Plin2在肺癌中的表達及臨床意義

王晶瑩，劉 洋，劉啟迪

(1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 a.檢驗科;b.呼吸內科,吉林 長春130033；2.吉林大學第二臨床醫(yī)院 放射線科)

全球每年的新增肺癌數(shù)量高達180萬，其中一半以上死于該病[1]。流行病學對肺癌的15年生存率調查結果顯示，不同地區(qū)不同疾病進展階段的患者的生存率從4%到17%不等[2]。而較為常規(guī)的治療手段是手術切除[3],此外，肺癌的5年生存率也基于不同的病理分區(qū)，呈現(xiàn)出較大的差異[4]。因此發(fā)現(xiàn)可以用于早期診斷的腫瘤標志物對于改善患者的預后是十分有意義的。

紫蘇脂素2(Plin2)是一種與細胞內脂滴(LDs)代謝有關的蛋白質。然而，對其表達的調控會影響多種代謝和年齡相關疾病的嚴重程度，如脂肪肝、胰島素抵抗和2型糖尿病(T2D)、心血管疾病、動脈粥樣硬化、肌萎縮和癌癥[5,6]，研究顯示該蛋白可能在這些病理狀態(tài)中起作用。本研究目的在于尋找肺癌的差異表達蛋白，探索其作為腫瘤標志物的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象收集手術中切取的新鮮腫瘤組織、正常組織，置于無菌容器內，PBS沖洗，液氮速凍。

1.2 方法通過生物信息數(shù)據(jù)庫TCGA檢索，初步確認Plin2的表達情況，免疫印跡進一步觀察其在肺癌組織及癌旁組織中的差異表達情況，免疫組化染色，探討Plin2的表達意義。

1.3 主要試劑N,N’-亞甲雙丙烯酰胺，蛋白定量試劑盒，甘氨酸，無水乙醇，蛋白抽提試劑盒，丙烯酰胺，DAB 試劑盒，Tris-base，二甲苯。

1.4 統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)采用卡方檢驗，用SPSS12.0軟件分析，P<0.05定義為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TCGA數(shù)據(jù)庫檢索差異表達基因Plin2

通過在線檢索TCGA數(shù)據(jù)庫，搜索肺癌中的差異表達基因，發(fā)現(xiàn)Plin2基因在肺癌組織中的轉錄水平顯著低于癌旁組織。如圖1所示。

圖1 差異表達基因Plin2在TCGA數(shù)據(jù)庫檢索檢索結果

2.2 Plin2在肺癌組織與癌旁組織表達水平的比較

通過免疫印跡法，觀察肺癌以及癌旁組織中Plin2的表達水平，Plin2在肺癌的腫瘤組織的表達水平顯著低于配對的癌旁組織，見圖2。

圖2 Plin2在肺癌及癌旁組織中的表達A:肺癌組織；B：肺癌癌旁組織

2.3 Plin2在結腸腺癌組織與癌旁組織的表達意義

經(jīng)免疫組化染色，我們直觀地看到Plin2的表達，如圖3。分析本研究收集的60例組織樣本，發(fā)現(xiàn)Plin2蛋白在71.2%(43/60)肺癌組織中低表達，僅在46.7%(28/60)肺癌旁組織中低表達(詳見表1)。結果說明：Plin2蛋白在肺癌組織中低表達，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05),見表1。

圖3 Plin2在肺癌及癌旁正常組織中的表達(×200)

表1 肺癌與癌旁組織中Plin2蛋白表達情況對比

3 討論

最近的研究表明，在某些類型的癌癥中，循環(huán)系統(tǒng)[7]和體液(如尿液[8]和癌癥組織)中的Plin2水平都會增加。與健康受試者相比，結直腸癌[7]、伯基特淋巴瘤[9]、肺腺癌[10]、透明細胞癌和乳頭狀腎癌[8]患者的Plin2水平表現(xiàn)出較為明顯的差異。血液或體液中Plin2水平的增加預示著其可能成為早期檢測特定癌癥的潛在有意義的生物標志物[11]。雖然這一研究領域還處于初級階段，但至少對于某些類型的癌癥，Plin2過表達在腫瘤發(fā)生或發(fā)展中的作用是可以進行探索的。有人提出因為Plin2的表達是由HIF-1誘導的，進而推斷Plin2可以通過對缺氧的適應在腫瘤發(fā)生中起作用。本研究以生物信息分析，對肺癌中的差異表達基因進行篩查，發(fā)現(xiàn)Plin2在肺癌中低表達，經(jīng)免疫印跡技術，我們進一步驗證了蛋白Plin2在肺癌中低表達的狀態(tài)?；谇捌诘慕M織標本收集，我們分析了Plin2的表達情況，結果顯示，Plin2在78%的肺癌中低表達，在24%的肺癌癌旁組織中低表達，進而我們認為Plin2可能是肺癌的潛在的腫瘤標志物。