抑郁癥首次發(fā)病患者內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能變化的初步研究

瞿勝　程麗娟

【摘要】目的：對抑郁癥首次發(fā)病的患者的內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能變化進行初步研究。方法：根據(jù)國際疾病分類第十次修訂本首發(fā)重性抑郁癥的診斷標準判斷中年抑郁癥患者20例是否合格，結(jié)果表明，24項HAMD抑郁量表評分>35分，定為觀察組。選擇正常志愿者20例，判斷24項HAMD抑郁量表，評分<8分，要求志愿者的性別、年齡、受教育程度均與觀察組相當，設(shè)為對照組。分離外周血內(nèi)皮祖細胞并進行體外培養(yǎng)，對于EPC生長情況進行觀察和記錄，通過分析多項指標分析EPC各項，判斷具有分化為內(nèi)皮細胞的特性，進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果：觀察組外周血EPC細胞數(shù)量和細胞增殖率低于對照組，觀察組血清白細胞介素水平超過對照組，超敏反應(yīng)蛋白水平高于對照組，兩個數(shù)據(jù)差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）；（2）Spearman相關(guān)分析顯示，患者組IL-6和TNF—d水平與循環(huán)EPCs的數(shù)量和增殖率呈負相關(guān)（均P<0.05）；（3）多元線性逐步回歸分析顯示，HAMD總分和IL-6水平是循環(huán)EPC數(shù)量的獨立影響因素（均P<0.05）。結(jié)論：抑郁癥首次發(fā)病患者EPC數(shù)量減少，從而證明內(nèi)皮祖細胞數(shù)量減少、功能減退。

【關(guān)鍵詞】抑郁癥、內(nèi)皮祖細胞數(shù)量及功能

【key words 】changes in the number and function of endothelial progenitor cells in patients with first onset of depression were studied. Methods： The revised according to the International Classification of Diseases， Tenth diagnostic criteria for major depression of the first judgment of 20 patients aged depression is qualified， the results showed that 24 HAMD depression scale score> 35 points， as the observation group. Choose healthy volunteers， 20 cases judged 24 HAMD depression scale， score <8 points， requiring volunteers gender， age， educational level and the observation group were quite， as the control group. Peripheral blood progenitor cells isolated and cultured in vitro for EPC growth were observed and recorded， analyzed a number of indicators by analyzing the EPC to determine the characteristics differentiate into endothelial cells， were statistically analyzed. Results： The number of peripheral blood EPC cells and cell proliferation rate than the control group， serum interleukin observation group than in the control group levels， hypersensitivity higher protein levels， two data differences were statistically significant （both P <0.05）； （2） Spearman correlation analysis showed that patients IL-6 and TNF-d levels and the number of circulating EPCs and the proliferation rate was negatively correlated （all P <0.05）； （3） Multiple linear Stepwise regression analysis showed that， HAMD total score and IL-6 levels were independent predictors of the number of circulating EPC （all P <0.05）. Conclusion： The number of EPC first onset of depression in patients with reduced， thereby reducing the number of permits Mingneipizu cell dysfunction.

