2H)，2.40 (s，2H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 165.87(C=O)，163.70，161.44，158.97，150.92，147.60，144.88，143.77，142.57，134.50，131.32，129.16(2C)，125.26 (2C)，124.48，118.14，111.88，111.34，104.46，73.13，63.67，58.09 (2C)，54.44 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C26H26F2N5O3: 494.2004; found: 494.2009.

④ {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(噻吩甲酰-2-基)-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7e)的合成

紫紅色蠟狀固體化合物，產(chǎn)率為46.5%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.13 (s，1H)，7.90 (s，1H)，7.51 (s，4H)，7.41 (td，J=8.8，5.7 Hz，2H)，7.24～7.18 (m，1H)，7.00 (dd，J=4.9，3.7 Hz，1H)，6.94 (dd，J=9.3，6.7 Hz，2H)，4.64 (s，1H)，4.48 (d，J=14.4 Hz，1H)，4.37 (d，J=14.4 Hz，1H)，3.62 (s，4H)，3.17 (s，1H)，3.05 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.78 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.47 - 2.39 (m，2H)，2.34 (d，J=4.5 Hz，2H)．

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 166.78( C=O )，163.89，161.26，158.47，150.68，144.85，143.87，142.67，134.52，131.35，130.82，130.65，130.18，129.18(2C)，128.12，125.26 (2C)，124.48，111.76，104.64，73.21，63.69，58.12 (2C)，54.35 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C26H26F2N5O2S: 510.5787; found: 510.5794.

⑤ {1-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)-2-(2′，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)-3-[4-(環(huán)丙甲?；?-1-哌嗪基]}-2-丙醇(7f)的合成

黃色蠟狀化合物，產(chǎn)率為62.9%.

1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.11 (s，1H)，7.88 (s，1H)，7.50 (s，4H)，7.40 (td，J=8.6，6.6 Hz，1H)，7.04 - 6.80 (m，2H)，4.47 (d，J=14.3 Hz，1H)，4.37 (d，J=14.3 Hz，1H)，3.79 (s，1H)，3.53 (s，4H)，3.00 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.75 (d，J=13.4 Hz，1H)，2.37 (s，2H)，2.34～2.22 (m，2H)，1.68～1.58 (m，1H)，0.92 (dt，J=6.4，3.2 Hz，2H)，0.71 (dd，J=7.8，3.0 Hz，2H).

13C NMR (101 MHz，CDCl3) δ 171.88 (C=O)，163.64，161.08，158.52，151.20，144.86，142.87，134.40，131.32，129.09(2C)，125.29 (2C)，124.45，111.74，111.53，104.44，73.21，63.82 (2C)，57.95 (2C)，10.84，7.31 (2C)．

HMRS-ESI:m/z[M+H] calcd. for C25H28F2N5O2: 468.2211; found: 468.2218.

1.2.2 目標(biāo)化合物的體外抑菌試驗(yàn) 以氟康唑和酮康唑?yàn)殛栃詫?duì)照藥物，以白色念珠菌(Candidaalbicans)；新型隱球菌(Crytococcusneoformans)；紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)三種常見的人體治病真菌作為實(shí)驗(yàn)真菌菌株，參照美國國家臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)化抗真菌敏感性實(shí)驗(yàn)方法[24]，采用96孔微量稀釋法測定目標(biāo)化合物對(duì)各實(shí)驗(yàn)真菌的最低抑菌濃度(MIC80)，既對(duì)實(shí)驗(yàn)真菌生長抑制率為80%時(shí)的最低抑菌濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1．

表1 目標(biāo)化合物的體外抑菌活性Tab.1 In vitro antifungal activity (MIC80 ) of the target compounds /(μg·mL-1)

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)化合物合成條件優(yōu)化

在目標(biāo)化合物的合成中，中間體化合物4的合成是關(guān)鍵步驟，嘗試了不同的反應(yīng)條件對(duì)化合物4收率的影響，由表2可以看出，采用十六烷基三甲基溴化銨為相轉(zhuǎn)移催化劑，甲苯為反應(yīng)溶劑，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用20%NaOH溶液，反應(yīng)溫度60 ℃，反應(yīng)時(shí)間1.5 h得到的反應(yīng)結(jié)果最佳.

表2 不同反應(yīng)條件對(duì)化合物4合成收率的影響Tab.2 Effect of reaction condition on the yield of the synthesis of compound 4

氫氧化鈉溶液濃度過大、反應(yīng)溫度過高、反應(yīng)時(shí)間過長將導(dǎo)致反應(yīng)物中的—OH和生成的化合物4中的環(huán)氧乙烷基進(jìn)一步反應(yīng)，導(dǎo)致環(huán)氧乙烷開環(huán)，副產(chǎn)物增多，產(chǎn)物減少.化合物4和哌嗪反應(yīng)可高產(chǎn)率得到化合物5a.化合物5a在多種溶劑中的溶解性較差，但作為中間體，在較多的二氯甲烷溶劑中和反應(yīng)物酰氯經(jīng)較長時(shí)間反應(yīng)可得到目標(biāo)產(chǎn)物6a，6b，7a～7f，目標(biāo)產(chǎn)物在溶劑中溶解度較大，三乙胺在酰化反應(yīng)中起到縛酸劑的作用，有利于產(chǎn)率的提高.

2.2 圖譜分析

化合物4通過硅膠柱層析分離提純后，得到的為棕紅色粘稠狀物質(zhì)，所含溶劑很難出去，雜質(zhì)峰較多，核磁圖譜不能正確歸屬，但作為中間體不影響下一步反應(yīng).化合物5a經(jīng)分離純化后得到是白色固體產(chǎn)物，在CDCl3、d6-DMSO、D2O、CD3OD等溶劑中的溶解性極差，由于溶液濃度過低，核磁圖譜測試沒能成功.

