秦嶺美味系獼猴桃快繁體系建立試驗

行冰玉

[摘 要] 本研究以秦嶺美味系獼猴桃為對象，對其腋芽和葉片進(jìn)行組織培養(yǎng)，通過探討不同消毒條件和培養(yǎng)基的最佳激素配比，以找到分化培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件，建立秦嶺美味系獼猴桃的高效再生體系。

[關(guān)鍵詞] 獼猴桃;植物組織培養(yǎng);快繁體系

[中圖分類號] S663.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1674-7909（2020）32-88-2

傳統(tǒng)獼猴桃育種方法周期長、工作量大、工作效率低，難以滿足當(dāng)今社會發(fā)展和人們的需求。本文在獼猴桃培育過程中，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，通過快速繁殖苗木，對秦嶺美味系獼猴桃組培快繁過程中的誘導(dǎo)分化、增殖快繁等初步培養(yǎng)技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行研究[1]，并利用莖尖剝離培養(yǎng)提高脫毒效果，不僅可縮短獼猴桃生長周期，提高繁殖速度，優(yōu)化品種，還能增加經(jīng)濟效益。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料取自陜西省西安市周至縣風(fēng)和日麗園藝站的秦嶺美味系獼猴桃，以莖尖或為外植體進(jìn)行本次試驗。

1.2 試驗方法

以MS+蔗糖（30 g/L）+瓊脂（7 g/L）為基本培養(yǎng)基，生長調(diào)節(jié)物質(zhì)采用TDZ（噻苯?。BA（吲哚丁酸）、α-NAA（α-萘乙酸）[2];美味系獼猴桃分化期溫度為22～28 ℃，濕度為50%～70%，光周期時間設(shè)置為24 h（光/暗，14 h/10 h）。4—5月春季萌芽期取材，選取無病害、生長健壯的美味系獼猴桃新稍莖尖，將所選取的大葉去掉，并剪成短枝，用自來水沖洗4～5 h，將表面絨毛的灰塵細(xì)菌等初步清理干凈;然后將材料移至超凈工作臺用70%的酒精浸泡30 s，期間不停搖晃，后用0.1%次氯酸鈉消毒液浸泡12～18 min，接著用無菌水沖洗3～5遍;將消毒好的莖尖在解剖顯微鏡下用解剖針剝離并切取，用濾紙吸干表面水分后培養(yǎng)，切取材料的大小為0.5～1.0 cm[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒時間對外植體的影響

在外植體取材后，必須要對其進(jìn)行消毒處理，選取合適的消毒液種類和設(shè)置合適的消毒時間對外植體的存活率和污染率有很大影響[4]。本試驗中，采摘的外植體用洗潔精浸泡3 min后，流水沖洗6 h，紫外線照射20 min，酒精滅菌30 s后，采用1∶5的次氯酸鈉對獼猴桃腋芽和葉片進(jìn)行消毒，設(shè)置若干個不同消毒時間的處理，7 d后統(tǒng)計莖尖存活率和污染率。

據(jù)表1、表2可知，腋芽和葉片處理時間與消毒效果成正相關(guān)，即處理時間越長，污染率越低，消毒效果越好，但與存活率呈負(fù)相關(guān)，即處理時間越長，存活率越低。因此，綜合分析不同處理可知，選取3號處理即對腋芽消毒16 min為最佳外植體消毒時間;選取3號處理即對葉片消毒12 min為最佳外植體消毒時間。

2.2 分化培養(yǎng)基的篩選

以MS+蔗糖（30 g/L）+瓊脂（7 g/L）為基本培養(yǎng)基，生長調(diào)節(jié)物質(zhì)采用TDZ（噻苯?。?、IBA（吲哚丁酸）、α-NAA（α-萘乙酸）[5]。以腋芽為外植體的再生過程中，需每天觀察莖尖的形態(tài)變化及再生情況。操作大約30 d后，統(tǒng)計不同處理下腋芽的再生頻率和每個外植體再生的不定芽個數(shù)。計算公式如下：不定芽再生頻率/%=再生出不定芽的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)×100%;每外植體再生芽數(shù)=外植體再生出的不定芽總數(shù)/再生出不定芽的外植體數(shù)×100%。試驗數(shù)據(jù)采用Excel2003軟件進(jìn)行分析，應(yīng)用SAS8.0軟件對結(jié)果進(jìn)行差異顯著性（P<0.05）分析。

不同濃度的激素配比對本試驗中美味系獼猴桃莖尖分化的影響如表3所示，在15種激素組合中，激素配比為0.6 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA的8號處理組合對外植體美味系獼猴桃莖尖的再生效果最好，再生率達(dá)到了58.26%，其再生效果顯著高于其他處理組合水平，每個莖尖的平均再生芽數(shù)高達(dá)3.59個。

3 結(jié)論

本試驗表明美味系獼猴桃莖尖組培快繁的最佳消毒時間為用1∶5的次氯酸鈉對腋芽消毒16 min，對葉片消毒12 min;最佳分化培養(yǎng)基為MS+0.6 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA。

參考文獻(xiàn)

[1]李強.軟棗獼猴桃組培快繁體系的建立[J].遼寧林業(yè)科技，2018（4）：34-35.

[2]衣瑞東，杜顯龍，王建萍.“海沃德”獼猴桃組培快繁技術(shù)[J].煙臺果樹，2020（3）：17-18.

[3]趙春莉，湯昊，姚思揚，等.響應(yīng)面法優(yōu)化軟棗獼猴桃組培增殖培養(yǎng)基[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，2019（2）：64-66.

[4]董穎蘋，黃萍，李裕榮，等.獼猴桃組培中控制細(xì)菌污染的研究[J].貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，2001（3）：32-34.

[5]畢海林，吳永斌，楊洪濤，等.硬齒獼猴桃組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)研究[J].云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高山經(jīng)濟植物研究所，2019（5）：23-27.