【key words 】depression， the number and function of endothelial progenitor cells

【中圖分類號】R714.6 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0051-01

隨著社會不斷發(fā)展，人們生活壓力與日劇增，越來越多的人患各種心理精神疾病，抑郁癥是較為嚴重的一種心理疾病，抑郁患者通常表現(xiàn)為遇事消極怠慢，思考問題不樂觀，生活態(tài)度消極低沉。有資料顯示，抑郁癥自殺死亡者占所有自殺的1/3-1/2。病人通常表現(xiàn)為心境低落、悲傷、無希望、興趣和愉快感喪失。患者在治療方面會有巨大的難度，而且會給家庭和家人帶來巨大的壓力。自20世紀中期以后，，其發(fā)病率逐年升高，已成為一個主要的全球性精神問題。經(jīng)過多年的深入研究，學者發(fā)現(xiàn)抑郁癥的發(fā)病因素不僅與心理問題有關(guān)，其血管內(nèi)皮損傷與免疫炎癥激活存在著某種相關(guān)性，可促進心血管病的發(fā)生與發(fā)展。EPC可以在血管修復(fù)的過程中起到非常積極的作用，通過整合到血管中幫助血管再生。EPC是內(nèi)皮細胞的前體細胞，，機體EPC的表達和生長機理在病理、生理、病生多種角度都有深入的研究。本文旨在研究抑郁癥首次發(fā)病患者外周血EPC數(shù)量和功能的關(guān)系?，F(xiàn)將研究結(jié)果作如下匯報。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2011年2月-2013年2月到我院就診的抑郁癥患者20例作為觀察組，年齡45-58歲，平均年齡49.5歲。性別為女，按照國際疾病分類第十次修訂本（ICD-10）重性抑郁癥的診斷標準，判斷24項HAMD抑郁量表評分>35分，均為首次發(fā)作。志愿者應(yīng)保證身體健康，精神狀態(tài)良好，無任何頭部外傷史、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和其他精神障礙性疾病或藥物、酒精依賴者；患者與志愿者都不能有肢體缺陷，無任何磁共振掃描禁忌癥；保證志愿者不能參加其他臨床藥物研究；保證志愿者性別與患者一致，不能處于哺乳期。選取同期與患者居住環(huán)境相同或相似的患者，要求：年齡范圍一致，精神狀態(tài)良好，無其他心理疾病，無酗酒吸毒現(xiàn)象，經(jīng)過標準判斷24項HAMD抑郁量表評分<8分，符合對照要求。

在開始研究之前，與志愿者及其家屬說明實驗方式及過程中存在的風險，并獲得書面的同意證明。

1.2試驗方法

1.2.1分離、培養(yǎng)內(nèi)皮祖細胞 利用15毫升外周血分離內(nèi)皮祖細胞的方法采用密度梯度離心法，密度梯度離心方法是利用成分血之間的密度差異來分開不同成分。這種方法可以得到含EPC的單個核細胞，單個核細胞包括淋巴細胞核單核細胞。用經(jīng)過離心后的細胞應(yīng)培養(yǎng)在特別的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為胎牛血清和生長因子。第7天隨機計數(shù)各組EPC集落和細胞數(shù)目，然后收集部分培養(yǎng)的EPC分別進行下列實驗。細胞密度根據(jù)需要進行調(diào)整，接種到纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)板，培養(yǎng)30min，在細胞貼壁狀態(tài)下進行計數(shù)。將細胞密度做適當調(diào)整，利用細胞毒性試劑盒測定EPC的增殖能力。最后進行遷移方法計數(shù)，調(diào)整細胞密度24小時的培養(yǎng)后，用法，計算改良的Boyden小室小室下層的細胞數(shù)。

1.2.2染色、鑒定內(nèi)皮祖細胞 將分離純化后的含高密度EPC的內(nèi)皮祖細胞放在無菌蓋玻片，加入蛋白進行溶解，在與人體體溫相同狀態(tài)下進行孵育，將蛋白進行吸棄后準備使用。將分離的單個核細胞接種于放入24孔細胞培養(yǎng)板，每孔加入0.5ml，用蓋玻片覆蓋，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)四天培養(yǎng)，將非貼壁細胞用PBS洗脫，換培養(yǎng)液至7天。在乙酞化低密度脂蛋白培養(yǎng)狀態(tài)下繼續(xù)37攝氏度孵育1h。固定細胞10min，浸洗PBS6分鐘，分為三次，。在標本上加入FITC標記的荊豆凝集素，繼續(xù)在37oC下孵育lh，同樣用PBS浸洗3次，每次2min，90%甘油封片。