目標(biāo)化合物分子結(jié)構(gòu)的相同之處是都含2，4-二氟聯(lián)苯基、1，2，4-三氮唑環(huán)、哌嗪環(huán)、羥基以及和1，2，4-三氮唑環(huán)、哌嗪環(huán)直接相連的兩個(gè)亞甲基，不同之處在于不同化合物分子分別接入了含有不同取代基的苯環(huán)或芳香雜環(huán). 因此目標(biāo)化合物的1H NMR和13C NMR圖譜在相應(yīng)的位置有相似或接近的化學(xué)位移值，但不同的化合物之間仍稍有差異.1H NMR圖譜中，化學(xué)位移δ 8左右的兩個(gè)單峰，分別為1，2，4-三氮唑環(huán)上的兩個(gè)氫吸收峰；化學(xué)位移δ 7.5～6.5范圍的多個(gè)吸收峰為2，4-二氟聯(lián)苯基苯環(huán)上及分別接入目標(biāo)化合物分子中含不同取代基的苯環(huán)或芳香雜環(huán)上的氫吸收峰，此處氫由于個(gè)數(shù)較多，且相互之間耦合，不同的氫吸收峰重合，峰形復(fù)雜，較難歸屬.—OH上氫的吸收峰為寬展的單峰，由于分子結(jié)構(gòu)的差異，化學(xué)位移值有一定的差異，如：δ 4.84(5b，5c)，δ 4.50(6a)，δ 4.65(7d).和1，2，4-三氮唑環(huán)直接相連的亞甲基(—CH2—)上的氫吸收峰，化學(xué)位移值在δ 4.4左右，不同化合物之間稍有差異.和哌嗪環(huán)上的氮直接相連的亞甲基以及哌嗪環(huán)上的四個(gè)亞甲基上的氫吸收峰，化學(xué)位移值在大多在δ 3.45～2.32范圍內(nèi)，不同化合物之間稍有差異，吸收峰多有耦合分裂現(xiàn)象.化合物7f中在化學(xué)位移值δ 1.68～1.58 (m，1H)，0.92 (dt，J=6.4，3.2 Hz，2H)，0.71 (dd，J=7.8，3.0 Hz，2H) 處的吸收峰是環(huán)丙基上氫原子吸收峰.

13C NMR圖譜中，和氟原子直接相連的苯環(huán)上的碳吸收峰，化學(xué)位移在δ 163，161.分子中其余芳香環(huán)上碳的吸收峰，化學(xué)位移在 δ 158～δ104范圍內(nèi)，不同芳香環(huán)上不同碳原子吸收峰，化學(xué)位移值 δ 有些相差很大，有些非常接近，有些不同碳原子化學(xué)位移值δ完全相同，吸收峰重合，如2，4-二氟聯(lián)苯基不含氟原子的苯環(huán)上其中四個(gè)碳原子化學(xué)位移值 δ 129(2C)，125 (2C).分子中亞甲基(—CH2—)上碳原子吸收峰，化學(xué)位移值在 δ 63～δ 45范圍內(nèi)，其中哌嗪環(huán)上四個(gè)碳的吸收峰，化學(xué)位移值 δ 54 (2C)，48 (2C).和羥基直接相連的季碳吸收峰，化學(xué)位移值δ 75.化合物7f中在化學(xué)位移值δ 10.84，7.31 (2C) 處的吸收峰是環(huán)丙基上碳原子吸收峰.

2.3 目標(biāo)化合物的抗真菌活性

體外抗真菌活性測試結(jié)果表明，大部分目標(biāo)化合物對(duì)參與本實(shí)驗(yàn)的真菌生長有一定的抑制作用，其中目標(biāo)化合物5d，5e，6a，6b，7c的抗真菌活性較好，化合物5d，6a對(duì)白色念珠菌的抑菌活性和酮康唑、氟康唑的抑菌活性相當(dāng)，化合物5d，5e，6a，7c對(duì)紅色毛癬菌的抑菌活性接近酮康唑，優(yōu)于氟康唑.從構(gòu)效關(guān)系看，化合物5b～5e抗真菌活性比較，和哌嗪環(huán)相連的嘧啶(5d)、吡啶(5e)雜環(huán)化合物的抗真菌活性優(yōu)于相連基團(tuán)為苯環(huán)的化合物(5b，5c).和哌嗪環(huán)相連的磺?；惢衔?6a，6b)其抗真菌活性優(yōu)于和哌嗪環(huán)相連的酰基類化合物(7a～7f).

3 結(jié)論

依據(jù)藥物分子設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)合成了以 2，4-二氟代聯(lián)苯基為分子骨架的新型三氮唑化合物.研究了各步合成反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件.分析了目標(biāo)化合物的核磁圖譜，其分子結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振氫譜、碳譜、高分辨質(zhì)譜進(jìn)行確證.測試了目標(biāo)化合物的體外抗真菌活性，測試結(jié)果表明，大部分目標(biāo)化合物對(duì)參與本研究的真菌生長有抑制一定的作用，其中目標(biāo)化合物5d，5e，6a，6b，7c的抗真菌活性較好，化合物5d，6a對(duì)白色念珠菌的抑菌活性和酮康唑、氟康唑的抑菌活性相當(dāng)，化合物5d，5e，6a，7c對(duì)紅色毛癬菌的抑菌活性接近酮康唑，優(yōu)于氟康唑.