1.2.3通過染色變化測定祖細胞衰老 根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)細胞并不是能夠連續(xù)不斷分裂增殖的，他們被認為增值能力有限，而不能分裂增殖的細胞就成為進入衰老期。在衰老狀態(tài)下，細胞并未失去生命活性，但是從內(nèi)在來看，其基因組成和蛋白質(zhì)氨基酸表達形式已經(jīng)不再和正常細胞一致。衰老細胞的細胞周期長短分配發(fā)生變化，這類細胞不能再一些常規(guī)刺激下繼續(xù)進行分裂，這種狀態(tài)并不同于一些損傷誘導(dǎo)的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制的情況。關(guān)于細胞衰老的研究中，認為這是生物體滋生避免發(fā)生腫瘤的一種自衛(wèi)方法。細胞進入衰老期首先得表現(xiàn)為體積變大，在酸堿狀態(tài)pH6.O時，p一半乳糖普酶活性非常高。，細胞衰老事實上是生物體老化的一種潛在原因。細胞衰老狀態(tài)下p一半乳糖營酶會被催化為深藍色。通過光學顯微鏡下觀察可以看到變成藍色的細胞或組織。

2結(jié)果

EPC進行試驗的時間基本為七天，鑒定也將在此時間段進行，細胞數(shù)量可以直接反應(yīng)實驗結(jié)果，所以我們將統(tǒng)計內(nèi)皮祖細胞的數(shù)量和增值功能，另外統(tǒng)計各種炎癥因子存在的差異，來反映抑郁癥患者首次發(fā)病時內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能的變化。

2.1采用SPSS12.0軟件包對所有數(shù)據(jù)進行分析，觀察組與對照組內(nèi)皮祖細胞各項因子指數(shù)差異存在統(tǒng)計學意義（P<0.05），具體數(shù)據(jù)見下表。

3討論

1997年，Asahara通過實驗研究發(fā)現(xiàn)了內(nèi)皮祖細胞（endothelialprogenitorcells，EpC）。自此開始打開了內(nèi)皮祖細胞治療血管損傷和缺血區(qū)域血管再生研究的大門。抑郁癥是心血管疾病的獨立危險因素，EPC參與血管內(nèi)皮損傷后修復(fù)、血管新生和損傷血管再內(nèi)皮化過程，對維持血管穩(wěn)定的生物學功能具有重要作用[8，9，10]。首先從外周血中分離提純EPC細胞，EPC細胞是內(nèi)皮祖細胞的前體，是多種表型的表達形式。分離方法采用密度梯度離心法，分離后的到單個核細胞，經(jīng)過培養(yǎng)和選擇最終得到高密度EPC。有了吩咐的實驗原料，才能進行嚴謹周密的實驗。到目前為止，學者們并未給EPC做出一個明確的定義，也沒出現(xiàn)任何一個統(tǒng)一的分離鑒定標準。就目前來看，能夠進行增生分化的成熟內(nèi)皮細胞和能過分化為造血干細胞的細胞定義為EPC。關(guān)于EPC還有待研究，但是可以肯定的是，在血管再生領(lǐng)域內(nèi)皮祖細胞的損傷修復(fù)占有一席之地，可以根據(jù)這個進行心腦血管疾病的研究與治療[11，12，13]。

綜上所述，抑郁癥可減少骨髓來源的循環(huán)EPC數(shù)量和功能，影響內(nèi)皮的修復(fù)能力，并增加機體的免疫炎癥反應(yīng)，兩者可共同促進心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。而EPCs作為心血管疾病的一個新型細胞學生物標記物，其數(shù)量和功能的變化靈敏地反映人群罹患心血管疾病的危險性[14]。因此，抑郁癥首次發(fā)病患者的內(nèi)皮祖細胞數(shù)量降低，功能減弱，而EPC的數(shù)量與之密切相關(guān)，可以證明抑郁癥會誘導(dǎo)產(chǎn)生心血管疾病。腦血管病血管損傷修復(fù)和再生治療領(lǐng)域完全可能以內(nèi)皮祖細胞培養(yǎng)的方法治愈。

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